不同痰标本处理方法对结核分枝杆菌罗氏培养检测结果的影响

广东省惠州市结核病防治研究所（516001）骆妙卡 温晓萍 叶小利

结核病是全世界普遍面对的健康问题，对于这一疾病，主要的病因为结核分枝杆菌感染，所以对于结核病，尽早检出结核分枝杆菌对疾病的诊断有重要意义[1]。在结核分枝杆菌的具体检测上，临床中常常是采取细菌学检查的方法，该方法一直以来都被作为临床诊断结核病的“金标准”[2]。在具体行结核分枝杆菌的检查中，常选取痰液标本进行检测，在具体的检测中，痰标本处理方式的不同与检测结果存在紧密的联系。本研究中，探讨了应用不同的痰标本处理手段对于结核分枝杆菌检测结果的影响，旨在为结核病的诊治提供有利参考，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月～2019年1月本院检验中心接收的100份肺结核患者的痰液标本为研究对象。标本对应的患者一般资料如下：男性56例，女性44例；年龄最小者32岁，年龄最大者62岁，平均年龄（48.5±2.4）岁。

1.2 方法

1.2.1 痰液标本采集、处理 进行痰液标本的采集前，嘱咐患者使用无菌的生理盐水漱口，采用无菌棉拭子擦拭口腔以收集口腔内侧痰液。每一名患者均收集3份相同含量的标本。

针对采集到的痰液标本，6h内进行标本的处理。3份痰液标本的处理方法如下：①使用3%HCl进行处理。在痰标本中加入2～4倍量浓度为3%的HCl溶液，将痰标本同HCl溶液进行混匀并在室温环境下放置15～20min。标本的放置过程，可进行3次左右的振荡，让痰液可完全得到液化。之后将试管置入到3000r/min的离心机中持续离心5min，取分离出的上层清液并采用4%的NaOH调节溶液的PH值在中性水平。②使用4%NaOH处理标本。将4%的NaOH的溶液加到采集标本中，加入量为标本2～4倍，混匀后将试管放在室温下20min，同样离心并获取上层清液，之后使用3%的HCl将溶液的PH调节到中性水平。③使用6%H2SO4处理标本。采集到的痰标本加入2～4倍量的6%H2SO4溶液，混合后置入室温下20min，溶液经离心后获取上层清液，应用4%的NaOH将溶液调节为中性水平。

1.2.2 罗氏培养基的制作与接种 选取6 0 0 m l 的豆浸液、2.4 g K H2P O4、0.24gMgSO4·7H2O、0.6g枸橼酸钠盐、3.6g天门冬素、12ml甘油及30g马铃薯淀粉，将上述物质混合加入烧杯中行加热融化。混合后冷却，将2%100ml的新鲜鸡卵液、2%20ml孔雀绿加入其中，之后分装溶液，每个试管均装5ml的溶液，将其置入75℃～80℃的环境下，连续3d，以作备用。选取经过上面处理的痰标本，接种于斜面培养基上，注意将培养基接满，每一份标本均接种两管，同一患者接6管。对各培养基均做相关的标记，之后将培养基放在37℃的孵化箱中进行培养，持续培养3～4周，并且在培养期间做好定期的监测，可每隔3d观察一次。标本的观察方法采取肉眼、抗酸染色、显微镜结合的方式。

1.3 观察指标 ①评价3种方法处理的痰标本检测结核分枝杆菌的阳性情况。判定方法为：肉眼观察培养基上无斜面菌落生长，涂片行抗酸染色后置于显微镜下观察无抗酸菌为阴性；若肉眼观察培养基上有菌落生长，涂片行抗酸染色后若在显微镜下看见抗酸菌落提示为阳性。②判断3组标本的污染率，具体的判定方法上，主要选取适宜标本份数计量，同一标本的2个接种管若均出现污染则确定为污染，如若只是单个接种管受到污染则不认为是污染。

1.4 统计学分析 使用SPSS20.0软件做统计学结果分析，计数资料使用卡方检验，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 阳性率比较 对罗氏培养结果进行观察，结果显示在分枝杆菌检测的阳性率上，使用3%HCl、6%H2SO4这两组处理方法得出的阳性率无显著差异（P＞0.05），使用4%NaOH方法处理的标本阳性率为96.00%，同3%HCl阳性率84.00%、6%H2SO4阳性率83.00%对比差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 标本污染率 对3组标本的污染情况进行分析，结果显示采用3%HCl与6%H2SO4处理的痰标本污染率分别为6.0 0%、7.0 0%，组间对比无显著差异（P＞0.05），使用4%NaOH处理的标本无污染情况，同其他两种处理方法对比差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

对于结核病，采取结核分枝杆菌罗氏培养是临床中常用的诊断方法[3]。在具体的检测中，常采集患者的痰标本进行分枝杆菌罗氏培养[4]。然而虽然说罗氏培养检测的方式可获得显著的检测效果，但是这也是基于对痰标本的科学处理上，因为若对痰标本处理不当，常会引起较高的假阳性率与假阴性率，这让部分患者错过最佳的治疗时机，进而影响患者的预后。

在行结核杆菌罗氏培养检测中，检测操作中采集痰标本是第一步，然后是对标本进行处理[5]。标本的处理是非常关键的操作环节，其目的是对标本中的分枝杆菌进行分离，分离越好后续得出的阳性率也越佳。在处理的操作上，通常是采用酸性或碱性的溶液实现结核杆菌的分离，之后采取酸碱中和的方式获取溶液，最后进行菌种的培养，针对处理操作中溶液的选择，目前尚无准确的结论[6]。基于此，本研究中就探讨了使用3%HCl、6%H2SO4与4%NaOH这3种酸/碱溶液对痰标本的处理效果，结果显示在经相关处理后，结合杆菌罗氏培养检测结果显示采取4%NaOH溶液处理的标本阳性率明显较其他两种溶液处理得出的阳性率高，这一结果表明：采用4%NaOH的溶液对痰标本进行处理，可以在混合20min内尽可能的将标本中的结合杆菌分离出来，如此有助于标本的后续分离培养，这样可显著提升结核分枝杆菌行罗氏培养检测的阳性率[7]。此外研究结果还显示，对三种经不同方法处理的标本污染率进行对比，结果也显示采用4%NaOH的溶液污染率明显较3%HCl与6%H2SO4这两种溶液处理的标本污染率较低，这也提示使用4%NaOH溶液处理痰标本不会对标本的生物学活性产生影响，如此可显著提高标本质量。

综上所述，在结核病行结核分枝杆菌罗氏培养的操作中，对采集到的标本使用4%NaOH的溶液进行处理，可显著提高检测结果的阳性率，降低痰标本污染率，提高结核病的诊断价值，因此值得在临床中大力推广应用。