Plin2在肺癌中的表达及临床意义

王晶莹，刘 洋，刘启迪

(1.吉林大学中日联谊医院 a.检验科;b.呼吸内科,吉林 长春130033；2.吉林大学第二临床医院 放射线科)

全球每年的新增肺癌数量高达180万，其中一半以上死于该病[1]。流行病学对肺癌的15年生存率调查结果显示，不同地区不同疾病进展阶段的患者的生存率从4%到17%不等[2]。而较为常规的治疗手段是手术切除[3],此外，肺癌的5年生存率也基于不同的病理分区，呈现出较大的差异[4]。因此发现可以用于早期诊断的肿瘤标志物对于改善患者的预后是十分有意义的。

紫苏脂素2(Plin2)是一种与细胞内脂滴(LDs)代谢有关的蛋白质。然而，对其表达的调控会影响多种代谢和年龄相关疾病的严重程度，如脂肪肝、胰岛素抵抗和2型糖尿病(T2D)、心血管疾病、动脉粥样硬化、肌萎缩和癌症[5,6]，研究显示该蛋白可能在这些病理状态中起作用。本研究目的在于寻找肺癌的差异表达蛋白，探索其作为肿瘤标志物的意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象收集手术中切取的新鲜肿瘤组织、正常组织，置于无菌容器内，PBS冲洗，液氮速冻。

1.2 方法通过生物信息数据库TCGA检索，初步确认Plin2的表达情况，免疫印迹进一步观察其在肺癌组织及癌旁组织中的差异表达情况，免疫组化染色，探讨Plin2的表达意义。

1.3 主要试剂N,N’-亚甲双丙烯酰胺，蛋白定量试剂盒，甘氨酸，无水乙醇，蛋白抽提试剂盒，丙烯酰胺，DAB 试剂盒，Tris-base，二甲苯。

1.4 统计学处理数据采用卡方检验，用SPSS12.0软件分析，P<0.05定义为有统计学意义。

2 结果

2.1 TCGA数据库检索差异表达基因Plin2

通过在线检索TCGA数据库，搜索肺癌中的差异表达基因，发现Plin2基因在肺癌组织中的转录水平显著低于癌旁组织。如图1所示。

图1 差异表达基因Plin2在TCGA数据库检索检索结果

2.2 Plin2在肺癌组织与癌旁组织表达水平的比较

通过免疫印迹法，观察肺癌以及癌旁组织中Plin2的表达水平，Plin2在肺癌的肿瘤组织的表达水平显著低于配对的癌旁组织，见图2。

图2 Plin2在肺癌及癌旁组织中的表达A:肺癌组织；B：肺癌癌旁组织

2.3 Plin2在结肠腺癌组织与癌旁组织的表达意义

经免疫组化染色，我们直观地看到Plin2的表达，如图3。分析本研究收集的60例组织样本，发现Plin2蛋白在71.2%(43/60)肺癌组织中低表达，仅在46.7%(28/60)肺癌旁组织中低表达(详见表1)。结果说明：Plin2蛋白在肺癌组织中低表达，具有统计学差异(P<0.05),见表1。

图3 Plin2在肺癌及癌旁正常组织中的表达(×200)

表1 肺癌与癌旁组织中Plin2蛋白表达情况对比

3 讨论

最近的研究表明，在某些类型的癌症中，循环系统[7]和体液(如尿液[8]和癌症组织)中的Plin2水平都会增加。与健康受试者相比，结直肠癌[7]、伯基特淋巴瘤[9]、肺腺癌[10]、透明细胞癌和乳头状肾癌[8]患者的Plin2水平表现出较为明显的差异。血液或体液中Plin2水平的增加预示着其可能成为早期检测特定癌症的潜在有意义的生物标志物[11]。虽然这一研究领域还处于初级阶段，但至少对于某些类型的癌症，Plin2过表达在肿瘤发生或发展中的作用是可以进行探索的。有人提出因为Plin2的表达是由HIF-1诱导的，进而推断Plin2可以通过对缺氧的适应在肿瘤发生中起作用。本研究以生物信息分析，对肺癌中的差异表达基因进行筛查，发现Plin2在肺癌中低表达，经免疫印迹技术，我们进一步验证了蛋白Plin2在肺癌中低表达的状态。基于前期的组织标本收集，我们分析了Plin2的表达情况，结果显示，Plin2在78%的肺癌中低表达，在24%的肺癌癌旁组织中低表达，进而我们认为Plin2可能是肺癌的潜在的肿瘤标志物。