粪便涂片检查用于诊断腹泻患者肠道菌群失调中的效果

冯小送，毛亚静

（1. 北京市昌平区中医医院 化验室，北京 102200；2. 北京市昌平区中医医院 疾控科，北京 102200）

0 引言

抗生素具有较强的消炎杀菌效果，因此在临床上得到了越来越广泛的应用，但抗生素的滥用也使得真菌感染、菌群失调引起的肠道疾病发病率越来越高。在人体正常生理情况下，肠道内有正常微生物群，各类菌种之间相互抗衡，使机体达到平衡的状态，而抗生素的滥用使得菌群数量失衡，进而引发慢性腹泻甚至是脱水、炎症性肠病。有文献报道[1]，肠道菌群失调与结肠癌发生有着一定的关系。为了有效预防慢性腹泻、脱水等肠道菌群失调引起的疾病，对于有症状的患者尽早确诊与干预是极为重要的。据此我院对120例慢性腹泻患者进行了粪便涂片检查，以探讨其用于诊断腹泻患者肠道菌群失调的效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料。将我院收治的120例慢性腹泻患者作为本次研究的对象，所有患者均在2018年12月至2020年7月入院，其中男性59例，女性47例；年龄为8-76岁，平均（48.62±1.51）岁；腹泻病程20-50日，平均（22.60±1.61）日，共有82例患者就诊时使用过抗生素。120例患者粪便性状呈糊状22例，黄绿色稀水便76例，脓血粘液便8例。本研究已经伦理会批准，纳入标准：①腹泻时间超过3周或间歇期在2-4周内复发性腹泻；②每日排便3次及以上，粪质稀薄；③依从性良好；④临床资料完整。剔除标准：①合并其他消化系统疾病；②合并其他慢性疾病；③全身感染性疾病；④认知功能障碍者。

1.2 方法。所有患者均接受了大便常规与革兰染色涂片检查。给予患者无菌容器留取适量的新鲜粪便，留取后待检。利用棉签取少量粪便涂在载玻片上，自然干燥固定后染色处理，之后将涂片放于高倍显微镜下进行观察。同时利用棉签取少量新鲜粪便进行细菌培养，在载玻片上 滴2-3滴氯化钠溶液加盖玻片镜检，使用油镜计数，观察样本中真菌或细菌。

1.3 诊断方法。以《肠道菌群粪便涂片检查图谱》中各年龄段及各种菌群失调的菌群图像为基础，对本次研究中的粪便涂片进行观察与诊断，如果患者连续检测两次以上为阳性，则诊断为肠道菌群失调。

1.4 统计学分析。使用EXCEL整理120例慢性腹泻患者粪便涂片检查结果，计数数据以例数、百分比表示。

2 结果

120例慢性腹泻患者中共有106例诊断为肠道菌群失调，51.89%患者为Ⅰ度肠道菌群失调，39.62%患者诊断为Ⅱ度肠道菌群失调，其余患者为Ⅲ度肠道菌群失调。在106例肠道菌群失调患者的粪便涂片中发现革兰阳性菌增多35例，革兰阴性菌增多68例，全菌减少的3例。

3 讨论

慢性腹泻是一种常见的消化系统症状，起病缓慢、病程较长，对患者的日常生活造成了严重的影响，若患者未能及时接受治疗，可以引发脱水等严重后果。慢性腹泻，病因复杂，可能与免疫系统异常、肠道微生态紊乱、感染等因素有关，肠黏膜分泌大量的水与电解质影响其吸收，或者肠道蠕动加快肠腔内容物停留时间过短引发腹泻。肠道微生态与肠道屏障受损后细菌存在着密切的联系，有数据显示，在正常生理情况下，人肠道细菌的细胞数量超过1000个，约占寄居于人体全部微生物总量的78%。肠道细菌包括原籍菌群，即在肠道正常存在的细菌、真菌、螺旋体等，同时还包括外籍菌群。在正常情况下，人体肠道菌群维持着相对平衡的状态，共同发挥着重要的生理作用。而当外界因素发生变化时，肠道内的菌群平衡被打破，从而引发胃肠道疾病[2]。腹泻是临床最为常见的胃肠道疾病，随着人们生活节奏以及饮食习惯的改变，国内约有5%的人群发生慢性腹泄。慢性腹病因较为复杂，可能与药物使用不当、感染、肠道菌群失调等因素有关，大量研究证实，肠道菌群失调是慢性腹泻最常见的致病因素。动物实验证实，对不同程度肠道菌群失调，大鼠模型使用广谱抗生素以后，大鼠肠道内粪便球杆比值发生变化引发肠道菌群失调。国内一项关于抗生素相关性肠道菌群失调的调查显示，头孢他啶、哌拉西林、青霉素等广谱抗生素容易引起肠道菌群失调，其中头孢三代抗生素最易引起肠道菌群失调。从年龄分布情况来看，60岁以下各年龄段肠道菌群失调发生率无明显的差异，而60岁以上人群肠道菌群失调发生率明显上升，说明肠道菌群失调的发生与年龄因素也有着一定的关系。在本研究中，120例慢性腹泻患者中，在就诊时有82例使用过抗生素，其中使用过头孢他啶46例，头孢噻肟钠28例，8例患者使用过两种及以上抗生素，这也证实了抗生素是肠道菌群失调的重要诱因。

早期检测肠道菌群失调已经成为治疗慢性腹泻的重点，而粪便涂片检查是观察肠道菌群失调较快捷与简便的一种检查方法[3-4]。在粪便涂片检查中所选取的粪便样本应为新鲜粪便样本，在使用在玻片前，需使用0.9%的氯化钠溶液进行消毒处理，取不同部位的粪便进行直接涂片制作成检测标本。选择载玻片时尽量避免使用小玻片，涂片后进行染色固定处理，之后使用电子显微镜选取3-5个视野进行观察[5]。使用新鲜粪便进行粪便涂片检查经过染色处理后，可以及时对标本中的菌落数量种类进行精确的测定，有文献报道对急性腹泻患儿进行粪便涂片检查，可见厌氧菌等革兰阳性菌数量明显下降[6]。肠道菌群失衡后，厌氧菌数量减少会加重菌群失调症状以及延长腹泻的持续时间。同时长期使用抗生素等药物也容易使肠道内菌群异位，当厌氧菌等细菌异位至小肠时，小肠内会产生大量游离的胆汁酸进而影响脂类物质吸收加重腹泻。国内有学者指出，轻度菌群失调患者停用抗生素以后症状可明显改善，可在短时间内恢复正常；重度菌群失调患者停用抗生素后，还需要给予微生态制剂治疗以改善肠道微生态环境，使肠道内菌群数量处于平衡状态。在本研究中，120例慢性腹泻患者中有106例被诊断为肠道菌群失调，其中51.89%患者为Ⅰ度肠道菌群失调，39.62%患者诊断为Ⅱ度肠道菌群失调，其余患者为Ⅲ度肠道菌群失调。Ⅰ度肠道菌群失调患者每日稀便次数为3-4次，Ⅱ、Ⅲ度肠道菌群失调患者多为水样泻或带粘液粪便，每日稀便次数较多且持续时间长于Ⅰ度肠道菌群失调患者。另有14例慢性腹泻患者粪便图样检测未见肠道菌群失调情况，其原因主要有合理用药以及密切的临床监测有关，但同时也应考虑其慢性腹泻可能与感染、肠道免疫系统紊乱等因素有关。

临床常使用高倍显微镜进行粪便涂片检测，可以较好地对粪便蓝色涂片中的细菌数量、革兰阳性菌与革兰阴性菌比例、病原菌种类进行观察。在人后肠内，厚壁菌门是主要的低G+C含量的革兰氏阳性菌，变形菌门和拟杆菌门是肠道微生物区系中主要的革兰氏阴性菌，其对于宿主的营养与健康有着重要的意义。国内一项对腹泻儿童粪便涂片检查肠道菌群失调的研究显示，100例腹泻患儿，中革兰阳性球菌超过50%的为38例，格兰阳性菌超过68%的为6例，革兰阴性菌超过50%的14例，菌群分布呈革兰氏阳性球菌明显上升，革兰氏阳性杆菌明显下降的特点。在王富海、余健全等人的研究中[7]，抗生素相关性腹泻患儿肠道内细菌总数减少，革兰阳性杆菌、双歧杆菌等益生菌数量比正常值减少，格兰阴性菌数量明显增多，有不同程度的肠道菌群失调情况，结果与上述研究一致。在本研究中，106例肠道菌群失调患者的粪便涂片中革兰阳性菌增多35例，革兰阴性菌增多68例，全菌减少的3例，该结果与上述研究结果相似。在对慢性腹泻患者诊治时需要重视粪便涂片检查结果，并根据患者的病史、饮食习惯等进一步分析，开展及时有效的治疗与护理，促进患者康复。

综上所述，肠道菌群失调是慢性腹泻的重要诱因之一，多以革兰阳性菌/革兰阴性菌均比例失调、杆菌/球菌比例失调为主，而抗生素不合理的应用是肠道菌群失调的常见原因。肠道菌群失调与慢性腹泻相互影响，肠道菌群失调可诱发慢性腹泻，同时慢性腹泻也可加重肠道菌群失调现象，对慢性腹泻患者实施粪便涂片检查可以较好地诊断出患者肠道菌群失调情况，为后续诊治提供了重要的依据。