强直性脊柱炎患者HLA-B27基因分型及临床特征分析

刘 倩，马 亮，岳德波，刘 辉，姜永玮，徐英春

（1.中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院 检验科，北京 100730；2.中日友好医院 检验科，北京100029；3.中日友好医院 骨科，北京 100029）

强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一种慢性进展的自身免疫性炎症疾病，以中轴关节慢性炎症为主，主要侵犯骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织，同时伴发下肢大关节等外周关节以及关节外表现，如前葡萄膜炎、溃疡性结肠炎、肺纤维化等，严重者可发生脊柱畸形和强直[1]。我国AS 患病率在0.2%～0.3%，约有400～500 万的AS 患者。AS 发病隐匿，早期骶髂关节炎影像学病变程度通常达不到诊断标准[2]，临床表现也并非特异性，极易造成误诊，严重影响患者的治疗、预后以及生活质量。目前，AS 病因尚不明确。有多项研究表明，其发病机制与遗传、免疫、环境等密切相关[3，4]。90%的AS 患者人类白细胞抗原B27（HLA-B27） 基因检测为阳性，正常人群中只有4%～7%左右，HLA-B27 与AS 发病密切相关[5]。本研究分析AS 患者HLA-B27 基因分型特点及相关临床特征，以期为临床诊疗提供指导及依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

纳入2018年1月～2019年12月中日友好医院骨科、风湿免疫科等确诊的287例AS 患者，其中男225例、女62例；就诊年龄8～83 岁，中位年龄36 岁。AS 纳入标准： 符合美国风湿病协会（American Rheumatology Association，ARA）1984年修订的纽约标准，且具备临床资料及影像学检查。排除标准：有其他自身免疫性疾病患者；合并感染性疾病患者； 合并恶性肿瘤等消耗性疾病患者；孕期及哺乳期女性。以上所有患者或其监护人均签署知情同意书。

1.2 研究方法

收集及记录287例AS 患者的基本资料 （性别、就诊年龄、发病年龄、平均病程、有无AS 家族史、有无葡萄膜炎）；清晨采集患者空腹状态下静脉血2ml，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝，采集后立即混匀，用于外周血核酸的制备提取。

1.3 检测方法

核酸制备提取： 采用天隆科技公司Ex-DNA全血提取试剂盒，按照说明书要求与步骤提取核酸，并采用Nanodrop1000 微量分光光度计测定每份核酸的浓度和纯度。

HLA-B27 基因分型检测：采用天津市秀鹏生物技术开发有限公司HLA-B27 基因分型测定试剂盒对上述核酸进行基因分型检测。PCR 循环参数：96℃2min；96℃20s，68℃1min，循 环5 次96℃20s，65℃50s，72℃45s，循 环10 次；96℃20s，62℃50s，72℃45s，循环15 次；72℃2min；ABI7500 荧光定量PCR 分析仪进行熔解曲线分析，得出HLA-B27 基因分型结果。

1.4 统计学方法

采用SPSS22.0 软件对数据进行统计学分析。计量资料以χ-±s 表示，组间比较采用t 检验；计数资料以率表示，组间比较采用卡方检验。

2 结果

2.1 AS 患者的临床特征

287例AS 患者，男225例，女62例，男女比例约为3.6：1；就诊年龄8～83 岁，发病年龄（27.3±12.4）岁，病程（11.7±9.8）年；HLA-B27 基因阳性238例 （82.9% ），HLA-B27基因阴性49例（17.1%）；AS 家族史患者共46例（16.0%），其中一级亲属41例（14.3%），二级亲属5例（1.7%）；伴发葡萄膜炎的AS 患者共29例（10.1%）。

表1 示，男性AS 患者就诊年龄、发病年龄明显早于女性AS 患者，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），HLA-B27 基因阳性比例、病程、AS 家族史、伴发葡萄膜炎两组比较差异无统计学意义（均P＞0.05）。

2.2 HLA-B27 基因阳性与阴性AS 患者的特征

表2 示，HLA-B27 基因阳性AS 患者发病年龄明显早于HLA-B27 基因阴性AS 患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；性别构成比、就诊年龄、病程、AS 家族史、 伴发葡萄膜炎两组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），但是HLA-B27 基因阳性患者AS 家族史、 伴发葡萄膜炎比例高于阴性组。

2.3 HLA-B2704 亚型、HLA-B2705 亚 型AS 患者的比较

238例HLA-B27 基因阳性AS 患者进一步基因分型检 测，HLA-B2704 型131例 （55.0%），HLA-B2705 型101例 （42.4%），HLA-B2702 型2例（0.8%）；HLA-B2704*HLA-B2705 复合杂合子3例 （1.3%），HLA-B2705*HLA-B2708 复合杂合子1例 （0.4%）。表3 示，HLA-B2704 和HLAB2705 亚型组AS 患者伴发葡萄膜炎的差异有统计学意义（P＜0.05），就诊年龄、发病年龄、病程、AS家族史两组间差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

表1 男性和女性AS 患者基本特征比较

表2 HLA-B27 基因阳性、阴性AS 患者的比较

表3 HLA-B2704、HLA-B2705 亚型AS 患者的比较

3 讨论

自1973年Brewerton 和Schlosstein 首次报道HLA -B27 与AS 相关，HLA-B27是目前已知与AS 关联最强的基因。因此，分析和研究HLA -B27 基因亚型分布及其相关临床特征，对于AS 早期诊断及预后有很大意义。

3.1 AS 患者临床特征分析

本组研究中，男女AS 患者比例约为3.6：1，男性占比78.4%（225/287），男性患者就诊年龄、发病年龄均显著早于女性患者。很多早期AS 文献报道男女比例可达7～10：1，原因可能与纳入研究的患者的民族和人种有关，据我们目前的资料和相关研究发现，造成此差异更重要的原因在于女性患者病情相对较轻，起病较为隐匿，炎性腰背痛等症状往往不明显，导致女性确诊AS 比男性更有难度，误诊率、延误率较高。本研究中患者平均发病年龄（27.3±12.4）岁，与国内其余文献报道及队列研究相符合[6]；有AS 家族史患者占16%，其中一级亲属占比重更大； 在2015年的一项Meta 分析中，约有25.8%的AS 患者伴发葡萄膜炎[7]，在本次研究中葡萄膜炎发生率为10.1%，与国内冀肖健[6]研究结果相符，葡萄膜炎发生率与纳入研究的患者HLA-B27 基因亚型相关。

3.2 HLA-B27 基因阳性与阴性AS 患者基本特征比较

HLA-B27 位于人类第6 号染色体短臂上，包含8 个外显子和7 个内含子，存在多个等位基因，各亚型具备不同的流行病学特征以及与疾病的关系，且在不同国家、不同种族中HLA-B27 各亚型频率也不尽相同[8]。国外一项单中心研究AS 患者疾病特征的回顾性分析[9]中发现HLA-B27 阳性率为79%，与本研究中AS 患者HLA-B27 基因阳性率82.9%（238/287） 相符。HLA-B27 基因阳性AS 患者发病年龄显著早于HLA-B27 基因阴性AS 患者（P＜0.05），HLA-B27 基因阳性患者AS 家族史比例高于阴性组，伴发葡萄膜炎比例为阴性组3 倍左右，虽然后两项指标的差异无统计学意义，也提示我们HLA-B27 基因阳性AS 患者较阴性患者发病更早、临床症状更复杂。

3.3 HLA-B2704、HLA-B2705 亚型AS 患者伴发葡萄膜炎的比较

有研究表明，HLA-B2705 亚型几乎见于所有人种，HLA-B2704 亚型主要见于中国汉族人群，并且为优势亚型[10]，HLA-B2706 亚型和HLAB2709 亚型为保护性亚型。本研究中HLA-B2704亚 型55.0%（131/238），HLA-B2705 亚 型42.4%（101/238），罕见型别HLA-B2702 型检出2例，HLA-B2704*HLA-B2705 复合杂合子3例，HLAB2705*HLA-B2708 复合杂合子1例，与国内外相关研究基本相符，因样本量偏小，基本特征等暂时无法进行统计学分析比较。

葡萄膜炎是AS 患者最易伴发的关节外表现，病情复发频繁，大量文献都曾证实HLA-B27基因与葡萄膜炎有很强的相关性，我们的数据也证实了HLA-B27 基因阳性AS 患者伴发葡萄膜炎比例高于阴性组患者。另外，我们在HLA-B27基因亚型分析中发现HLA-B2705 亚型AS 患者更易伴发葡萄膜炎。

本研究尚存在一些不足，例如复合杂合子样本量偏小，未进一步对基因亚型与临床特征进行相关性分析，待后续研究继续扩大样本量。本研究表明，对AS 患者在进行HLA-B27 基因检测的基础上，更应该在亚型水平上进一步分型，对疾病的诊断、关节外病变的早期防治有更大的价值。