顶空气相色谱法测定格隆溴铵中溶剂残留量

白旭东 王志刚 谷岩

【摘要】 目的：建立顶空毛细管气相色谱法测定格隆溴铵中7种有机溶剂残留量的方法。方法：采用毛细管气相色谱法。色谱柱为DB-624弹性石英毛细管柱（30 m×0.32 mm，1.8 μm）;载气为氮气;检测器为FID;进样口和检测器温度均为250 ℃;柱温为程序升温，初始温度40 ℃，保持15分钟，以每分钟20 ℃升温至200 ℃。顶空进样：平衡温度为80 ℃，平衡时间为30 min，分流比为10：1，水为溶剂，正丙醇为内标物。结果：被测物在考察的范围内线性关系良好（r≥0.9990），平均回收率为90.7%～102.1%，检测限分别为。结论：本法灵敏度高，简单，易行，结果准确可靠，该法可用于格隆溴铵原料药中有机溶剂残留量的检查。

【关键词】 毛细管气相色谱法;格隆溴铵;顶空进样;残留溶剂

【DOI编码】 10.3969/j.issn.1674-4977.2020.05.019

Determination of Residual Solvent in Glycopyrronium Bromide by Headspace Gas Chromatography

BAI Xu-dong，WANG Zhi-gang，GU Yan

（Liaoning Inspection，Examination & Certification Centre，Shenyang 110036，China）

Abstract： Objective A method for the determination of the residual amounts of seven organic solvents in glycopyrronium bromide by headspace capillary gas chromatography was established. Method Capillary gas chromatography is used. The chromatographic column is a DB-624 elastic quartz capillary column（30 m×0.32 mm，1.8 μm）;the carrier gas is nitrogen;the detector is FID;the inlet and detector temperature are both 250 ℃;the column temperature is the programmed temperature rise，the initial keep the temperature at 40°C for 15 minutes，and increase the temperature to 200 ℃ at 20 ℃ per minute. Headspace sampling：equilibrium temperature is 80 ℃，equilibrium time is 30 min，split ratio is 10：1，water is solvent， n-propanol is internal standard. Results The measured substances have a good linear relationship（r≥0.9990） within the range examined，with an average recovery rate of 90.7 to 102.1%，and the detection limits are respectively. Conclusion This method is high in sensitivity， simple，easy to implement，and the results are accurate and reliable. This method can be used for the inspection of the residual amount of organic solvents in glycopyrrolate bromide raw materials.

Key words： capillary gas chromatography;glycopyrronium bromide;headspace sampling;residual solvent

格隆溴銨（Glycopyrronium Bromide）是一种长效毒蕈碱受体拮抗剂，作用于副交感神经支配效应部位M受体，能够抑制节后胆碱能神经和平滑肌对乙酰胆碱的反应，外周作用与阿托品类似，但无中枢性抗胆碱活性[1-3]。在临床应用中，可用于消化性溃疡的辅助治疗，或用于术前或术中，减少唾液腺、支气管和咽的分泌物[4]。

目前国内已有文献报道格隆溴铵的含量测定，对格隆溴铵原料药中有机溶剂残留量测定未见报道，格隆溴铵合成工艺及后期的工艺优化，并确定整个工艺中使用到有机溶剂，分别为：乙醇、乙醚、乙腈、二氯甲烷、正己烷、丁酮、四氢呋喃。鉴于上述溶剂基本为低沸点有机溶剂，本文依据中国药典2020年版四部相关规定及人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）指导原则，需对这些有机溶剂残留量进行控制，本实验建立了毛细管气相色谱法测定上述溶剂在药物中的残留量，方法简便、快速、结果准确。

1 仪器与材料

GC-2010气相色谱仪配有FID检测器（日本岛津公司）;AOC5000顶空进样器（瑞士公司）;DB-624弹性石英毛细管柱（30 m×0.32 mm，1.8 μm）（迪马科技有限公司），CP 225D电子天平（德国赛多利斯公司）。

乙醇、乙醚、乙腈、二氯甲烷、正己烷、丁酮、四氢呋喃和正丙醇（Sigma公司）均为色谱纯，实验用水为超纯水。格隆溴铵原料（沈阳医联药业有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择与系统适用性试验

色谱柱：DB-624弹性石英毛细管柱（30 m×0.32 mm，1.8 μm）;柱温：程序升温，初始温度40 ℃，保持15分钟，以每分钟20 ℃升温至200 ℃。进样口温度：230 ℃;检测器：FID;检测器温度：250 ℃;载气为N2，柱流量：1.5 mL/min;进样方式：顶空进样;顶空条件：平衡温度：80 ℃;平衡时间：30 min。分流比：1：10;进样体积：1000 μL。注入气相色谱仪进行分析，结果见图1。

系统适应性试验：内标物正丙醇的保留时间为8.6 min，理论塔板数按正丙醇计算应不低于30000，相邻物质的分离度大于1.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1 内标贮备液的制备

取正丙醇约500 mg，精密称定，置250 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为内标贮备液。

2.2.2 对照储备溶液

精密称取乙醇2500 mg、乙醚2500 mg、乙腈200 mg、二氯甲烷300 mg、正己烷150 mg、丁酮2500 mg、四氢呋喃350 mg置同一100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照贮备液。精密量取对照贮备液0、0.2、0.5、1、2.5、5 mL，分别置100 mL量瓶中，分别精密量取内标贮备液10 mL置量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为系列对照溶液。

2.2.3 供试溶液

取格隆溴铵2.5 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 标准溶液加入液的制备

精密量取供试品溶液2 mL，置20 mL顶空瓶中，分别精密加入2 mL“2.2.2”项下对照系列溶液，加盖密封。

2.3 线性关系、检出限和定量限的考察

取“2.2.4”项下系列标准溶液加入液，按上述色谱条件进行检测。以加入的供试品所含对照质量浓度（ρ，mg/g）为横坐标，以目标组分的峰面积与内标峰面积之比（A）为纵坐标，进行线性拟合，得到7种残留溶剂的线性方程、线性范围及相关系数。以S/N≥3确定方法的检出限（LOD），以S/N≥10確定方法的定量限（LQD），结果见表1。

2.4 回收率试验

取格隆溴铵2.5 g（9份），精密称定，置25 mL量瓶中，分别加入对照贮备液0.5 mL、1 mL和2.5 mL（每个浓度平行3份），加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为回收率高、中、低三个浓度的供试品溶液。

精密量取回收率供试品溶液2 mL，置20 mL顶空瓶中，分别精密加入2 mL“2.2.2”项下对照系列溶液，加盖密封。按照标准加入法计算回收率，结果见表2。

2.5 精密度试验

取加入对照品溶液2的标准溶液加入液，平行5份，按“2.1”项下色谱条件进行分析，计算乙醇、乙醚、乙腈、二氯甲烷、正己烷、丁酮和四氢呋喃峰面积的RSD分别为1.66%，7.83%，2.88%，4.90%、3.96%、5.06%和4.35%，表明色谱系统重复性良好。

2.6 供试品测定

取供试品批号为3样品按“2.2 溶液的制备”项下溶液制备，按上述色谱条件进行检测，结果：三批样品中除乙醚与检测限接近，远远低于标准曲线最低点外，其余均未检出。

3 讨论

1）进样方式的选择

中国药典2020版四部 （残留溶剂测定法）规定，进样方式分为顶空进样和直接进样两种模式。由于本文所检测的溶剂均为沸点较低容易挥发性的溶剂，因此，为避免仪器与色谱柱的污染采用了顶空进样方式

2）定量方式的选择

当采用顶空进样技术时，由于供试品和对照品处于不完全相同的基质中， 故可采用标准溶液加入法以消除基质效应的影响;当标准溶液加入法与其他定量方法结果不一致时，应以标准加入法结果为准。本实验也曾用外标法对原料药格隆溴胺中有机溶剂残留量进行过测定，发现采用外标法测定时，由于受基质效应影响较大，回收率偏差较大，特别是乙醚、正己烷和二氯甲烷，所以最后采用标准溶液加入法对原料药格隆溴胺中有机溶剂残留量进行了测定。

3）顶空条件的选择

作者考察了不同平衡温度（70、80、90 ℃）与平衡时间（20、30、40 min）对残留溶剂检查的影响，将“2.2.4”标准溶液加入液的制备的中间浓度分别在70、80、90 ℃下平衡20、30、40 min进样分析进样分析，结果表明70 ℃下平衡20、30 min和80 ℃下平衡20 min的峰面积较低，其余条件各成分的峰面积基本一致，这表明顶空的气-液两相已达平衡，为避免水蒸气的分压过高，故选择顶空温度为80 ℃，顶空平衡时间为30 min。

4）本实验共检测7种有机溶剂，其中乙醇、乙醚、正丁醇为三类溶剂，其限度为0.5%，其余四种为二类溶剂，其限度乙腈为0.041%，二氯甲烷为0.06%，正己烷为0.029%，四氢呋喃为0.072%。实验中的最低检测浓度均低于上述限度，因此本法能有效控制以上残留溶剂。

【参考文献】

[1] ALI-MELKKIL?T，KANTO J，IISALO E.Pharmacokinetics and related pharmacodynamics of anticholinergic drugs[J].Acta Anaesthesiologica Scandinavica，1993，37：633-642.

[2] 江波.格隆溴铵临床前药效学和药代动力学研究[D].杭州：浙江大学，2018.

[3] Chabicovsky M. Pharmacology， toxicology and clinical safety of glycopyrrolate[J].Toxicology and Applied Pharmacology，2019，370：154-169.

[4] 郭海英，周新.新抗胆碱能药物格隆溴铵[J].上海医药，2013（15）：10-12.

【作者简介】

白旭东（1973-），男，副主任中药师，学士，研究方向为食品，药品和医疗器械的检验与审评。

王志刚（1973-），男，教1授级高级工程师，硕士，研究方向为食品检验与食品安全。

通讯作者：谷岩（1975-），女，硕士，研究方向为食品检验与食品安全，E-mail：591131710@qq.com。