细胞蜡块宫颈液基细胞P16在检测宫颈肿瘤中的应用效果分析

徐有江

（吉林省白山市中心医院，吉林 白山）

0 引言

宫颈癌为妇科临床常见恶性肿瘤之一，在女性生殖系统恶性肿瘤中居于第二位，我国是宫颈癌发病大国，宫颈癌的发病率及死亡率占全球1/3，且呈逐年上升趋势[1]。有大量临床资料显示[2]，P16蛋白在肿瘤发生和发展过程中呈现出表达现象，是肿瘤相关基因蛋白，目前临床多数认为P16的抑癌作用相较于P53更加直接，若P16基因蛋白失调，则可导致细胞生长和扩张失去限制，最终向病变细胞转化。多数研究一般认为[3]，P16蛋白在正常的宫颈组织中表达为阴性，而在CIN、浸润癌当中均有表达，其阳性表达率及染色强度可随着病变组织学分级的增加而逐渐升高，因此在临床上被广泛应用于宫颈组织活检中，本次研究目的在于采用细胞蜡块的方法，探究P16蛋白在宫颈肿瘤中的表达，现做如下报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院2018年7月至2019年7月收治的宫颈病变患者 160例，患者年龄 28～62岁，平均（43.57±10.25）岁。纳入标准：①所有病变均经病理证实；②所有患者均有性生活史。排除标准：①排除二次复查者；②排除宫颈锥切、子宫切除史者；③合并心肝肾等重要脏器严重器质性障碍者；④排除各类慢性消耗性疾病及资料不全者。

1.2 方法

①宫颈细胞学收集方式，采取Thinprep液基细胞检测法（TCT），取专用颈管细胞刷，于宫颈外口和宫颈管旋转4～5周，采集宫颈上皮脱落细胞，将细胞存放至装有保存液的保存瓶中，采用TCT制片机进行制片，将细胞制成直径为1 cm的细胞学涂片，取95%酒精固定，行巴氏染色。②细胞学诊断，阅片由经验丰富的细胞学专职人员进行，采取TBS诊断分级系统进行分级。③P16免疫组化检测，收集脱落细胞，进行常规离心沉淀、蛋白固定，使细胞成块，再完成脱水、包埋等程序将其制作成片，以宫颈HELA细胞为阳性对照，采取P16抗体进行研究，切片染色的评估在光学显微镜下进行。在光镜下，P16阳性物质存在细胞质或细胞核当中，若细胞质或细胞核着染成棕褐色或粉色为阳性。P16蛋白表达的判断依据异型细胞着色与否及细胞着色数量进行，阳性判读：一张切片当中，存在至少5个的异型细胞显示细胞核有着色（异型细胞的表现主要为胞核增大，占据整个细胞体积的1/2以上；染色质表现异常，如染色质分布不均，呈颗粒状或块状、胞核呈深染或淡染，胞核形状不规整，有较大的凹陷或凸起，还可呈锯齿状；细胞聚集排列呈片状或条索状，形态与大小各异）。阴性判读：一张切片中，无异型细胞着色或异型细胞数量少于5个者。

所有患者行P16检查，同时仍按常规宫颈癌筛查步骤进行筛查，以进一步确诊。

1.3 统计学分析

应用统计学软件SPSS 18.0对资料进行分析处理，计数资料采用χ2检验，以（%）表示，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TBS分类

160例患者中，16例为 NILM、60例为 ASC-US、5例为ASC-H、42例为 LSIL、35例为 HSIL、2例为 SCC。

2.2 P16表达

P16在NILM中阳性率为0%、在ASC-US中阳性率为5.00%、ASC-H中阳性率为80.00%、在LSIL中阳性率为28.57%、在HSIL中阳性表达率为97.14%、在SCC中表达率为100.00%。P16在LSIL与HSIL中阳性表达率有统计学差异（P＜0.05），见表 1。

表1 P16在脱落细胞中的表达（n, %）

2.3 组织学与细胞学诊断对比

160例患者中，仅68例患者有组织活检结果，液基细胞免疫组化检测中，P16蛋白55例为阳性，组织学检查结果有44例病变为CINⅡ级以上；P16蛋白13例为阴性，无CINⅡ以上病变。68例活检结果中，组织学诊断为CINⅡ级以上而细胞学诊断为ASC-US者17例，其中P16蛋白可见阳性异型细胞1例；组织学诊断为CINⅡ级以上而细胞学诊断为LSIL者11例，P16蛋白染色可见阳性异型细胞6例；组织学诊断为CINⅡ级以上而细胞学诊断为ASC-H者5例，其中4例P16蛋白呈阳性染色，1例为阴性染色。组织学诊断CINⅡ级以上而细胞学诊断为HSIL者8例，7例可见P16蛋白有异型细胞染色。组织学诊断为CINⅡ级以上而细胞学诊断为SCC者2例，2例均可见P16蛋白阳性染色，详见表2。

表2 组织学与细胞学诊断对比（n）

3 讨论

P16基因定位于人类染色体9p21中，又称为细胞周期素依赖性激酶，是此条染色体中首个被发现的抑癌基因，其可直接参与细胞周期的调控，多种人肿瘤细胞中都存在P16蛋白基因的突变、缺失以及甲基化，以此提示其与肿瘤发生和发展过程有紧密的相关性[4-5]。目前，P16蛋白与宫颈癌的临床研究较多，有报道称[6]，P16蛋白在非癌组织中表达较低，而在宫颈癌中的表达很高，其还表明了P16蛋白与宫颈癌的发生有相关性，并表示P16的表达动态随着病变的加重而发生变化。由于P16作为宫颈癌检测的生物学标志，虽尚难替代HPV病毒检查，但由于其检测方式简单，操作难度小，费用不高，且仍可作为宫颈癌病变程度指标，辅助临床诊断，为筛查与预后提供科学的依据，应用前景广阔[7]。

本次研究将采用免疫组化检测与细胞蜡块的技术对宫颈液基细胞中P16蛋白的表达进行的探究，研究结果提示P16细胞阳性表达率随病变级别的提升而增加，随着病变严重程度的增加，P16的着色强度也在增加，研究上述结果中可以看出，P16的阳性表达率在HSIL与ASC-H中的表达率非常高，分别为97.14%、80.00%，证实了P16蛋白与癌前病变确有关联，可作为宫颈癌及癌前病变的早期辅助诊断指标在临床推广。