青海正品小秦艽与代用品管花秦艽中龙胆苦苷的含量测定

窦萱，刘静，贾守宁，王双玺

(青海省中医院，青海 西宁)

0 引言

《中国药典》2015 版收载的秦艽为龙胆科植物秦艽、粗茎秦艽、麻花秦艽、或小秦艽的干燥根[1]。文献报道[2-7]，主要含有环烯醚萜苷类化合物，其中的主要成分就是以龙胆苦苷。从药理作用的角度来讲，龙胆苦苷在抗炎、升高血糖、调节免疫、镇痛镇静降压、抗组织胺、抗过敏性休克有显著作用，是临床上治疗脑脊髓膜炎类风湿性关节炎和风湿性关节炎的主要手段。

管花秦艽Ex Kusnuz.(藏语名称译音为解吉那宝)。生长在海拔3500—4500 米的高山潮湿地带、阴坡草地，青海省均有分布。本研究参考2015 版《中国药典》一部秦艽中龙胆苦苷测定方法，结合文献报道相关文献，所使用的方法主要为HPLC 法，考察了青海正品小秦艽与代用品管花秦艽中龙胆苦苷的含量，为新资源的开发提供资料。

1 仪器与材料

1.1 仪器

LD-20AT 高效液相色谱仪，PDA 检测器，日本岛津公司开发的Labsolutions LC/GC Version 5.73 色谱数据工作站；昆山市超生仪器有限公司生产的KQ-500DE 型数控超声波清洗器；METTLER TOLEDO MS105 电子天平；重庆阿修罗科技发展有限公司生产的AXLF1830-2 超纯水机。

1.2 材料

龙胆苦苷对照品(批号110770-201515，含量99.1%)购自中国食品药品检定研究院。小秦艽和管花秦艽，采自2019年9 月下旬青海省共和县。所有样品经青海省中医院中医药研究所鉴定为小秦艽和管花秦艽。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Reprosil 100 C18(5μm，150×4,6mm)；流动相：乙腈-0.%醋酸溶液(9:91)；柱温：35℃；流速：1.0mL·min-1。

2.2 制备对照品溶液的方法

提取适量的龙胆苦苷对照品，将甲醇加入到溶液中，分别制成每1mL 含龙胆苦苷0.5mg 的溶液，即得。

2.3 制备供试品溶液的方法

取本品粉末，提取的粉末需要过三号筛，重量在约0. 5g左右，称定过程中保证精确，置具塞锥形瓶中，在其中加入20mL 甲醇，对样品进行超声处理，处理过程中频率设定为频率40kHz，功率设定为500W，处置时间为30 分钟，二次称定重量需要放冷，对于缺失的重量需要用甲醇补足，摇匀，滤过，将续滤液提取出来，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 专属性实验

龙胆苦苷与样品中其他组分色谱峰基线分离无干扰。按龙胆苦苷峰计算理论板数需要控制在3000 以上。图1 为具体研究结果。

2.4.2 线性关系的考察

进行龙胆苦苷对照品溶液精密提取，数量分别为2.5、4、7.5、14、20.5μl，在“2.1”项下色谱条件依次进样，横坐标设置为进样量，纵坐标设置为峰面积，计算回归方程，龙胆苦苷Y=1482.5X-5.9×105，r2=0.9999。说明在1.219～9.999μg 范围内龙胆苦苷与峰面积之间的线性关系良好。

2.4.3 精密度实验

提取龙胆苦苷对照品10μl，重复进样6 次，计算龙胆苦苷对照品峰面积RSD 的相关指标为0.23%(n=6)，说明仪器自身具有较高的精密度。

2.4.4 稳定性实验

取同一批小秦艽供试品溶液，分别于0,2，4,8，12,24h 进样10μl 测定，通过对测定结果进行分析发现龙胆苦苷峰面积RSD 的测定指标为0.20%(n=6)，这也在一定程度上说明了24h 供试品溶液能够维持稳定。

2.4.5 重复性实验

取同一批小秦艽6 份，每份的重量控制在0.5g 左右，保证称定结果的精密性，制备供试液，制备过程中主要按“2.3”项下方法进行测定，研究发现样品中龙胆苦苷的平均含油量为2.365%，RSD 为1.64%，说明这种方法具有较好的重复性。

2.4.6 回收率试验

取同一批已知龙胆苦苷含量的小秦艽样品6 份，每份0.05g，需要保证称定结果的精密性，将称取好的样品放置于具塞锥形瓶内，精密加入对照品溶液( 龙胆苦苷0.4878mg·mL-1)5mL，需要制备供试品溶液6 份，制备过程中所使用的方法主要为供试品溶液制备方法。按“2.1”项下色谱条件测定。结果样品中龙胆苦苷平均回收率为100.57%，RSD 为2.7%，表明本方法的准确度良好，结果见表1。

表1 回收率实验结果 n=6

2.5 样品测定

分别取小秦艽、管花秦艽0.5g，对供试品溶液进行制备，所采用的方法主要为“2.3” 项下方法。分别称取二者10μl 对照品溶液和10μl 供试品溶液，将高效液相色谱仪注入其中，按测定过程中需要依照“2.1”项下色谱条件，计算样品中龙胆苦苷的含量。结果见表2、3。

表2 小秦艽中含有的龙胆苦苷浓度测定结果n=2

表3 管花秦艽中含有的龙胆苦苷浓度测定结果n=2

图1 高效液相色谱图

3 讨论

3.1 本次研究工作的展开过程中，所采用的主要为HPLC法来对正品小秦艽与代用品管花秦艽中的龙胆苦苷的含量进行测定，以Reprosil 100 C18(150×4,6mm，5μm) 反向色谱柱，乙腈-0.%醋酸溶液(9:91)为流动相；检测波长为254nm；柱温为35℃；流速为1.0mL·min-1。所分离峰形良好。

3.2 从龙胆苦苷的含量的角度来进行分析，小秦艽和管花秦艽均能够满足中国药典中的相关规定，通过对其平均含量进行统计发现：管花秦艽(6.22%)＞小秦艽(2.37%)，说明代用品管花秦艽具有较高的使用价值。

3.3 通过对相关统计结果进行分析发现，管花秦艽的HPLC图谱与小秦艽的HPLC 图谱在很多方面具有一致性，由此能够初步得出结论，管花秦艽能够被当作是中药秦艽的替代性药品。曹晓燕等，王茹之[7]曾研究了管花秦艽药物不同部分含有龙胆苦苷量进行，研究发现管花秦艽药物的根茎部分以及叶子、花的部分龙胆苦苷含量均高于2%。管花秦艽虽未被药典收录，但由于在高海拔地区，有巨大的贮量，加之采挖较少，所以有良好的开发价值。