食品微生物实验室一次性无菌耗材验收和管理规程的建立及应用

□ 陈靖欣 中山市食品药品检验所

一次性无菌耗材愈来愈广泛地应用于微生物实验中，虽然一次性无菌耗材在生产和出厂时，已经符合相关卫生标准。但在贮存和运输过程中，不能完全保证无菌用品的密封性及其无菌状态不被破坏，往往在实验中才发现使用的一次性无菌耗材已被污染，但已对实验结果造成不可挽回的影响。而目前依然没有详细标准要求微生物实验室需要对购进的一次性无菌耗材进行验收。微生物实验大多不能虫谷，考虑到一次性无菌耗材可能会对微生物实验结果遭严重影响，需重视对一次性无菌耗材无菌的验收和管理。但如果每次都完全按照产品标准对一次性耗材进行验收，会大大增加微生物实验室的工作量。所以在此对购进的一次性无菌耗材提出建立无菌验收和管理规程的建议。

1 目的

对食品微生物实验室购进的一次性无菌耗材进行无菌验收和集中管理，有效维持耗材的无菌状态，从而保证实验结果准确有效。

2 适用范围

食品微生物实验室一次性无菌耗材（一次性使用灭菌手套、灭菌/无菌口罩、一次性无菌培养皿、一次性无菌接种环、一次性无菌接种针、无菌采样袋、无菌均质袋等）[1—2]。

3 注意事项

同一运输日期、品牌、品类、型号规格、批号的样品做一次验收。上述条件只要有一项不一样均要求分别验收。

最小包装：整个产品中，以最小密闭无菌环境包装样品的包装称为最小包装，最小包装内的产品不能再拆分来销售，检验前不能开启，以防污染。大包装：以多个最小独立包装组成的包装称为大包装。例如：规格为500 个平皿/箱，10 个平皿/包的一次性无菌培养皿中，10 个平皿/包的包装打开后平皿可以直接使用，则10个平皿/包的包装为最小独立包装，500 个平皿/箱为大包装。

4 外观验收

接收时，产品应带有合格证明，清晰标注批号和/或生产日期、有效期及贮存条件，否则均应拒收或退回。外包装洁净，形状完好，表面不得有破损、污渍。样品最小独立包装密封性完好，表面不得有破损、污渍。同时可向供应商索取或官网下载检测报告。

5 无菌验收

5.1 抽样方法

每次抽样至少取3 个最小包装样品作为平行样。为使样品具有良好的代表性，采取随机抽样方法，尽量选自多个大包装，不得在同一批号内的同一包装内邻近部位集中选取所需的全部样品。

5.2 实验环境要求

100 级洁净室或100 级层流超净工作台(以下分别简称洁净室与超净台）。

5.3 验收前准备

洁净室地面、实验台桌面、超净台桌面擦净消毒后，将试样及其他所需器材放妥，毛巾和脱脂棉球需经过湿热灭菌处理，把所需耗材预先放入实验室再进行紫外照射，开启紫外线消毒至少30 min，此过程也对物体表面进行了消毒。但培养基等试剂不能预先放入实验室，因为培养基里的某些成分可能会分解，培养基在紫外后通过传递窗放入。

5.4 取样方法

可剪碎的耗材（如手套、口罩）用酒精棉擦拭产品外包装后，无菌操作打开外包装，将样品置于无菌器皿，用灭菌剪刀和镊子将样品剪碎，用于称取的单个碎片面积应不大于25 cm2（5 cm×5 cm）， 称 取（10±1）g 样品加入到200 mL 灭菌生理盐水中，手动混匀或均质器拍打1 ～2 min，准备5 个无菌平皿，每平皿加1 mL 样液。

对于可用于直接培养的耗材（如无菌采样袋、无菌均质袋），用酒精棉擦拭产品外包装后，无菌操作打开外包装，加入200 mL 灭菌生理盐水于样品容器内部，手动混匀或均质器拍打1 ～2 min，准备5 个无菌平皿，每平皿加1 mL 样液。

一次性无菌培养皿虽为可用于直接培养的器皿，但其最小包装内通常含有多个平皿，如平皿表面污染也会造成平皿内部污染，所以建议采用该方法取样。

不可剪碎的耗材（如一次性接种环、一次性接种针、一次性移液管、一次性枪头或一次性培养皿）：用酒精棉擦拭产品外包装后，无菌操作打开外包装，称取（10±1）g 样品加入到200 mL 灭菌生理盐水中，可根据样品重量按比例增加生理盐水的量，用生理盐水充分浸泡样品内外面。手动混匀1 ～2 min，准备5 个无菌平皿，每平皿加1 mL 样液。

5.5 样品培养

向每个装有样液的平皿中加入15 ～20 mL 的营养琼脂，混匀，待冷却凝固后，置于（35±2）℃培养48 h后，计算平板菌落数。

5.6 实验区空白对照

无菌验收过程中，应同时检查洁净室或超净台空气的菌落数。用至少2个直径9 cm 的培养皿，无菌操作注入融化的约15 ～20 mL 营养琼脂，在洁净室或超净台的中间位置打开上盖，暴露30 min 后对空气采样后，盖上盖置于（35±2）℃培养48 h，取出检查培养皿上是否生长菌落，均无菌落生长则检测环境合格，若有菌落生长此次试验结果应判为无效。

5.7 结果判定

所有平板均不生长菌落，该样品则达标，可判为合格，通过验收，可投入使用。

若有平板生长菌落，该样品不达标，判为不合格，应联系供应商退回样品。

6 一次性无菌用品管理

建立一次性无菌耗材文档，用于存放一次性无菌耗材的合格证明、质检报告和验收记录。建立一次性无菌耗材购进领用记录。

7 一次性无菌耗材的存放

一次性无菌耗材应存放于阴凉干燥、通风良好的物架上或储物柜中，距离地面不少于20 cm，距天花板不少于50 cm。应分类放置，不建议与其他物品混放，未验收与已验收的应分开标识，新到耗材应贴上“未验收”标签，验收通过的应贴上“已验收”标签，同时遵循先进先出的原则。不能将运输包装直接带入洁净室，应去除最外层包装或更换洁净包装方可带入实验区。每次实验前应预估耗材用量，按需带入实验区，不建议实验区长期存放大量一次性无菌耗材，避免污染。存放时间超过6 个月的一次性无菌耗材应再次进行无菌验收。在储存过程中有怀疑储存条件已对一次性无菌耗材造成污染时，耗材应立即停用，重新进行验收。根据验收结果重新判断是否可以继续使用。

8 结语

在建立了食品微生物实验室一次性无菌耗材无菌验收和管理规程后，一次性无菌耗材得到有序的集中管理，改变了以往无序存放、随机拿取的无序管理状态，有效避免了使用已污染的一次性无菌耗材进行微生物实验，大大降低了一次性耗材污染给实验结果带来的影响，工作效率也得到了提高。