妇炎康联合物理因子治疗慢性盆腔炎的疗效及对微小RNA-224-3P及转化生长因子β/Smad信号通路表达的影响

彭智聪 许美珍

(广东省中山市中医院康复科，中山市 528403，电子邮箱：rencheng1214@163.com)。

盆腔炎是一种由上生殖道多种微生物感染引起的炎症，年轻、性活跃女性多见，美国每年有750 000名女性患盆腔炎，以15～29岁为主[1-2]。其中，慢性盆腔炎(chronic pelvic inflammatory disease，CPID)最为常见，因其易反复导致患者生活质量下降，约有20%的CPID患者因输卵管瘢痕导致不孕，9%发生异位妊娠，18%出现慢性盆腔疼痛[3]。目前，药物治疗是CPID的主要治疗手段，但治疗效果并不理想。微小RNA(microRNA，miRNA)是一种长度在19～24个核苷酸之间的小型非编码RNA，其可调节特定靶点，参与多种生理和病理过程[4-5]。miRNA表达水平在循环系统中较为稳定，可用于评估疾病情况及治疗效果[6]。有研究发现，miRNA-224-3P对炎症反应有一定的抑制作用[7]，但其与CPID的关系目前尚不清楚。转化生长因子β(transforming growth factor beta，TGF-β)与炎症、炎症性损伤和上皮恢复有一定的关系[8-9]，在损伤组织的修复和细胞更新以及机体炎症反应的发生发展中有举足轻重的作用[10]。本研究探讨妇炎康联合物理因子治疗慢性盆腔炎的疗效及其对miRNA-224-3P及TGF-β/Smad信号通路表达的影响。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年3月至2018年10月在我院治疗的62例CPID患者作为研究对象，纳入标准：(1)患者及其家属对本研究均知情同意，并签署知情同意书；(2)患者符合《2010年美国疾病控制中心盆腔炎治疗指南》CPID诊断标准[11]；(3)经影像学检查显示盆腔有积液。排除标准：(1)合并肝肾功能不全患者；(2)合并其他炎症性疾病患者；(3)患有精神疾病患者；(4)中途退出研究者。按随机数字表法将62例患者分为观察组和对照组，每组31例，其中观察组年龄24～45(35.31±4.29)岁，病程0.4～10.2(4.26±2.67)年；对照组年龄27～43(35.46±3.25)岁，病程0.3～10.6(4.38±2.59)年。两组患者年龄、病程差异均无统计学意义(均P>0.05)。本研究获得医院伦理委员会审核通过。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法：对照组给予口服诺氟沙星和甲硝唑抗感染治疗，其中诺氟沙星片(上海新亚药业有限公司，国药准字：H20031181，批号：20190409)0.1 g/次，3次/d；甲硝唑(银川生化制药厂，国药准字：H64020094，批号：20190613)0.2 g/次，3次/d，28 d为一个疗程。观察组患者在对照组治疗方案基础上，给予口服妇炎康片(广东德鑫制药有限公司，国药准字Z44023648，批号：201900714，规格：0.25 g×18片×6板)1.5 g/次，3次/d，28 d为一个疗程，并给予物理因子(中频电)治疗，中频电治疗方法：患者取仰卧位，在下腹部放置2个带衬垫的矩形电极，利用砂袋固定好，设置合适的电流强度，40 min/次，1次/d，20 d为一个疗程。两组均治疗一个疗程。

1.2.2 观察指标：(1)TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平：治疗前、疗程结束后3 d内采集患者空腹静脉血约3 mL，室温下静置1 h，3 500 r/min离心5 min后收集血清，储存于-80℃备用。采用酶联免疫吸附测定试验检测血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平，其中TGF-β1试剂盒购自美国eBioscience公司(批号：70-EK1812)，Smad-3(批号：121201)和Smad-7(批号：121271)试剂盒均购自上海西塘公司，均按照试剂盒说明书步骤进行操作。(2)miRNA-224-3P相对表达水平检测：采集患者治疗前、疗程结束后3 d内空腹静脉血约3 mL，室温下静置1 h，3 500 r/min离心5 min后收集血清，储存于-80℃备用。采用RNA提取试剂盒(北京天根生化科技公司，批号：DP419)提取血清总RNA，DU800型分光光度计测定RNA的浓度及纯度，随即进行逆转录反应(每15 μL反应体系加入含3 μL逆转录引物和7μL Master，5 μL RNA样品，逆转录成cDNA)，以cDNA为模板，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)作为内参，按照实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)试剂盒(北京天根生化科技公司，批号：KR113)说明书检测miRNA-224-3P的相对表达水平，反应条件：95℃ 15 min，94℃ 15 s，55℃ 30 s，70℃ 35 s，40个循环，采用2-ΔΔCt计算miRNA-224-3P的相对表达水平。miRNA-224-3P正向引物5′-AAAAUGGUGCCCUAGUGACUACA-3′；反向引物5′-UGAAGUCACUAGGGCACCAUUU U-3′，GAPDH正向引物5′-GTGCGTGTCGTGGAGTCG-3′，反向引物 5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。引物由上海生工生物技术有限公司合成。

1.2.3 疗效评价[12]：疗程结束后3 d内进行疗效评价。痊愈：盆腔肿块、性交痛、下腹坠胀以及异常白带等症状完全消失，机体炎症水平恢复正常，妇科检查无按压痛；显效:盆腔肿块、性交痛、下腹坠胀以及异常白带等症状基本消失,机体炎症水平显著降低,妇科检查无按压痛,B超检查正常,3个月无复发；有效:盆腔肿块、性交痛、下腹坠胀以及异常白带等症状改善,机体炎症水平降低,妇科检查按压痛情况、B超检查情况均改善；无效:未达到“有效”标准。总有效率=(痊愈+显效+有效)例数/总例数×100%。

1.3 统计学分析 采用SPSS 20.0软件进行统计学分析。计量资料以(x±s)表示，组间比较采用独立样本t检验，组内比较采用配对t检验；计数资料以例数(百分比)表示，组间比较采用χ2检验；等级资料比较采用秩和检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组患者血清miRNA-224-3P相对表达水平比较 治疗前，两组miRNA-224-3P相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05)，治疗后，两组miRNA-224-3P相对表达水平较治疗前升高，且观察组高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组患者血清miRNA-224-3P相对表达水平比较(x±s)

2.2 两组患者血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平比较 治疗前，两组患者血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，两组患者血清TGF-β1、Smad-3水平均较治疗前降低，Smad-7水平均较治疗前升高，且观察组TGF-β1、Smad-3水平低于对照组，Smad-7水平高于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 患者治疗前后血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平比较(x±s，pg/mL)

2.3 两组患者疗效比较 观察组疗效优于对照组(P<0.05)，但两组总有效率差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 两组患者疗效比较[n(%)]

3 讨 论

CPID是一种在盆腔或与盆腔相关的结构中持续、非循环疼痛的炎症，长期的炎症状态导致身体其他部位受到牵连[13]，加上CPID具有较高的发病率和容易复发的特点，严重影响患者的生活质量。研究显示，CPID多为病原体感染所导致，主要表现为盆腔组织或周边组织的炎症反应，而机体免疫损伤和炎症相关细胞因子的异常表达与CPID的发生发展密切相关[14-15]。目前CPID的治疗以抗生素治疗为主，但部分患者感染源不明确，导致抗生素的选择受到一定的限制，病情严重者需进行手术治疗。物理因子治疗是利用物理因子的物理能，调节机体的神经、体液、内分泌等生理机能，起到消散炎症及清除残留浸润硬结的作用，同时还可以预防并发症，故物理因子治疗在CPID、颈椎病及多种炎症性疾病的临床治疗中得到广泛应用[16-17]。妇炎康具有清热解毒、软坚散结、消炎止痛等功效，治疗阴道炎、CPID等疾病有显著的临床效果[7,18]。本研究结果显示，在常规抗感染治疗基础上，给予妇炎康联合物理因子治疗CPID的疗效优于单纯常规抗感染治疗(P<0.05)，提示妇炎康联合物理因子治疗CPID的临床疗效更好。

miRNA-224-3p是miRNA-224家族成员之一，研究显示，miRNA-224-3p高表达可导致Toll样受体4的激活受到抑制[19]，大鼠NRK-52E细胞的炎症反应减轻，缺氧无糖损伤诱导的细胞凋亡得到改善[9]。还有研究显示，雷公藤甲素通过上调miRNA-224-3p表达水平改善高糖诱导的NRK-52E细胞炎症反应[20]。以上研究结果提示 miRNA-224-3p与机体炎症反应密切相关，但miRNA-244家族成员与盆腔炎症的相关性鲜见报告。本研究结果显示，治疗后两组血清miRNA-224-3p相对表达水平均较治疗前升高，且观察组高于对照组(P<0.05)，提示低表达的miRNA-224-3p可能与盆腔炎的发生发展有关，上调miRNA-224-3p表达水平有助于缓解盆腔炎症状，提高疗效，而妇炎康联合物理因子治疗可以促进miRNA-224-3p的表达。TGF-β/Smad通路在调节组织炎症损伤以及修复中起着关键作用[21]，TGF-β1是细胞因子超家族的一员，其可调控细胞生长和分化、黏附以及凋亡的整个过程，还参与机体损伤的修复、炎症的发生发展等多种病理过程，被认为是调控组织炎症和修复机体损伤的关键细胞因子之一。有研究显示，机体发生炎症损伤后TGF-β1表达增加，这与其参与上皮炎症的损伤和修复有关[22]。Smad是目前发现的唯一存在细胞内的TGF-β相应酶激活物[23]，其可介导TGF-β在细胞内的信号传导，其中Smad3和Smad7在TGF-β/Smad信号通路的转导过程中有着重要的作用，Smad7作为TGF-β蛋白的负调控因子，在整个信号通路中起着负调控的作用[24]。本研究结果显示，治疗后两组TGF-β1、Smad-3的表达较治疗前下降，Smad-7的表达较治疗前上升，且观察组变化更明显(P<0.05)，提示药物干预后TGF-β1/Smad信号通路表达受到抑制，而妇炎康联合物理因子治疗CPID可以提高疗效可能与调节TGF-β/Smad信号通路作用相关。但有研究发现多种药物具有上调CPID患者TGF-β1表达的作用[25-26]，与本研究结果存在差异，可能与纳入的研究对象年龄及病程不同有关，且药物对信号通路的影响是一个复杂的过程，本研究结果还有待进一步验证。

综上所述，在常规抗感染基础上，给予妇炎康联合物理因子治疗CPID患者疗效优于常规抗生素治疗，这可能与其促进miRNA-224-3P表达，调节TGF-β/Smad信号通路有关。