急性心肌梗死患者MEG3、CEACAM1表达水平及与短期预后结局的关系

王显凤,王 麟

(青海省心脑血管病专科医院急诊科,青海西宁 810001)

急性心肌梗死是指因冠状动脉急性缺血、缺氧而导致的心肌损伤、坏死，目前临床多通过患者血清标志物及影像学检查进行诊断。除常用的血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)外，血液分子生物学标志物中的血浆脑钠肽、长链非编码RNA等是现代临床心血管疾病的研究热点。有报道显示，长链非编码RNA与心力衰竭、心肌增厚密切相关，目前已知的与人有关的长链非编码RNA包括母系表达基因3(MEG3)、Malta1、Tug1等[1]，其中MEG3是第一个被发现的具有肿瘤抑制作用的长链非编码RNA，在多种肿瘤中的抑瘤或促瘤作用已被证实[2]，但其对急性心肌梗死的影响少有报道。此外，张在勇等[3]研究表明，癌胚抗原相关黏附因子1(CEACAM1)可促进柯萨奇病毒对心肌细胞的损伤作用，推测CEACAM1与急性心肌梗死中心肌受损也可能相关。本研究通过检测急性心肌梗死患者外周血中CEACAM1与MEG3表达水平，分析其与患者短期预后的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2016年11月至2019年11月本院收治的急性心肌梗死患者106例作为研究组,男57例，女49例；平均年龄(65.37±5.09)岁；平均发病至入院时间(6.12±0.83)h。另选择100例同期来本院体检健康者作为对照组,男52例，女48例；平均年龄(64.18±4.72)岁。两组研究对象性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2纳入和排除标准

1.2.1纳入标准 (1)经心电图、冠状动脉造影、血清标志物检查，符合中华医学会制定的急性心肌梗死诊治指南中的诊断标准[4]；(2)近1个月内无大型外科手术史；(3)年龄>18岁。

1.2.2排除标准 (1)入组前已接受过药物治疗；(2)严重心、肝、肾功能不全；(3)合并恶性肿瘤；(4)有心力衰竭、房颤等心脏病史；(5)妊娠及哺乳期妇女；(6)近1个月内有肌肉受损史，且可能影响血液CEACAM1与MEG3表达水平。

1.3方法 研究组患者入院后立即采集2管静脉血、离心后分别进行血清CK-MB、cTnI、CEACAM1及血浆MEG3及血常规检测。血清CK-MB、cTnI、CEACAM1采用酶联免疫吸附试验检测，试剂盒购自上海隆诚生物科技有限公司，操作步骤严格按照试剂盒说明书执行。血浆MEG3 mRNA通过提取血清中总RNA后采用实时荧光定量PCR测定，具体方法：(1)在250 μL血清中加入750 μL总RNA提取剂Trizol(北京索莱宝科技有限公司，批号15596-018)，混匀后静置5 min，再加入200 μL氯仿，混匀静置10 min后离心，保留上清液；(2)将上清液转入新EP试管中，加入等体积异丙醇，混匀静置3 min后离心10 min；(3)将离心后的液体转入新EP试管中，加入75%乙醇1 mL，离心3 min；(4)倒出离心后的乙醇，并吸净剩余液体；(5)向试管中加入10 μL无Rnase双蒸水DDw溶解RNA；(6)采用分光光度计(上海美谷科技有限公司，型号SpectraMax QuickDrop)测定230、260、280 nm处吸光度(A)值，绘制曲线，评估RNA纯度，见图1。曲线光滑，表示RNA纯度较好。实时荧光定量PCR：采用PCR仪(朗基科仪，型号Q1000)将提取得到的总RNA进行反转录，得到cDNA，以其作为模板进行扩增，最终以2-ΔΔCt值表示目标RNA水平，Ct值为反应管内荧光信号达到阈值时所经历的循环数。研究组患者均在入院后12 h内接受急诊直接冠状动脉介入(PCI)治疗，根据病情给予他汀类、β受体阻滞剂等药物。治疗1个月后进行超声心动图检查，检测所有患者左室射血分数(LVEF)。治疗后对所有患者进行为期3个月随访，记录心血管不良事件发生率，包括再发心力衰竭、再发心绞痛、心律失常、心源性休克、死亡。对照组血清CK-MB、cTnI、CEACAM1及血浆MEG3检测在体检当天进行。研究组血清CEACAM1、血浆MEG3检测完毕后，根据测得的CEACAM1中位数(5 023 pg/mL)将研究组分为高CEACAM1组(CEACAM1≥5 023 pg/mL，61例)和低CEACAM1组(CEACAM1<5 023 pg/mL，45例)；根据测得的MEG3中位数(0.021)将研究组又分为高MEG3组(MEG3≥0.021，57例)和低MEG3组(MEG3<0.021，49例)。

1.4观察指标 (1)两组研究对象一般资料；(2)研究组与对照组血清CK-MB、cTnI、CEACAM1及血浆MEG3水平；(3)研究组血清CEACAM1及血浆MEG3与血清CK-MB、cTnI的相关性；(4)高CEACAM1组与低CEACAM1组、高MEG3组与低MEG3组血清CK-MB、cTnI、CEACAM1及血浆MEG3水平；(5)高CEACAM1组与低CEACAM1组、高MEG3组与低MEG3组LVEF；(6)高CEACAM1组与低CEACAM1组、高MEG3组与低MEG3组心血管不良事件发生率。

图1 RNA纯度曲线

2 结 果

2.1研究组与对照组血清CK-MB、cTnI、CEACAM1及血浆MEG3水平比较 研究组血清CK-MB、cTnI、CEACAM1及血浆MEG3水平均高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2研究组血清CEACAM1及血浆MEG3与血清CK-MB、cTnI的相关性 研究组血清CEACAM1及血浆MEG3与血清CK-MB、cTnI均呈正相关(P<0.05)，见表2。

表1 研究组与对照组血清CK-MB、cTnI、CEACAM1及血浆MEG3水平比较

表2 研究组血清CEACAM1及血浆MEG3与血清CK-MB、cTnI的相关性

2.3高、低CEACAM1组及高、低MEG3组血清CK-MB、cTnI、CEACAM1及血浆MEG3水平比较 高CEACAM1组血清CK-MB、cTnI及血浆MEG3水平均高于低CEACAM1组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3；高MEG3组血清CK-MB、cTnI及血浆MEG3水平均高于低MEG3组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表4。

2.4高、低CEACAM1组及高、低MEG3组LVEF比较 高CEACAM1组LVEF为(46.32±4.27)%，低CEACAM1组LVEF为(53.16±6.45)%，两组LVEF比较，差异有统计学意义(t=-6.184,P<0.001);高MEG3组LVEF为(44.13±4.15)%,低MEG3组LVEF为(52.35±6.08)%，两组LVEF比较，差异有统计学意义(t=-7.823,P<0.001)。

表3 高、低CEACAM1组血清CK-MB、cTnI、CEACAM1及血浆MEG3水平比较

表4 高、低MEG3组血清CK-MB、cTnI、CEACAM1及血浆MEG3水平比较

表5 高、低CEACAM1组心血管不良事件发生情况比较[ n(%)]

表6 高、低MEG3组各种心血管不良事件发生情况比较[ n(%)]

2.5高、低CEACAM1组及高、低MEG3组心血管不良事件发生情况比较 高CEACAM1组各种心血管不良事件发生率均高于低CEACAM1组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表5;高MEG3组各种心血管不良事件发生率均高于低MEG3组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表6。

3 讨 论

急性心肌梗死患者临床多表现为持续胸骨后疼痛，且含服硝酸甘油后症状也无法完全缓解，严重者可导致休克、心力衰竭，危及患者生命安全[5]。近年来,我国急性心肌梗死发病率呈逐年上升趋势，其发病与过度劳累等因素有关[6]。急性心肌梗死起病急、发展迅速，发病后及时确诊并给予治疗是保障患者生命安全的重要措施。经心电图等影像学检查及CK-MB、cTnI等心肌损伤标志物检测是诊断及评估患者病情的重要手段[7]。同时,随着分子生物学的发展，对急性心肌梗死患者血液中其他敏感分子的研究也逐渐增多，研究目的旨在探究急性心肌梗死患者发病时变化敏感的标志物，为临床评估疾病病情发展及预后提供重要参考。

VAUSORT等[8]研究发现，心肌梗死患者血液中有5种与健康对照组有明显差异的长链非编码RNA，提示长链非编码RNA可能作为治疗、预防心肌梗死的新靶点。有研究显示，长链非编码RNA中的MEG3在胃癌中可通过p53通路抑制癌细胞进一步增殖[9]。有研究显示，MEG3在慢性髓系白血病中参与患者对伊马替尼的耐药机制，导致患者对伊马替尼耐药[10]，提示MEG3在多种疾病中与疾病的发生、发展、治疗及预后有关，但其在急性心肌梗死中的作用少有研究结果支持。CEACAM1属于免疫球蛋白超家族成员，可表达于多种细胞、组织、血管。有研究显示，CEACAM1在乙型肝炎、肝癌中呈低表达，且与肿瘤大小、浸润及转移有关[11]。也有研究在胃癌中发现CEACAM1呈高表达，并且可促进胃癌细胞侵袭和转移[12]，提示CEACAM1在肿瘤疾病中可能作为一种癌基因，也可能作为抑癌基因广泛存在，其生物学效应较广，但其在心血管疾病中的效应尚不完全明确。

本研究在对研究组患者外周血进行CEACAM1、MEG3水平检测后，将研究组按照CEACAM1、MEG3水平高低分别分为高水平及低水平组，以探究其表达水平高低与急性心肌梗死患者心肌损伤、预后的关系。结果显示，研究组CEACAM1、MEG3、CK-MB、cTnI表达水平均明显较高，表明CEACAM1、MEG3在急性心肌梗死患者血液中呈高表达。进一步进行相关性分析显示，CEACAM1、MEG3与CK-MB、cTnI均呈正相关。CK-MB、cTnI均是临床常用的心肌损伤标志物，在发病6 h内其表达水平即可明显升高，且其表达水平越高表示心肌损伤越重。本研究结果提示，CEACAM1、MEG3可能在急性心肌梗死中与CK-MB、cTnI存在协同关系，共同参与急性心肌梗死的发病过程。高CEACAM1组及高MEG3组CK-MB、cTnI、MEG3水平均分别高于低CEACAM1组和低MEG3组，这一结果提示CEACAM1与MEG3表达水平越高，心肌损伤越严重，与前文相关分析结果一致。分析其原因，可能是由于CEACAM1通过增强心肌细胞线粒体功能障碍和内质网应激诱导的凋亡，加重缺氧心肌细胞损伤和梗死后心肌重构[13]。高CEACAM1组及高MEG3组LVEF均分别高于低CEACAM1组和低MEG3组。LVEF正常值为50%以上，健康人安静状态下一般为55%～65%，心肌收缩力越强，LVEF越高。本研究中，高CEACAM1组及高MEG3组LVEF均较低，提示治疗后急性心肌梗死患者的心肌收缩能力与CEACAM1、MEG3表达量有关，低表达的CEACAM1、MEG3可能更有利于患者预后恢复；低CEACAM1组和低MEG3组均无心源性休克和死亡患者，再发心力衰竭、再发心绞痛及心律失常发生率也较低。表明高水平CEACAM1和MEG3可能会增加患者心血管不良事件的发生率，对患者预后不利。

4 结 论

综上所述，CEACAM1与MEG3均在急性心肌梗死患者外周血中呈高表达，且二者表达水平越高，心肌损伤程度可能越重，持续高表达的CEACAM1与MEG3会增加治疗后心血管不良事件的发生率，同时减慢患者心肌收缩力的恢复速度。CEACAM1与MEG3可能作为急性心肌梗死患者病情评估、治疗及预后的新标志物，但本研究未对两种分子在急性心肌梗死中的作用机制进行详细探究，后续还需通过增加样本量进一步研究。