野菊花药材与菊花药材特征图谱的比较△

史紫娟，林碧珊，曾杉，陈锦霞

国药集团广东环球制药有限公司，广东 佛山 528305

野菊花为菊科植物野菊ChrysanthemumindicumL.的干燥头状花序[1]314-315，秋、冬两季花初开放时采摘，晒干或蒸后晒干。其味苦，性微寒，归肝、心经，具有清热解毒、泻火平肝之功效[2]，用于治疗痈肿疮毒、湿疹、宫颈炎、前列腺炎、肛窦炎、高血压等[3]。菊花为菊科植物菊C.morifoliumRamat.的干燥头状花序，具有散风清热、平肝明目、清热解毒的功效，用于风热感冒、头痛眩晕、目赤肿痛、眼目昏花、疮痈肿毒等[1]310-311。

菊花为野菊花的易混淆品种，目前有野菊花或菊花指纹图谱的研究报道[4-8]。但未见采用特征图谱对二者进行区别的研究。本研究从整体上对野菊花药材和菊花药材进行鉴别研究，为药材应用提供参考。

1 材料

1.1 试药

对照品绿原酸(批号：110753-201716，纯度：99.3%)、木犀草苷(批号：111720-201408，纯度：94.9%)、蒙花苷(批号：11528-201710，纯度：96.6%)均购自中国食品药品检定研究院；对照品4-咖啡酰奎宁酸(批号：DST170210-035，纯度：99.79%)、3，5-二咖啡酰奎宁酸(批号：DST180110-036，纯度：99.5%)、4，5-二咖啡酰奎宁酸(批号：DST170210-038，纯度：99.47%)均购自成都德思特生物技术有限公司；乙腈、磷酸为色谱纯；乙醇为分析纯；水为自制超纯水。

野菊花、菊花药材经广东一方制药有限公司质量中心鉴定，为菊科植物野菊C.indicumL.的干燥头状花序及菊科植物菊C.morifoliumRamat.的干燥头状花序，药材来源分别见表1～2。

表1 野菊花药材来源

表2 菊花药材来源

1.2 仪器

Waters H-Class型高效液相色谱仪(PDA检测器，四元梯度泵，美国沃特世公司)；AL104型电子天平、PL203型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HH-4型数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

CORTECS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm，1.6 μm)；以乙腈为流动相A、0.1%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱(0～5 min,100%～85% B;5～15 min,85%～60%B;15～18 min,60%～10%B;18.1～22 min,100%B)；体积流量0.3 mL·min-1；检测波长326 nm；柱温25 ℃；进样量1.0 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备 分别称取绿原酸、4-咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸和蒙花苷6种对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度分别为21.10、28.00、40.20、28.10、24.90、25.78 μg·mL-1的混合溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备 取野菊花和菊花药材粉末(过三号筛)约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇50 mL，称定质量，加热回流30 min，放冷，再称定质量，用60%乙醇补足减失的质量，摇匀，离心，用0.22 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1精密度试验 精密称取野菊花和菊花药材各0.25 g，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，精密吸取同1份供试品溶液，按2.1项下色谱条件连续进样6次，以共有峰的相对保留时间和相对峰面积为指标计算RSD值，结果均小于2.0%，表明仪器精密度良好。

2.3.2重复性试验 精密平行称取野菊花和菊花药材各6份，按2.2.2项下的方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，以共有峰的相对保留时间和相对峰面积计算RSD值，结果均小于3.0%；表明该方法重复性良好。

2.3.3稳定性试验 精密吸取同1份野菊花和菊花药材供试品溶液，在相同的条件下分别在0、2、4、6、19、20、24 h测定，以共有峰的相对保留时间和相对峰面积为指标计算RSD值，结果均小于2.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4 样品测定与分析

分别取15批野菊花药材和12批菊花药材粉末各0.25 g，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件依次进样测定，记录色谱图，采用国家药典委员会颁布的“中药指纹图谱相似度评价系统(2012版)”对色谱图进行匹配，得到了野菊花药材特征图谱和菊花药材特征图谱，15批野菊花药材和12批菊花药材的UPLC特征图谱见图1～2。同时进行了相似度分析，结果见表3。

通过对比保留时间和紫外吸收的方法指认了6个共有峰，分别为绿原酸(1号峰)、4-咖啡酰奎宁酸(2号峰)、木犀草苷(3号峰)、3，5-二咖啡酰奎宁酸(4号峰)、4，5-二咖啡酰奎宁酸(5号峰)、蒙花苷(6号峰)，指认结果见图3。以蒙花苷参照物峰为S峰，计算绿原酸峰与蒙花苷峰的相对峰面积。结果见表4。

注：1～6号峰分别为15批野菊花药材特征峰。图1 15批野菊花药材UPLC特征图谱

注：1～6号峰分别为12批菊花药材特征峰。图2 12批菊花药材UPLC特征图谱

表3 野菊花药材和菊花药材的相似度结果

注：1～6号峰分别为绿原酸、4-咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸、蒙花苷(S)；A.对照品；B.野菊花药材；C.菊花药材。图3 对照品色谱图、野菊花药材特征图谱及菊花药材特征图谱

表4 多批野菊花药材和菊花药材特征图谱相对峰面积

3 讨论

预试验中对提取溶剂、提取方式和提取时间分别进行了考察，采用甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、60%乙醇、水为提取溶剂，结果70%甲醇和60%乙醇对野菊花和菊花药材主要成分的分离效果均较好，由于60%乙醇比70%甲醇更加安全、经济，最终选择60%乙醇为提取溶剂。通过考察超声和回流2种提取溶剂，结果回流提取的效率优于超声提取，因此选用回流作为提取方式。对提取时间进行考察，发现提取时间对色谱峰影响不大，为节省时间，选择回流提取30 min作为样品的提取方法。

本研究以蒙花苷为参照峰确定了野菊花药材和菊花药材的6个共有峰，计算绿原酸峰与蒙花苷峰的相对峰面积，发现15批野菊花药材的相对峰面积在0.152～0.265，均小于1.0，而12批菊花药材的相对峰面积均大于1.0，根据特征图谱中绿原酸峰与蒙花苷峰的相对峰面积可快速鉴别野菊花药材和菊花药材。