荧光定量PCR和ELISA法对支原体肺炎诊断的临床意义

丁治伟 赵燕萍

【摘 要】目的：探讨荧光定量PCR和ELISA法对支原体肺炎诊断的临床意义，以为支原体肺炎患儿临床治疗和监测预后提供可行性借鉴。方法：采用医学研究对比法，随机筛选我院检验科2019年3月-2020年3月收治的400例患儿为受试对象，依照原体肺炎诊断环节相关方法差异，等分对照为对照组和观察组两列，分别是以ELISA法检验和荧光定量PCR检验法检测，观察每组对支原体肺炎诊断的诊断疗效。结果：观察组肺炎支原体阳性检验正确率为95%（190/200）明显高于对照组检验正确70%（140/200），有统计学意义，P<0.05。结论：荧光定量PCR在支原体肺炎患儿肺炎支原体的检验成效突出，比之ELISA法更具诊断成效，值得临床推广实施。

【关键词】荧光定量PCR;ELISA法;支原体肺炎;诊断;临床意义

【中圖分类号】R965.2【文献标识码】A【文章编号】1005-0019（2020）20--02

肺炎支原体（mycoplasma pneumonia，MP）是呼吸内科常见急性呼吸道感染性疾病，也是社区获得性肺炎病原菌中较为常见的诱因之一[1]。从感染致病菌特点来看，多为儿童，且与呼吸道感染的临床表现相似。借助实验室检查，可有助患者治疗和监测预后，以避免疾病进展对患儿脏器和肺外并发症及其对中枢神经损伤，具有重要的检验价值。荧光定量PCR（（ realtime fluorescence quantitative PCR）和ELISA法（酶联免疫吸附实验）的检验对比分析，一度成为临床检验患者为的热点，现对两种不同检验方式的检验过程及其途径分析总结如下：

1 临床资料和方法

1.1 一般材料

采用医学研究对比法，随机筛选我院检验科2019年3月-2020年3月收治的400例患儿为受试对象，依照原体肺炎诊断环节相关方法差异，等分对照为对照组和观察组两列，其中第一小组：男110例，女90例，年龄0.5-76岁，平均年龄（37.08±1.92）岁;观察组：男111例，女89例，年龄1-75岁，平均年龄（37.18±1.82）岁。两组参选对象的临床基础资料差异在年龄、起病时间、感染程度上差异不明显，不具统计学意义（P>0.05）

1.2 方法

分别是以ELISA法检验和荧光定量PCR检验法检测，临床观察每组对支原体肺炎诊断的诊断疗效。

ELISA法：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤，后一遍用DDW洗涤。加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。结果判定。

荧光定量PCR检验： 2.0%琼脂糖凝胶制备;将制备好的电泳胶放入电泳槽（带梳子孔的一端在阴极），倒入电泳液（1×TBE）浸过胶面即可;PCR产物各取10μL，加入2μL上样缓冲液（6×Loading Buffer），混匀后加入电泳胶孔内（先加Marker（DL-2000）5μL，然后依次加标本PCR产物，再加阴性对照，最后加阳性对照产物;电泳电压100V，约30～40min后看结果;将电泳胶放入凝胶成像系统观察结果并照相;结果判断[2-3]。

1.3 统计学分析

应用IBM SPSS Statistics 24.0（社会科学统计软件包）对所有研究数据进行统计分析，计数资料以（n/%）表示，用χ2 检验，，当卡方值P<0.05时，有统计学意义。

2 结果

观察组肺炎支原体阳性检验正确率为95%（190/200）明显高于对照组检验正确70%（140/200），有统计学意义，P<0.05。详见下表1所示：

3 讨论

小儿肺炎支原体肺炎是肺炎中常见、多发类型。在治疗中，通过临床症状、疾病史、实验室检查等手段进行必要的抗炎治疗，以降低并发症危害。

目前对支原体肺炎的检查中，酶联免疫法检验以其批量标本测定价值、简单易行、成本低廉、灵活性掌握价值极高，但假阳性结果较多。故此，荧光定量PCR在支原体肺炎患儿肺炎支原体的检验，更具替代性价值。本研究的结果表明，观察组肺炎支原体阳性检验正确率为95%（190/200）明显高于对照组检验正确70%（140/200），有统计学意义，P<0.05。

文献资料进一步佐证，ELISA法阳性率明显高于对照组（P<0.05），C反应蛋白、血沉较低（P<0.05）;小儿肺炎支原体感染进行检测，可明显发现其阳性率异常升高，而C反应蛋白、血沉则有所下降，证明临床检验对诊断起着重要价值[4]。实时荧光定量聚合酶链式反应对儿童肺炎支原体肺炎诊断的敏感度略高于快速培养法;实时荧光定量聚合酶链式反应对儿童肺炎支原体肺炎诊断的特异度、符合率分别为为91.84%、88.33%，高于快速培养组的77.56%、76.66%;实时荧光定量聚合酶链式反应能够早期检出儿童肺炎支原体，具有较高的特异度与符合率[5]。胶体金法（A组）、被动凝集法（B组）和并联组（C组）三组阳性率分别是45.45%、32.72%和52.72%;在疑似肺炎支原体感染时，应联合胶体金法和被动凝集法检测患儿血清支原体MP-IgM抗体和肺炎支原体抗体，可提高检出率，为临床提供更有利的诊断依据[6]。

定量检测结果以其重复性实验和第三方检验方法的贯彻实施，为弥补常规检验方法缺憾的有效方法。本次医学观察研究中，观察组肺炎支原体阳性检验正确率为95%（190/200）明显高于对照组检验正确70%（140/200），有统计学意义，P<0.05。从荧光定量PCR技术的应用成效来讲，具有灵敏性、特异性、重复性、正确性等特征，而从荧光定量聚合酶链反应检测法的比较优势来看，荧光定量PCR检测支原体肺炎以其定量检测BALF MP-DNA阳性和血清MP-IgM阳性的诊断价值，为临床所采用。

综上所述，荧光定量PCR在支原体肺炎患儿肺炎支原体的检验成效突出，比之ELISA法更具诊断成效，值得临床推广实施。

参考文献

王松，何玲.儿童难治性肺炎支原体肺炎的危险因素分析[J].临床检验杂志（电子版），2020，9（3）：78-80

杨侠.PCR技术在儿科支原体肺炎诊断中的应用[J].临床检验杂志（电子版），2020，9（3）：186

郭晶.小儿肺炎支原体感染诊断中快速血清学检验和微生物快速培养检测的应用[J].临床检验杂志（电子版），2020，9（3）：346-347

于金涛.分析小儿肺炎支原体感染临床检验的诊断价值[J].临床检验杂志（电子版），2020，9（3）：169

曾凡燕，徐娅.实时荧光定量聚合酶链式反应用于儿童肺炎支原体检验中的临床效果分析[J].临床检验杂志（电子版），2020，9（3）：333-334

李齐光，邱宇翔，钟国权.探讨两种不同检测方法对肺炎支原体感染诊断中的价值[J].医学食疗与健康，2020，（6）：166，168