不同加工方式丹参饮片薄层鉴别研究

邹欣蓉，谢 宇，龙立慧，罗钰梅，张玲贞，张洪友，张丽艳*

(1.贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025；2.贵州广济堂药业有限公司，贵州 贵阳 550014)

丹参是现代医学研究较多的传统中药材之一，为唇形科(Labiatae)鼠尾草属丹参(SalviamiltiorrhizaBge.)的干燥根及根茎[1]。丹参最早见于《神农本草经》，主产于河北、四川、山东等地，在我国有近2 000年的应用历史[2]。丹参广泛用于治疗各种瘀血所致的病症，有活血化瘀、除烦安神等功效[3]，是一种常用的活血化瘀药。现代药理学及临床应用表明，丹参不仅在活血化瘀方面有很好的疗效，还在改善心脑血管疾病、抗肿瘤、抗氧化等方面具有良好的药理作用[4-5]。

超微粉碎技术在20世纪末开始应用于中药行业，破壁饮片是继单味浸膏颗粒后出现的一类新型中药饮片。破壁饮片是可供直接口服的粉末中药饮片，是传统饮片利用现代超微粉碎技术粉碎加工为D90<45 μm(300目以上)的粉体[6]。本研究使用的丹参普通破壁饮片、冷冻破壁饮片分别经普通球磨破壁机、冷冻球磨粉碎机超微粉碎加工而成。与传统饮片相比，破壁饮片具有以下优点：①成分与传统饮片一致；②提高药材活性物质利用率和提取率；③携带、服用方便；④提高中药质量可控性等[7-9]。

目前，丹参破壁饮片的研究涉及工艺、质量、安全、有效性以及临床应用等方面。本研究旨在建立丹参传统饮片、普通破壁饮片和冷冻破壁饮片中的脂溶性代表成分丹参酮ⅡA和水溶性代表成分丹酚酸B的薄层鉴别方法，分析不同加工方式丹参饮片的差异，为丹参破壁饮片安全、合理、有效地应用和生产提供参考。

1 实验材料

1.1 试药

10批样品为从不同省市零售药店或饮片公司购得的丹参饮片，所有样品均经贵州中医药大学植物栽培教研室魏升华教授鉴定为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎。每批丹参样品随机分为3份，一份经实验粉碎机粉碎过2号筛为传统饮片，一份经普通球磨破壁机超微粉碎直至D90<45 μm为普通破壁饮片，另一份由冷冻球磨粉碎机超微粉碎至D90<45 μm为冷冻破壁饮片。其中，破壁饮片由贵州广济堂药业有限公司提供。药材来源信息见表1。

表1 丹参药材来源

1.2 仪器

KQ5200DE超声清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；JP2-160电子分析天平(日本)；HH-4数显恒温水浴锅(上海浦东物理光学仪器厂)；ZF7紫外分析仪(巩义市予华仪器有限责任公司)。

1.3 试剂

硅胶G(批号：20180601，青岛鼎康硅胶有限公司)；硅胶GF254(批号：20180619，青岛鼎康硅胶有限公司)；丹酚酸B(批号：11907227)、 丹参酮ⅡA(批号：110766-201721)、丹参对照药材(批号：120923-201615)均购于中国食品药品检定研究院；甲苯、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 丹参酮ⅡA供试品及对照品溶液制备

供试品溶液：精密称取丹参传统饮片、普通破壁饮片、冷冻破壁饮片药材粉末各1 g，分别置锥形瓶中，各加乙酸乙酯8 mL，用超声提取30 min后滤过，滤液水浴蒸干，再加入乙酸乙酯1 mL使其溶解，作为供试品溶液。

丹参酮ⅡA对照品溶液：取丹参酮ⅡA对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成约1 mg·mLkg-1的溶液，作为对照品溶液。

2.1.1 传统饮片丹参酮ⅡA的TLC鉴别 吸取上述对照品溶液和传统饮片供试品溶液各5 μL。根据薄层色谱法2015年版《中国药典》四部通则0502试验，以甲苯-乙酸乙酯(19∶3)为展开系统，分别依次点样于同一硅胶G板上，展开，取出，晾干，在日光下观察。结果显示，在薄层色谱图中，丹参传统饮片样品，对照品和对照药材在相应位置出现了颜色相同的斑点，色谱行为基本一致，如图1所示。

注：1.丹参酮ⅡA对照品；2.丹参对照药材；3～12.样品。

2.1.2 普通破壁饮片丹参酮ⅡA的TLC鉴别 吸取上述对照品溶液和普通破壁饮片供试品溶液各7 μL。根据薄层色谱法2015年版《中国药典》四部通则0502试验，以甲苯-乙酸乙酯(19∶3)为展开系统，分别依次点样于同一硅胶G板上，展开，取出，晾干，在日光下观察。结果显示，在薄层色谱图中，丹参普通破壁饮片样品，对照品和对照药材在相应位置出现了颜色相同的斑点，色谱行为基本一致，如图2所示。

注：1.丹参酮ⅡA对照品；2.丹参对照药材；3～12.样品

2.1.3 冷冻破壁饮片丹参酮ⅡA的TLC鉴别 吸取上述对照品溶液、冷冻破壁饮片供试品溶液各7 μL。根据薄层色谱法2015年版《中国药典》四部通则0502试验，以甲苯-乙酸乙酯(19∶3)为展开系统，分别依次点样于同一硅胶G板上，展开，取出，晾干，在日光下观察。结果显示，在薄层色谱图中，丹参冷冻破壁饮片样品，对照品和对照药材在相应位置出现了相同颜色的斑点，色谱行为基本一致，如图3所示。

注：1.丹参酮ⅡA对照品；2.丹参对照药材；3～12.样品。

2.2 丹酚酸B供试品及对照品溶液制备

供试品溶液：精密称取丹参药材传统饮片、普通破壁饮片、冷冻破壁饮片药材粉末各0.2 g，分别置圆底烧瓶中加入75%甲醇25 mL，加热水浴回流1 h，过滤，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。

丹酚酸B对照品溶液：称取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成浓度为1 mg·mLkg-1的溶液，作为对照品溶液。

2.2.1 传统饮片丹酚酸B的TLC鉴别 吸取对照品溶液、传统饮片供试品溶液各5 μL。根据薄层色谱法2015年版《中国药典》四部通则0502试验，依次点样于同一硅胶GF254板上，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸(2∶4∶3∶0.5∶2)为展开系统，展开，取出，晾干，置紫外灯(254 nm)下观察。结果显示，在薄层色谱图中，丹参传统饮片样品，对照品和对照药材在相应位置出现了颜色相同的斑点，其色谱行为基本一致，如图4所示。

注：1.丹酚酸B对照品；2.丹参对照药材；3～12.样品。

2.2.2 普通破壁饮片丹酚酸B的TLC鉴别 吸取对照品溶液、普通破壁饮片供试品溶液各5 μL。根据薄层色谱法2015年版《中国药典》四部通则0502试验，依次点样于同一硅胶GF254板上，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸(2∶4∶3∶0.5∶2)为展开系统，展开，取出，晾干，置紫外灯(254 nm)下观察。结果显示，在薄层色谱图中，丹参普通破壁饮片样品，对照品和对照药材在相应位置出现了相同颜色的斑点，色谱行为基本一致，如图5所示。

2.2.3 冷冻破壁饮片丹酚酸B的TLC鉴别 吸取对照品溶液、冷冻破壁饮片供试品溶液各5 μL。根据薄层色谱法2015年版《中国药典》四部通则0502试验，分别依次点样于同一硅胶GF254板上，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸(2∶4∶3∶0.5∶2)为展开系统，展开，取出，晾干，置紫外灯(254 nm)下观察。结果显示，在薄层色谱图中，丹参冷冻破壁饮片样品，对照品和对照药材在相应位置出现了相同颜色的斑点，色谱行为基本一致，如图6所示。

注：1.丹酚酸B对照品；2.丹参对照药材；3～12.样品。

注：1.丹酚酸B对照品；2.丹参对照药材；3～12.样品。

3 讨论

本研究对丹参传统饮片、普通破壁饮片、冷冻破壁饮片中丹参酮ⅡA的提取溶剂和展开体系进行了考察，分别以乙酸乙酯和甲醇为溶剂，结果显示用乙酸乙酯提取的样品斑点较清晰圆整；通过对展开剂进行考察发现，以甲苯-乙酸乙酯(19∶3)为展开系统可得到分离度较好、清晰圆整、明显的斑点。同时，在预实验中发现丹参传统饮片、普通破壁饮片、冷冻破壁饮片的丹参酮ⅡA薄层鉴别，在相同点样量条件下普通破壁饮片和冷冻破壁饮片的斑点不清晰，故加大点样量使斑点清晰、明显，最终确定传统饮片点样量为5 μL，普通破壁饮片和冷冻破壁饮片点样量均为7 μL，提示破壁饮片中的脂溶性成分丹参酮ⅡA可能被破坏。

丹参传统饮片、普通破壁饮片、冷冻破壁饮片中丹酚酸B的薄层鉴别研究通过对提取方法和展开体系进行考察，结果显示回流提取法和超声提取法两种提取法斑点数相同，目标点位置相同，但回流提取的样品更加稳定，故提取方法选择回流提取法；展开剂以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸(2∶4∶3∶0.5∶2)得到圆整清晰、分离度较好的斑点。丹参传统饮片、普通破壁饮片、冷冻破壁饮片中丹酚酸B的薄层鉴别结果显示，三种饮片点样量相同时，得到的色谱斑点个数、颜色、位置基本一致，由此可以初步确定，丹参经破壁处理后其丹酚酸B含量无明显变化。

有关实验研究显示，丹参酮ⅡA易受光照和温度的影响，在日光和高温条件下可发生降解反应而使含量降低[10-11]，而丹酚酸B较稳定[12]，在破壁过程中造成了脂溶性成分丹参酮ⅡA含量降低，而丹酚酸B无明显变化，可能是由于丹参酮ⅡA本身稳定性较差，也可能是受破壁过程中物料产热等因素的影响。因此，今后需对丹参破壁工艺进行深入研究，以实现丹参破壁饮片安全、合理、有效地生产和应用。