痹痛膏灸质量标准研究

徐 赛，章 斌，李顺源，卢 勇，刘兆明*

(1.雅安职业技术学院，四川 雅安 625000；2.雅安市中医医院，四川 雅安 625000)

痹痛膏灸是雅安市中医医院根据中医经典古籍《青囊秘传》，结合临床用药经验研制出的一种医院中药制剂，主要用于治疗寒湿痹阻型类风湿膝关节炎，可显著缓解患者膝关节疼痛，促进膝关节症水肿消散，改善膝关节功能[1]。其处方主要由川芎、当归、透骨草、伸筋草等八味药组成。本研究采用薄层色谱法(TLC)定性鉴别该制剂中的当归和川芎，采用高效液相色谱法(HPLC)对川芎、当归中的主要有效成分阿魏酸进行含量测定研究，为建立简便可行的痹痛膏灸质量标准提供理论依据。

1 仪器与试药

Waters e2695系列高效液相色谱仪。Waters Symmetry C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，ME204E分析天平(Mettler Toledo)，SB-5200DTN超声波清洗机(Scientz)，KDC-1044离心机(ZONKIA)。阿魏酸对照品(批号：H27J7L16718；HPLC≥98%，上海源叶生物科技有限公司)，当归对照药材、川芎对照药材均购自中国食品药品检定研究院，痹痛膏灸由雅安市中医医院提供。甲醇为色谱纯，水为纯化水，石油醚(60～90 ℃)、环己烷、乙酸乙酯、冰醋酸、乙醇均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

取痹痛膏灸3 g，加石油醚(60～90 ℃)20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液挥散至约1 mL，作为供试品溶液。另取当归对照药材、川芎对照药材各1.0 g，同法分别制成对照药材溶液。照薄层色谱法(2015年版《中国药典》四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光斑点，结果见图1。

2.2 HPLC含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Waters Symmetry C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流速：1.0 mL/min；流动相：甲醇-0.5%冰醋酸(22∶78)；柱温：30 ℃；检测波长：323 nm；对照品、样品进样量均为10 μL。

2.2.2 溶液制备 对照品溶液：取阿魏酸对照品20 mg，置于50 mL棕色容量瓶中，加入45%乙醇∶冰醋酸(20∶1)定容，得到阿魏酸储备液(0.4 mg/mL)。阿魏酸储备液按照一定比例进行稀释，得到阿魏酸对照液(10 μg/mL)。

供试品溶液：取痹痛膏灸1.5 g，精密称定，置于圆底烧瓶，精密加入45%乙醇-冰醋酸(20∶1)20 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用5%乙醇-冰醋酸(20∶1)补足减失的质量，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。

2.2.3 系统适用性试验 分别取“2.2.2”项下的对照品溶液和供试品溶液，按“2.2.1”项下的色谱条件进样，记录色谱(见图2、图3)。在阿魏酸对照品色谱峰相应的位置上，供试品色谱图中显示相同保留时间色谱峰，各色谱峰分离度均大于1.5。

注：1.阿魏酸。

注：1.阿魏酸。

2.2.4 线性与范围 取一定量阿魏酸储备液(0.4 mg/mL)进行稀释，得到浓度范围为2～10 μg/mL的标准曲线溶液。按“2.2.1”项下色谱条件依次进行测定，以阿魏酸色谱峰面积为纵坐标(y)，对照溶液浓度为横坐标(x)，计算线性方程。得到回归方程：y=50 221x-4 330.2，r=0.999 2(n=5)。结果表明，在2～10 μg/mL范围内，阿魏酸的进样量与峰面积线性关系良好。

2.2.5 精密度试验 取“2.2.2”项下对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件，重复进样6次，记录峰面积。结果显示阿魏酸峰面积的RSD值为1.21%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，室温下避光放置，置，分别在0 h，1 h，2 h，4 h，8 h，按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，得到阿魏酸峰面积RSD为1.34%，表明痹痛膏灸供试品溶液在8 h内稳定。

2.2.7 加样回收率试验 取已知含量的同一批供试品溶液6份，置于棕色容量瓶中，分别加入阿魏酸对照液适量。按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，结果见表1。

2.2.8 样品含量测定 分别取3批次痹痛膏灸样品，批号分别为20190712，20190714，20190915按照“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，用外标法计算阿魏酸的含量，结果见表2。

表2 样品中阿魏酸的含量测定结果 (μg/g)

3 结论与讨论

痹痛膏灸主要由川芎、当归、透骨草、伸筋草等八味药组成，其中川芎、当归为方中主药，辛散温通，具有活血行气养血之功效，现代药理学研究显示，川芎可抑制血小板聚集，降低血液黏稠度，扩张血管，增加局部血流量，促进炎症水肿和致痛炎症介质吸收[2]，当归具有扩张血管、缓解血管痉挛、保护血管内膜等作用[3]。川芎和当归中均含有阿魏酸，对其有效成分阿魏酸的含量测定主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、气-质联用(GC-MS)[4-7]等方法。参照《中国药典》2015年版一部川芎茶调散的测定方法，采用高效液相色谱法对阿魏酸成分进行含量测定，方法可行，重现性好，可以作为复方制剂中阿魏酸的含量测定方法。

综上所述，本研究中建立的方法操作便捷，准确度高，重复性好，可用于痹痛膏灸的质量控制。