宫颈癌患者癌组织中N-cadherin蛋白表达及其临床意义

郁胜胜 汤文娟 陈姝彤 杨一君

【摘 要】目的：考察宫颈癌患者癌组织中神经型钙粘蛋白（ N-cadherin）蛋白表達及其临床意义。方法：收集2009年12月至2014年3月在我院病理科提供的活检的子宫颈组织石蜡标本65例，同期子宫肌瘤行全子宫切除的正常宫颈组织45例为对照。采用免疫组化法检测宫颈组织的N-cadherin蛋白表达。结果：N-cadherin阳性染色定位于细胞膜，呈连续的细胞膜染色。与对照组比，宫颈癌组织的N-cadherin阳性表达明显增高（P<0.05），分期越高，分化程度越低，淋巴结转移和淋巴血管间隙浸润，N-cadherin阳性表达越高（P<0.05），N-cadherin表达阳性越高，患者越焦虑，越抑郁和生存质量越低（P<0.05），N-cadherin表达阳性越高，患者生存时间越短（χ2=6.461， P=0.011）。结论：N-cadherin表达阳性与宫颈癌的发生、浸润及转移密切相关，可为宫颈癌的焦虑、忧虑、生存质量和生存时间提供参考。

【关键词】宫颈癌;N-cadherin;意义

【中图分类号】R737.3【文献标识码】B【文章编号】1672-3783（2020）10-30--01

宫颈癌（cervical carcinoma， CC）是妇科常见的恶性肿瘤，近年来的发病率略有增高，且呈现年轻化趋势。宫颈癌发病早期没有明显的临床症状，当被检出时已到晚期，错失了手术治疗的最佳时期，放疗是晚期宫颈癌的主要治疗手段，即使给予标准放疗，晚期宫颈癌5 年生存率不足35%，与肿瘤发生转移和扩散导致复发和死亡有关，可见宫颈癌仍然是威胁女性健康的巨大毒瘤。近年来越来越多人研究上皮细胞向间质细胞转变（epithelial to mesenchymal transition， EMT）与恶性肿瘤发生发展的关系。EMT 是上皮细胞获得迁移能力的重要方式，肺癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和胰腺癌等多种癌症的原发性浸润与继发性转移均有EMT参与其中。EMT 介导癌细胞浸润及转移的机制在于钙粘蛋白转换（cadherin switch），上皮型钙粘蛋白（E-cadherin）转化为神经型钙粘蛋白（N-cadherin），EMT 过程常伴有 N-cadherin 蛋白的表达上调，N-cadherin 蛋白水平的增加与多种肿瘤的恶性程度、浸润及转移相关，直接影响病人预后[3，4]。N-cadherin 蛋白在宫颈癌中的作用研究较少。本课题拟考察宫颈癌患者癌组织中N-cadherin蛋白表达，探讨与宫颈癌发生、发展和预后的关系，为宫颈癌的病理研究提供参考。

1 研究对象和方法

1.1 研究对象

经院伦理委员会同意，收集2009年12月至2014年3月在我院病理科提供的活检的子宫颈组织石蜡标本及对应的完整病历为研究对象，均经病理学诊断确诊为宫颈癌65例，均为宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN），其中Ⅰ～ⅡA 期50例，ⅡB～ⅢA期15例，低/未分化20例，高/中分化45例。选择同期子宫肌瘤行全子宫切除的正常宫颈组织45例为对照。宫颈癌组与对照组的年龄、体重指数等一般参数具有可比性。所有受试者均签署知情同意书。

1.2 纳入标准

未并发其他肿瘤;术前未行放化疗及内分泌治疗;无免疫及代谢性疾病。

N-cadherin蛋白在宫颈组织的表达 石蜡切片常规脱蜡，PBS冲洗，滴加3% H2O2阻断内源性过氧化物酶，置入枸橼酸缓冲液，微波抗原修复30min，滴加胎牛血清，在37℃下孵育1 h，滴加一抗（N-cadherin多克隆抗体）， 4℃过夜， PBS 冲洗，滴加生物素标记二抗，37℃孵育1 h，PBS 冲洗，滴加辣根酶工作液，37℃孵育 1 h，PBS 冲洗，DAB 染色，苏木素复染，脱水、透明，封片，镜下观察。阴性对照以PBS为一抗，流程同上。兔抗人N-cadherin多克隆抗体购自美国 Abcam公司，其余试剂购自上海长岛生物技术公司。

N-cadherin蛋白在宫颈组织表达的判断标准  高倍镜下（400倍）根据阳性细胞所占比例和染色强度进行半定量评分。染色强度分为4级：0分（无着色）、1分（浅黄色）、2分（棕黄色）和3分（棕褐色）。着色细胞比例评分：0分（≤5%）、1分（6%～25%）、2分（26%～50%）和3分（>50%）为。将每张切片上述两项评分加和为综合评分：阴性 （-）（0～1分） 、弱阳性（+）（2～3分） 、阳性 （++）（4～6分）和强阳性 （+++）（>6分）。

焦虑自评量表（SAS）  SAS量表包括20个项目，每个项目按照1～4分评价，每个小项目分数加和为初始分再乘以1.25为焦虑评分，分值越高则焦虑程度越高。

抑郁自评量表（SDS）  SDS量表包括20个项目，每个小项目按照1～4分进行评价，每项得分加和再乘以1.25为焦虑评分，分值越高则抑郁程度越高。

生存质量  采用EORTCQLC-C30量表评价患者生存质量。量表包括30个项目，包括躯体功能、角色功能、认知功能、情绪功能和社会功能及总体生存质量，分数越高则生存质量越高。

1.3 统计学处理

采用SPSS13.0统计软件包进行统计学分析，率比较采用χ2检验;生存时间比较Lan-rank 检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1N-cadherin在不同组别的表达情况比较

N-cadherin阳性染色定位于细胞膜，呈连续的细胞膜染色。与对照组比，宫颈癌组织的N-cadherin阳性表达明显增高（P<0.05），半数以上的宫颈癌组织的N-cadherin表达为阳性及强阳性，见表1和图1。

2.2N-cadherin表達与宫颈癌的病理特征的关系

分期越高，分化程度越低，淋巴结转移和淋巴血管间隙浸润，N-cadherin阳性表达越高（P<0.05），见表2。

3 讨论

浸润与转移是肿瘤细胞，尤其恶性肿瘤拥有的生物学特征，但需要肿瘤细胞需克服细胞间黏连。EMT描述了上皮细胞在形态学向成纤维细胞或间质细胞表型的转变并获得迁移的能力，在该过程中，上皮细胞间的粘附结构、极性及细胞骨架都发生不同程度地改变，上皮细胞的变形、迁移及运动功能增强，同时抗调亡的能力提升，在该过程中，N-cadherin作为主要的特征分子标记物可直接介导肿瘤细胞由上皮向间叶转化，加强肿瘤的侵袭作用，影响肿瘤细胞扩散，研究显示肿瘤细胞从良性到恶性转化的过程中 N-cadherin 表达逐渐增强，可加快肿瘤浸润及转移，对预后造成直接影响[3，4]。大量的恶性肿瘤研究，如肝细胞癌[4，5]、卵巢癌、口腔鳞状细胞癌、膀胱移行细胞癌、喉癌和肺癌均显示肿瘤组织中N-cadherin 表达增高，细胞的恶性进程加快，侵袭转移能力增强，预后不良。本课题结果也显示N-cadherin阳性越高，宫颈癌的分期越高，分化程度越低，存在淋巴结转移和淋巴血管间隙浸润，生存时间越短，伴随更高的焦虑和抑郁，更低的生存质量，N-cadherin表达阳性与宫颈癌的发生、浸润及转移密切相关，具有统计学意义，该结果与文献报道类似[11，12]。但本课题纳入的宫颈癌均为宫颈上皮内瘤变，宫颈癌分类还包括鳞状细胞癌 和腺癌等，因此进一步的研究有必要增加这两种病理类型进行讨论。

综上所述，N-cadherin在宫颈组织的表达可为宫颈癌的焦虑、忧郁、生存质量和生存时间提供参考。

参考文献

Cheng H， Wang W， Zhang Y， et al.Expression levels and clinical significance of hepsin and HMGB1 proteins in cervical carcinoma[J].Oncol Lett，2017，14（1）：159-164.

Shu R， He J， Wu C， et al.The association between RARβ and FHIT promoter methylation and the carcinogenesis of patients with cervical carcinoma： A meta-analysis[J].Tumour Biol，2017，39（6）：1010428317709126.

Zidar N， Bo?tjan?i? E， Malgaj M，et al.The role of epithelial-mesenchymal transition in squamous cell carcinoma of the oral cavity[J].Virchows Arch. 2017 Jul 12. [Epub ahead of print].

Wu X， Wang H， Lian Y，et al.GTSE1 promotes cell migration and invasion by regulating EMT in hepatocellular carcinoma and is associated with poor prognosis[J].Sci Rep，2017，7（1）：5129.

Yen CH， Lai CC， Liao CC，et al.Characterization of a new murine cell line of sarcomatoid hepatocellular carcinoma and its application for biomarker/therapy development[J].Sci Rep，2017 ，7（1）：3052.