迈瑞全自动化学发光免疫分析仪检测梅毒螺旋体抗体结果分析

宋 燕 刘金玲 王 兵

根据全国法定传染病疫情概况显示，2018年梅毒发病人数在甲、乙类传染病中排名位居第3位，是发病人数最高的性传播疾病[1]。鉴于梅毒可通过血液传播，因此有创检查及手术等操作前，有必要进行梅毒感染情况筛查[2]。

实验室常用的梅毒筛查手段主要针对梅毒螺旋体(treponema pallidum，TP)感染机体后产生的两种抗体进行检测，即梅毒特异性抗体和梅毒非特异性抗体。其中梅毒特异性抗体一旦产生，可持续甚至终身阳性，常用于梅毒感染状态的筛查。针对特异性抗体常用的检查方法包括化学发光法(CMIA)，酶联免疫吸附试验(ELISA)，梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)等，其中化学发光法因敏感度高、检测速度快等优点使得其更易在临床实验室推广应用[3～6]。

目前各医院检验科CMIA法检测TP抗体多使用进口仪器，国产仪器检测TP抗体的相关文献报道较少。航天中心医院检验科2019年6月份开始使用迈瑞全自动化学发光免疫分析仪CL6000-i检测TP，现将2019年6月～2020年1月份的相关数据进行整理分析。

对象和方法

1.研究对象：选取2019年6月～2020年1月在航天中心医院进行TP抗体检测的样本23298例，其中男性10305例，女性12993例。23298例研究对象包括体检人群2201例，皮肤性病患者145例，门诊患者9880例，内科住院患者7983例，外科住院患者2856例，围产孕妇233例。

2.试剂和仪器：采用迈瑞全自动化学发光免疫分析仪CL6000-i及相配套TP抗体检测试剂、校准品和质控品，阳性判断标准为抗TP抗体的S/CO(吸光度值/临界值)≥1。梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验法(TPPA)试剂盒赛乐迪亚，由日本富士瑞必欧株式会社提供。血清盘采用梅毒螺旋体抗体化学发光试剂国家参考品(批号370036-201801)。所有操作均参照试剂盒和仪器说明书进行。

3.检测方法和流程：选取迈瑞CL6000-i TP抗体相应两个水平质控品，其中低值为阴性质控品，高值为弱阳性质控品。低值质控品和弱阳性质控品各连续测定20遍，计算批内CV。两个质控品每日上、下午各1次，每次重复2遍，共4次，连续检测5天，计算批间CV。质控品和血清盘标本按照血清样本同样测定。23298例样本首先在迈瑞CL6000-i平台检测，筛查阳性样本会进一步做TPPA确证。

4.统计学方法：采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行统计分析，计数资料以率(%)表示，不同组之间率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

低值质控品和弱阳性质控品各连续测定20遍，计算得批内CV。两个质控品每日上、下午各1次，每次重复2遍，共检测4次，连续检测5天，计算批间CV。经计算得出低值质控品总均值0.21，批内CV 1.31%，批间CV 1.47%，弱阳性质控品总均值2.47，批内CV 0.61%，批间CV 1.28%。血清盘中阴性企业参考品检出率19/20，阳性企业参考品检出率9/10，最低检出限的4个参考品L1和L2均检出阳性(要求L1和L2检出阳性)，L3和L4均检出阴性(L3要求检出阴性或阳性，L4要求检出阴性)，试剂性能均满足国家血清盘要求。

23298例样本在迈瑞CL6000-i进行TP抗体筛查，筛查阳性286例，阳性率1.22%(286/23298)。初筛阳性的286例样本进行TPPA确证，结果显示TPPA阳性176例，TPPA阴性110例，真阳性率61.53%(176/286)，迈瑞CL6000-i筛查TP抗体假阳性率0.47%(110/23298)。χ2检验结果显示，差异有统计学意义(P=0.00,表1)。

表1 迈瑞CL6000-i CMIA法和TPPA确证法的结果比较

初筛阳性的286例样本根据S/CO值划分为1～3、3～5、5～7、7～10及>10 共5段，梅毒特异性抗体的真阳性率随着S/CO值的增加而逐渐增高，当S/CO>10时，真阳性率可达100%，不同值段的真阳性率详见表2。

表2 286例阳性样本在不同S/CO值段的TPPA结果分布

286例初筛阳性患者根据科室分为6组，即体检人群、门诊患者、内科住院患者、外科住院患者、围产患者和皮肤性病科患者。不同科室患者的初筛阳性数及TPPA确证情况详见表3，不同科室之间梅毒筛查的真阳性率比较，差异有统计学意义(P=0.00)。

表3 286例初筛阳性样本在不同科室的真阳性率

286例初筛阳性患者根据年龄分为3组，即<30岁，30～60岁和>60岁。不同年龄组之间患者的初筛阳性数及TPPA确证情况详见表4，不同年龄段患者之间梅毒筛查的真阳性率比较，差异有统计学意义(P=0.00)。

表4 286例初筛阳性样本在不同年龄组的真阳性率

讨 论

2018年中国梅毒发病人数达到494867例，在甲、乙类传染病排名中位居第3位，其中排名首位的是病毒性肝炎，第2位是肺结核，在世界范围内每年梅毒的发病人数约为1200万人[1，7]。梅毒感染机体后可产生两种抗体，一种是梅毒特异性抗体，另一种为梅毒非特异性抗体，综合两种抗体检查结果可判断患者是否是现症感染。

梅毒螺旋体感染机体后，螺旋体本身会产生一些类脂质物质，另外被感染的机体组织细胞也会释放类脂质物质，机体针对这些类脂质物质产生的抗体即梅毒非特异性抗体，机体处于感染状态时才会产生非特异性抗体，因此这一指标常用于判断梅毒是否是现症感染，还可用于治疗效果观察和复发监测。目前实验室常用的检测非特异性抗体的方法包括RPR、TRUST和VDRL等，但是这类方法是手工操作，肉眼判读，不适合于大批量人群的筛查。梅毒特异性抗体是机体针对TP本身的特异性抗原所产生的，可持续甚至终生存在，常用于患者感染状态筛查。针对特异性抗体的检查方法包括CMIA、ELISA、TPPA、TPHA和胶体金等，其中CMIA检测敏感度高，速度快，更适合于大批量人群的筛查，但该方法存在一定的假阳性率，假阳性结果可能引起潜在的医疗纠纷[8～11]。TPPA操作繁琐，但因特异性相对较好，甚至可达99.9%，常用做梅毒螺旋体抗体的确证实验[12～14]。CMIA和TPPA两种方法结合，可在一定程度上保证梅毒螺旋体抗体检测结果的准确性，这也是很多文献推荐的检测方法[15～17]。

目前实验室CMIA法检测TP抗体使用较多的是进口仪器，关于国产仪器检测TP抗体的文献报道较少。本实验室2019年6月开始采用迈瑞全自动化学发光免疫分析仪CL6000-i检测TP抗体，为避免假阳性结果引起潜在的医疗风险，所有筛查阳性样本会进一步加做TPPA确证。为了初步评价该系统检测性能，选择配套低值质控品和弱阳性质控品各连续测定20遍，计算批内CV。两个质控品每日上、下午各1次，每次重复2遍，共检测4次，连续检测5天，计算批间CV。经计算得出低值质控品批内CV 1.31%，批间CV 1.47%，弱阳性质控品批内CV 0.61%，批间CV 1.28%。血清盘中阴性企业参考品检出率19/20，阳性企业参考品检出率9/10，最低检出限的4个参考品L1和L2均检出阳性(要求L1和L2检出阳性)，L3和L4均检出阴性(L3要求检出阴性或阳性，L4要求检出阴性)，试剂性能均满足国家血清盘要求。

2019年6月～2020年1月，本实验室共检测TP抗体23298例，初筛阳性286例，阴性23012例。286例初筛阳性样本中176例TPPA阳性，110例TPPA阴性，迈瑞CL6000-i检测TP抗体的真阳性率为61.53%，假阳性率0.47%。实验数据还提示，筛查阳性样本随着S/CO值增加，真阳性率也增高，当S/CO>10时，真阳性率达到100%。笔者将286例初筛阳性患者按照科室和年龄进行了分组，结果显示，与其他科室患者比较，体检人群和产科患者真阳性率较低，与其他年龄段患者比较，>60岁患者组真阳性率较低，即体检人群、产科患者及>60岁患者梅毒筛查假阳性较多，这部分患者报告在审核时需要格外注意。分析造成这部分人群假阳性较多的原因可能如下：不同的生理病理状态下如妊娠期、老年期或者疾病时，体内产生某些物质，会和试剂发生非特异反应，出现假阳性结果；试剂不够成熟，可以和TP抗体以外的成分发生反应，其特异性有待于进一步完善[18～20]。

综上所述，迈瑞CL6000-i检测TP抗体重复性较好，检测结果中随着检测标本的S/CO值增加，检测真阳性率增加。建议工作中，对于标本检测S/CO在1～10的样本，因为存在一定的假阳性情况，为了保证检测结果的准确性，此类标本报告前需要加做TPPA，而S/CO>10的样本不存在假阳性情况，这类样本不需做TPPA，可直接报告阳性。对于体检人群、妊娠患者及>60岁患者，因为梅毒螺旋体抗体筛查真阳性率较低，这部分患者的报告在审核时需要格外注意。