一起国外引进安格斯牛巴贝斯虫病的诊断及治疗

匡继才，濮永华*，肖啸，龚兴建，周开艳，段宁，杨新周，杨家恒，张继平

(1.保山市动物疫病预防控制中心，云南 保山 678000； 2.云南农业大学动物医学院，云南 昆明 650201；3.龙陵县动物疫病预防控制中心，云南 龙陵 678300；4.龙陵县勐糯镇畜牧兽医工作站，云南 龙陵 678307)

安格斯牛原产于英国苏格兰东北部，目前分布于世界各地，对环境的适应性强，生长发育快，早熟，易肥，胴体品质好，净肉率高，大理石花纹明显，是生产雪花牛肉的主要肉牛品种，1974年后我国开始陆续从英国和澳大利亚引进安格斯牛[1]。牛巴贝斯虫病是由巴贝斯科巴贝斯属的原虫寄生于牛红细胞内引起的疾病，旧名称为“焦虫病”，又称“蜱热”，临床特征为高热、贫血、黄疸、血红蛋白尿[2]。巴贝斯虫是一种血液寄生虫，蜱为主要的传播媒介，对红细胞感染率为5%～10%，严重的可达30%～40%，临床以出血、高热、呼吸困难、心衰、牛胃有硬物等为主要特征，剖检见脾脏、肾脏、淋巴结等肿大。巴贝斯虫对各种家畜和人危害严重，多年来，为了控制巴贝斯虫病，世界各国均开展了大量的研究工作。近年来，保山市龙陵县制定激励政策大力发展肉牛产业，而本地能繁母牛来源不足，需大量跨省跨国购进母牛，所以对巴贝斯虫病的有效防治尤显重要。

1 发病情况

2019年9月2日，龙陵县勐糯镇某牛场从澳大利亚引进的一群安格斯牛部分出现精神沉郁，其中10头出现体温升高、食欲减退或废绝、排淡红或黑红色尿液、站立不稳的症状。该镇兽医站技术人员按胃肠道疾病、农药残留中毒治疗9头，未见疗效，1周内死亡4头，在市级专家开展诊断期间又相继死亡3头。观察全群，挑出病牛，400头安格斯牛先后发病13头，死亡7头，发病率3.25%，病死率53.85%。

2 临床症状

患病牛出现体温升高，食欲减退，反刍减少或不反刍，有的牛还会出现便秘或腹泻，甚至是交替出现，呼吸加快，站立不稳，黏膜苍白，口鼻流液，排尿频繁，尿色呈淡红色或黑红色，死亡后口鼻流出泡沫状液体，尸体腹部鼓气、四肢僵直等。发病牛多在一周内死亡。

3 病理剖检

剖检病死牛2头，可见皮下组织和肌间脂肪黄染；鼻腔内有瘀血和出血点；淋巴结肿大，切面有暗红色病灶；心包积液，心脏瘀血，表面和心内膜出血；肝脏呈棕黄色，有灰白色结节和暗红色病灶；脾脏肿大、质脆，脾髓色暗，脾细胞突起；肺脏肿大，有肉样病变，纤维素性炎症，与胸膜粘连；胆囊肿大，充满浓稠胆汁；肾脏肿大，淡红黄色；瘤胃积食，瓣胃阻塞、内容物干硬，皱胃大面积出血，内容物为血水样；膀胱膨大，内有血水样内容物；鼻腔内有瘀血和出血点。

4 实验室检测

4.1 主要仪器

超净工作台、光学显微镜、PCR仪、电泳仪等。

4.2 主要试剂

姬姆萨染色试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司，核酸提取试剂盒及PCR相关试剂购自北京索莱宝科技有限公司，核酸染色剂购自大连宝生物有限公司，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司提供，引物见表1。

表1 引物

4.3 姬姆萨染色镜检

取血样滴至清洁载玻片右1/3处， 用另一块载玻片以45°角接触血滴，由右向左将血滴推成均匀的火焰状薄层，自然晾干，放入染缸染色2min，取出用水轻轻洗去多余染液。400×目镜镜检，结果显示红细胞内有巴贝斯虫虫体。

4.4 PCR病原学检测

参照核酸提取试剂盒说明提取DNA。反应体系为Premix TaqTM25μL、RNase Free dH2O 22 μL、上游引物1μL、下游引物1μL、模板1μL。反应条件：MS1/ MS2为第一套引物，PCR反应程序为 95℃ 5min；95℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 60s,30个循环；72℃ 10min，4℃保存。 MS3/ MS4为第二套引物，PCR反应程序为95℃ 5min；95℃ 30s、55℃ 30s，72℃ 60s,30个循环；72℃ 10min,4℃保存。

电泳：取10μL PCR扩增产物于1.5%的琼脂糖凝胶电泳。阳性PCR扩增产物进行测序,将测序结果在BLAST进行比对。检测结果为阳性，354bp处出现目的条带。如图1所示。

1～9.牛全血样品；-.阴性对照；M.DL 2000 DNA Marker。

5 治疗结果

使用贝尼尔(血虫净)注射杀虫，病牛按每千克体重3.5～4mg计算，用生理盐水配成5%～7%的溶液，在50℃水中水浴10min以上，深部肌肉注射，间隔48h后再注射1次。对重症病牛进行抗贫血治疗，静脉注射葡萄糖生理盐水、维生素C、维生素B12和补血的药物；肌肉注射科特壮增强免疫力和促进新陈代谢；心脏衰弱的注射强心剂；食欲不振的病牛投服消食健胃剂；并发呼吸道疾病的进行抗菌消炎。

经过杀虫和对症治疗后，患病牛全部治愈。且该牛场后期无该病发生。

6 小结与讨论

6.1 病因分析

(1)牛感染巴贝斯虫病主要因蜱虫叮咬，也与牛自身的营养供应、自然环境和社会条件等因素有关。

(2)保山市龙陵县勐糯镇为干热河谷地区，气候炎热，6—8月气温高达35℃，牛蜱等吸血昆虫较多，历史上曾发生过牛“焦虫病”，诊断过程中在发病牛群体表找到大量牛蜱，多则20～30个，少则5～6个。本次国外引进肉牛，刚好在夏秋换季，草料由青贮料改为全株青玉米，正值发情配种期(病死牛均为孕畜)。被牛蜱叮咬感染后，受换季、换草料、配种等外部条件变化影响诱发本病。

(3)当地兽医人员按胃肠疾病、农药残留中毒进行治疗，未见疗效，甚至加速死亡。经现场调查，该牛场存栏牛650头，其中安格斯牛400头、西门塔尔212头、云岭牛24头、本地黄牛14头。近两个月来，全部牛均饲喂当地产全株青玉米，当天收割切碎当天饲喂。因当地夏季发生过草地贪夜蛾虫害，牛发病后怀疑全株青玉米农药残留引起中毒，随即改喂外地产玉米秸秆青贮料和皇竹草。饲喂同样的草料，其他品种牛均未发病，仅安格斯牛群发病，由此排除胃肠疾病、农药残留中毒。该群安格斯牛8个月前从澳大利亚引进，正在适应期，抵抗力差，受牛蜱叮咬感染及气候环境等条件变化的影响，发生巴贝斯虫病的可能性较大。

(4)牛场的饲草主要以当地的甘蔗梢、皇竹草、稻草、玉米秸秆等为主，没有按照牛的营养需要“精、青、粗”合理搭配，从未补充蛋白质饲料和微量元素，这是导致牛营养不良、体况变差的原因之一，故剖检发现病死牛胃内有土团和毛团。

(5)目前，各地都在大力发展养牛业，牛源偏紧，有的地方为了在短期内购到大量的繁殖母牛，长途跨省区、跨境引进母牛，由于气候环境、饲养条件变化大，诱发疾病或输入疫病，给养殖场(户)造成损失，危害当地养牛业。本次发病的安格斯牛，从遥远的澳洲漂洋过海到达龙陵县勐糯镇，饲养条件从广阔草场放牧到全舍饲，气候条件从南半球到北半球，旅途颠簸，季节交替，出现应激。

6.2 防治措施

防治本病的关键在于消灭牛体表及周围环境中的蜱[3]，也有报道称感染病畜血液中会长期带虫，对周围环境的牛会造成感染[4]，因此，在防治牛巴贝斯虫感染时，要加强周期性的环境消毒和灭虫工作。治疗本病的药物主要为血虫净(贝尼尔、三氮脒)、伊维菌素、咪唑苯脲[3]，注射血虫净时肌注一定量的盐酸消旋山莨菪碱注射液可以消除副作用，再结合对症治疗和支持疗法[5]。环境杀虫使用0.5%敌百虫[6]、0.05%双甲脒液、0.1%～0.5%杀虫脒溶液喷洒[3-7]。

通过典型的临床症状和病理剖检初诊，再结合实验室检测技术确诊本次牛因感染寄生虫发病。采取针对性的治疗方案和预防措施，近半年该牛场再未发生过此类感染，全场牛群健康状况得到了显著改善。说明及时准确的诊断、治疗和预防措施有效。

6.3 管理措施

聘请专业技术人员和管理人员驻场，加大对基层兽医人员特别是驻场兽医和村级兽医的培训力度，提高养殖诊疗水平和防疫意识。建议规模场应严格按照养殖技术要求，在运输、进场饲养等过程中规范性管理。在引进繁殖母牛时，注意气候、环境和饲喂条件的变化，进场前进行隔离，确保引进母牛健康。

致谢：本文实验室检测和文稿撰写得到云南农业大学动物医学院代飞燕老师、张安洁硕士指导帮助，特此致谢！