细胞块切片免疫组化染色对恶性胸腔积液分型诊断符合率的影响

河南省荣军医院（453000）许波

胸腔积液中多存在恶性肿瘤细胞，40%左右大量胸腔积液由恶性肿瘤引起，常见有肺癌、淋巴瘤、乳腺癌等，恶性胸腔积液主要表现为贫血、干咳、胸痛、体重下降[1]。细胞病理学在胸腔积液诊断中具有重要作用，良、恶性胸腔积液诊断多采用细胞涂片检查，诊断恶性胸腔积液敏感度达50%～78%[2]。浆膜腔间皮性肿瘤与转移性癌间细胞形态相似，细胞涂片诊断难度大。而区分间皮性肿瘤与转移性癌具有重要意义，关系治疗方案的确定。本研究以我院胸腔积液患者为研究对象，行细胞涂片、细胞块切片、免疫组化染色检测，观察对恶性胸腔积液分型诊断符合率的影响，报告如下。

1 资料及方法

1.1 一般资料 选取2017年3月～2019年5月我院86例胸腔积液患者，男45例，女41例；年龄21～77岁，平均（49.12±12.57）岁。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2 入选标准 ①纳入标准：根据临床表现、影像学检查诊断倾向恶性；标本为胸腔积液；患者签署知情同意书。②排除标准：其他部位恶性肿瘤。

1.3 方法

1.3.1 标本制备 抽取胸腔积液10ml，分装在3～5个管，离心（3000r/min）10min取部分沉渣，制备苏木精-伊红（HE）涂片。将剩余沉渣用试镜纸包裹，用10%福尔马林固定液固定，经常规处理，制备成细胞蜡块，连续细胞切片，厚3～4μm。对细胞涂片、细胞块切片进行HE染色、免疫组化染色。

1.3.2 HE染色结果 由2位经验丰富的病理医生观察细胞形态学。根据细胞形态、黏附性、核不典型性分为恶性、良性、无法肯定，良性：存在反应性增生间皮细胞，细胞形态温和、弥散良好、存在典型性；恶性：恶性间皮瘤细胞、转移性腺癌，细胞成团，细胞形态严重不温和，核存在重度不典型性；无法肯定：细胞弥散，核存在中度或重度不典型性，或细胞成团，核存在中度或轻度不典型性。

1.3.3 免疫组化染色结果 采用免疫组织化学（SP）法，二氨基联苯胺显色试剂购自上海雅吉生物科技有限公司，Maxvision试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。抗体为CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1、WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin。染色过程严格按照说明书操作。用磷酸缓冲盐溶液（PBS）代替一抗设置空白对照，染色切片中选择阳性组织染色设立阳性对照。支持间皮细胞的免疫组化指标：WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin；支持肺腺癌免疫组化指标：CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1。判定标准：阳性：BerEP4、CK7、MOC-31、CEA、Desmin、CK5/6染色呈棕黄色细胞质，WT-1、TTF-1染色细胞核呈棕黄色，Calretinin染色细胞质、细胞核均显色，CD15细胞质、细胞膜染色。

1.4 观察指标 ①对比细胞涂片、细胞块切片的HE染色、免疫组化染色结果。②恶性胸腔积液分型诊断符合率。

1.5 统计学分析 用SPSS22.0分析数据，计数资料用n（%）表示，χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 细胞涂片、细胞块切片的HE染色、免疫组化染色结果 细胞涂片、细胞块切片的HE染色结果对比，差异无统计学意义（P＞0.05），细胞块切片免疫组化染色诊断胸腔积液恶性率52.33%高于细胞涂片免疫组化染色的37.21%（P＜0.05），见附表1、2。

2.2 恶性胸腔积液分型诊断符合率 确诊的45例恶性胸腔积液患者中，细胞块切片免疫组化确诊恶性44例，误诊1例，诊断符合率为97.78%（44/45），其中肺腺癌36例、肺鳞癌4例、恶性间皮瘤3例，均经肺、胸膜穿刺活检组织学证实，淋巴瘤1例经活检确诊为弥漫大B细胞淋巴瘤，误诊1例，经病理组织学检查确诊为足跟部恶性黑色素瘤伴胸腔转移。肺腺癌细胞对CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1抗体阳性表达率高，恶性间皮瘤细胞对WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin抗体阳性表达率高；细胞块切片免疫组化染色检测恶性胸腔积液分型诊断符合率高于细胞涂片检测，见附表3。

3 讨论

正常人胸膜腔内存在5～15ml液体，起润滑作用。当胸部损伤、胸膜通透性增加、壁层胸膜淋巴回流障碍时，可引起胸腔积液。渗出性胸腔积液多与胸膜恶性肿瘤、淋巴细胞异常等有关[3]。因此，需鉴别胸腔积液的良恶性。

附表1 HE染色结果[n(%)，n=86]

附表2 免疫组化染色结果[n(%)，n=86]

附表3 恶性胸腔积液分型诊断符合率

胸腔积液细胞学检查标本采集方便，制片快速，是病理诊断的常用方法。细胞涂片HE染色观察对积液细胞性质判断具有重要价值，但胸腔积液中细胞成分复杂，各种细胞形态类似，仅凭细胞涂片可能无法做出准确诊断，特别是恶性间皮瘤与转移性肺腺癌细胞形态非常相似[4][5]。部分病理医生仅通过观察细胞涂片HE染色，鉴别难度大，易出现误诊。而恶性间皮瘤与肺腺癌鉴别对指导临床治疗具有重要作用。此外，除肺腺癌外，肺鳞癌、淋巴瘤、其他腺癌、恶性黑色素瘤等也可引起胸腔积液，鉴别难度加大，需特殊染色才可能确定转移性肿瘤来源[6]。

黄其文等[7]研究发现，细胞块切片是诊断恶性胸腔积液的有效方法，联合免疫组化染色可为鉴别诊断肺腺癌提供依据。本研究对86例胸腔积液患者进行细胞涂片与细胞块切片检查，均行HE染色、SP染色，结果显示，细胞涂片、细胞块切片的HE染色结果对比，差异无统计学意义（P＞0.05），细胞块切片免疫组化染色诊断胸腔积液恶性率52.33%高于细胞涂片免疫组化染色的37.21%（P＜0.05），说明细胞块切片免疫组化染色诊断恶性胸腔积液准确率高。本研究中细胞块分布均匀，细胞形态结构良好，而细胞涂片分布不均匀，可能出现重叠，导致细胞形态模糊，结构不清晰。细胞涂片免疫组化染色有助于胸腔积液良恶性鉴别，但涂片细胞数量不等、厚薄不均，易出现高背景着色，造成误诊，且阳性表达细胞缺乏对应性，影响判读。细胞涂片免疫组化染色结果中15例无法确定良恶性。而细胞块切片免疫组化染色细胞分布均匀，可准确判读，且包埋细胞块能永久性保留标本，以待日后回顾研究。

本研究还显示，细胞块切片免疫组化染色检测恶性胸腔积液分型诊断符合率高于细胞涂片检测，肺腺癌细胞对CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1抗体阳性表达率高，恶性间皮瘤细胞对WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin抗体阳性表达率高，可见，细胞块免疫组化染色有助于判定浆膜腔积液细胞类型及性质，是理想的细胞病理检测方法，可能与本研究综合多种抗体染色结果分析，消除各抗体表达差异，避免交叉反应，从而提高敏感性有关。且细胞块制作简单，易保存，免疫组化SP检测简单方便，可在基层医院广泛开展应用。

综上所述，细胞块免疫组化染色诊断恶性胸腔积液准确率高，有助于判定浆膜腔积液细胞类型及性质，是理想的细胞病理检测方法。