影响氨基酸分析仪分析系统的研究

马晓蕾 徐丽丽

摘 要：随着市场经济的发展，对氨基酸分析仪进行检定具有重要意义。氨基酸分析仪分析系是决定检定结果的关键因素，本文就分离柱、缓冲溶液、茚三酮溶液等影响氨基酸分析仪分析系统的决定性因素进行了研究。

關键词：氨基酸分析仪;分析系统

氨基酸是食品中重要的营养物质，随着人民生活水平的提高，人们越来越关注食品的营养。氨基酸作为添加剂、调味剂、饲料添加剂、医药等在食品工业、农业、畜牧业及人类健康、医疗保健等诸多方面有着广泛的应用。对氨基酸的分析，因其方法特点、分析过程复杂，不同实验室出具的数据可比性差，分析结果的有效性问题日显突出，由于氨基酸分析仪在科研及日常测试中大量使用，为保证测量结果准确可靠，对仪器进行计量检定势在必行。为此，中国计量科学研究院建立了《JJG 1064-2011氨基酸分析仪检定规程》，开展了氨基酸分析仪的计量检定。

氨基酸分析仪的主要检定项目包括泵流量设定误差，流量稳定性，基线噪声的检定和分析系统的检定，即对氨基酸分析仪检测限、分离度、定性、定量重复性和仪器线性误差的评价。

1氨基酸分析仪工作原理

所有的氨基酸在低PH值的条件下都带有正电荷，均可被吸附在阳离子树脂上，但吸附的程度不同（碱性氨基酸结合力最强、其次为芳香族氨基酸、中性氨基酸、酸性氨基酸结合力最弱）。在进行分析时，按照氨基酸分析仪设定的洗脱程序，用不同离子强度、PH值的缓冲液依次将氨基酸按不同的吸附力洗脱下来（先酸性氨基酸再中性氨基酸最后碱性氨基酸），然后与茚三酮反应液在加热的条件下反应，生成可在570nm、440nm检测到的蓝紫色物质（仲氨生成浅黄色物质440nm检测），外标法定量。

2影响氨基酸分析系统的主要因素

对氨基酸分析仪检定时，在仪器规定的标准分析条件下，注入氨基酸标准混合溶液，记录谱图，测量苏氨酸和丝氨酸 、甘氨酸和丙氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的平均峰高及两峰交点到基线的距离，计算分离度。由组氨酸的浓度、进样量、峰高和仪器噪声计算检出限。对分析系统性能的影响，直接关系到检定的结果。检定时准确评价各种影响因子，成为氨基酸分析仪检定工作的关键。影响分析系统检定结果的主要因素有：

2.1色谱柱的填充效果：（分离柱-影响分离度）

氨基酸分析仪的中心部件是离子交换柱（氨基酸分析仪交换柱为磺酸型阳离子交换树脂分离柱）。离子交换柱、树脂的再生处理、离子交换柱的装填是影响分离度的关键因素。所以仪器分离柱除首次使用外，使用一段时间后需要实验人员自己退出树脂再生处理，恢复其分离能力。

2.2缓冲溶液的配制和操作程序的设置：（缓冲溶液-影响分离度和基线;操作程序的设置-影响分离度）

缓冲溶液除首次使用仪器时所携带的缓冲溶液，一般情况下需要实验人员配制，也是影响分离的重要因素。配制茚三酮溶液的试剂（如氯化钠、氢氧化钠、柠檬酸）决定着茚三酮溶液的Ph值，对分离起决定性作用，茚三酮与氨基酸显色的最佳pH值为5。分离酸性和中性氨基酸的洗脱液pH值较低，为了把它们的pH值调节到5，必须采用pH值高于5的缓冲溶液与洗脱液相平衡。通常氨基酸分析仪采用pH值5.5的缓冲溶液（或者5.2）。而配制茚三酮溶液所加入的液体试剂（如苯甲醇、硫二甘醇）对分离起辅助作用。

操作程序是对缓冲溶液转换时间的设置，主要影响分离度。时间较长或较短都达不到分离的效果。

2.3茚三酮溶液的试剂与配制：（茚三酮溶液-影响基线噪声和面积重复性）

茚三酮溶液在购买氨基酸分析仪时都会随机配送，当首次携带的茚三酮溶液用完时，一般情况下需要实验人员自行配制，由于人员自身操作能力的差异，所配制的溶液也不尽相同。所以茚三酮溶液是影响面积重复性的重要因素。

3定期对仪器进行维护和计量检定，保证分析数据的准确可靠

为保证仪器的正常使用和计量检定顺利通过，应加强仪器操作人员的责任心，严格按照仪器操作规程进行，决不简化操作步骤;做好仪器的日常维护保养工作和技术资料管理;定期对仪器进行检验校准和计量检定，对影响氨基酸分析分析系统精确度、灵敏度、分辨率等技术指标的因素进行科学评价，以保证使用仪器的完好性与准确性。

参考文献：

[1]《氨基酸分析仪》检定规程介绍马康，中国计量， 2012年第1期 119-120，

[2] 曹让《氨基酸分析仪管理使用之经验点滴 》 ，现代仪器2007年第3期 57-58，

[3]宋治军，纪重光等《现代分析仪器与测试方法》，西北大学出版社 ，1994