高效液相色谱法同时测定化妆品中七种禁用染料

张碧宇 周建峰

摘 要：建立高效液相色谱法同时测定化妆品中七种禁用染料（苏丹红Ⅰ～Ⅳ、对位红、颜料橙5、苏丹蓝Ⅱ）。实验系统地优化了影响萃取效率的因素（包括萃取溶剂的种类、萃取方法）和色谱条件（流动相的种类、比例）。实验结果表明：以乙腈为萃取溶剂，超声20min，过中性氧化铝小柱后氮吹定容，采用Agilent C18柱，乙腈--水作為流动相，检测波长为478nm，流速为1.0mL/min，能够实现对7种目标物的理想分离检测。该方法具有良好的线性（R2=0.999），检出限为0.5mg/kg，回收率为83.4%-107.2%，可用于化妆品中7中禁用染料的测定。

关键词：高效液相色谱;禁用染料;化妆品

目前，国内测定化妆品中着色剂的方法主要有高效液相色谱法[1]及高效液相--质谱联用法[2]、气相色谱法及气相色谱-质谱联用[3]、薄层色谱法、毛细管电泳、荧光光度法[4]等。但未有苏丹红Ⅰ～Ⅳ、苏丹蓝Ⅱ、颜料橙5、对位红7种禁用染料同时检测的方法和标准。本文采用超声萃取目标物，高效液相色谱法同时测定化妆品中7中禁用染料的含量，紫外吸收光谱定性，外标法定量。方法简单、快速、准确，能有效测定化妆品中7中禁用染料的含量。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂材料

1.1.1 仪器

Waters公司Alliance 2695/2996液相色谱仪（配PDA检测器），超声波发生器、水浴加热氮吹仪、高速冷冻离心机、涡旋混合仪、天平。

1.1.2 试剂和材料

标准样品（苏丹红Ⅰ，苏丹红Ⅱ，苏丹红Ⅲ，苏丹红Ⅳ，对位红，颜料橙5，苏丹蓝Ⅱ），乙腈（色谱纯，分析纯）、丙酮（分析纯）、四氢呋喃（分析纯），中性氧化铝柱（使用前用5mL乙腈活化）。

1.2 样品前处理

称取1.0g（精确至0.001g）样品至50mL离心管中，眼影、腮红样品中加入10mL乙腈溶解，口红样品中加入10mL丙酮溶解，混匀，超声20min。5000r/min离心3min，重复提取一次，合并上清液过中性氧化铝小柱（使用前用5mL乙腈活化），收集滤液，在50℃水浴下氮吹至1mL，定容，过0.45μm有机滤膜，待测。

1.3 标准样品的配制

标准储备溶液：分别准确称取7种禁用染料的标准品，颜料橙5用四氢呋喃、二甲基亚砜、乙腈的混合溶液（体积比为5：1：4）溶解，其他标准品用乙腈溶解，分别配置成100μg/mL的储备液，4℃避光保存。

标准混合溶液：分别适量移取上述储备液至10mL容量瓶中，用乙腈定容，配制成浓度分别为0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL的标准曲线。

1.4 仪器条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18，5μm，4.6×250mm;流动相：乙腈+水=90+10;流速：1.0mL/min;进样量：20μL。

2 结果与讨论

2.1 样品中目标物提取方法的优化

2.1.1 萃取溶剂的选择

分别采用甲醇、乙腈、丙酮作为萃取溶剂做加标萃取实验。结果表明，眼影、腮红在乙腈中溶解度较好，口红在乙腈中不易溶解，在丙酮中有较好溶解度。因此，眼影、腮红以乙腈为萃取溶剂，口红以丙酮为萃取溶剂。

2.1.2 萃取方法的选择

分别选取超声和漩涡萃取两种方法进行加标萃取试验，实验结果表明，超声更容易溶解样品，因此选用超声作为萃取方法。

2.2 色谱条件的优化

2.2.1 流动相的选择

分别选用乙腈+水，乙腈+0.02mol/L乙酸铵溶液，甲醇+水，甲醇+0.02mol/L乙酸铵溶液作为流动相，乙腈+水和乙腈+0.02mol/L乙酸铵溶液具有较好的分离效果，出于简化实验步骤的考虑，选用乙腈+水作为流动相。

2.2.2 流动相比例的选择

分别设置多个不同梯度和等度乙腈和水的流动相比例，结果显示乙腈和水比例为90：10的时候分离效果最好。如图1所示。因此，选用乙腈和水比例为90：10作为流动相比例。

2.3 方法的线性范围、重现性和检出限

在最佳色谱条件下，配置7种禁用染料浓度为0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL的标准曲线进行色谱分析。线性范围为0.2～10.0μg/mL，线性方程及检出限（S/N>3）如表1所示。表1中Y为峰面积，X为质量浓度（mg/L）。

2.4 方法的回收率

分别取相同加标浓度的眼影、腮红、口红，按照上述提取步骤，以最佳色谱条件进样分析，测定加标回收率。结果如表2。

3 结论

建立了超声萃取彩妆中苏丹红Ⅰ，苏丹红Ⅱ，苏丹红Ⅲ，苏丹红Ⅳ，对位红，颜料橙5，苏丹蓝Ⅱ七种禁用染料，高效液相色谱法同时测定其含量的检测方法。样品采用乙腈或丙酮超声提取，经中性氧化铝小柱净化浓缩后测定。加标回收率在83.4%-107.2%。实验结果表明，该方法线性良好，操作步骤简单，定量准确。

参考文献：

[1]黄灵瑜，等.高效液相色谱法测定化妆品种6种限用色素[J].化学试剂，2014，36（11）：1006-1008;1032.

[2]钱晓燕，等.固相萃取/超高效液相色谱--串联质谱法测定化妆品种12种合成着色剂[J].分析测试学报，2014， 33（5）527-532.

[3]苏小川，等.气相色谱-质谱联用法测定调味品种苏丹红Ⅰ、Ⅱ色素[J].理化检验-化学分册，2006，42（12）：1003-1006.

[4]李玮，等.高效液相色谱法测定化妆品种的7种色素[J].分析试验室，2011，30（12）：85-89.