血清ICAM-1、BCL2和Survivin检测对评价急性白血病病理状态及转归的价值

王建君，刘 莹，徐宪伟，冯智坤，杨金花

急性白血病（acute leukemia，AL）是一种恶性克隆增殖性疾病，其复发率和病死率仍居高不下，寻找新的治疗靶点提高疗效是当前的研究重点。目前，黏附分子在恶性肿瘤中的发病机制已经引起人们的普遍关注。已有研究表明，急性白血病细胞表面黏附分子-1（intercellular adhesion moleculer-1，ICAM-1）表达异常在白血病发生、发展中起重要作用。B细胞淋巴瘤/白血病2基因（B-cell lymphoa/leukemia-2，BCL2）和凋亡抑制基因Survivin是常见的凋亡调控家族中的成员，通过抑制细胞凋亡从而促进细胞的存活与增殖，其中在多数肿瘤组织中高表达，包括急性髓系白血病 （Acute myeloid idleukemia，AML）。目前在急性白血病中ICAM-1与侵袭、转移和增殖方面研究较多见，其与凋亡抑制基因BCL2和Survivin相关性研究少有报道。因此笔者采用酶联免疫吸附试验检测急性白血病患者化疗前后血清ICAM-1，以及BCL2和Survivin表达情况，分析其与临床病理特征的关系，探讨其在急性白血病发生、发展中的机制，以期为临床治疗提供一定的参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象收集郑州人民医院血液科2015年1月—2018年12月67例急性白血病患者血液标本。其中，男36例，女31例；年龄3～67岁，中位年龄30岁。急性淋巴细胞白血病（ALL）34例，包括完全（CR）或部分缓解（PR）19例，未缓解15例；急性髓系白血病33例，包括CR或PR 18例，未缓解15例。具有高白细胞（WBC＞100×109/L）者40例，无高白细胞者27例；具有髓外浸润29例，无髓外浸润38例。诊断标准按照张之南等恶性血液病诊断及疗效标准（第三版）。采用20例健康体检合格者的血液作为对照组。

1.2 标本采集分别于化疗前后取静脉血，分离血清，-20℃冻存，备测。

1.3 血清ICAM-1、BCL2和Survivin表达水平的测定采用固相夹心酶联免疫吸附试验（ELISA），反应体系为生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶（SAP），TMB显色。试剂盒为法国Diaclone公司产品。

1.4 统计学处理采用SPSS 17.0统计软件进行数据处理与统计分析，两样本均数间比较采用独立样本t检验。双变量相关分析采用Spearman相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 白血病患者治疗前血清ICAM-1、BCL2和Survivin表达水平与临床病理特征的关系67例白血病患者血清ICAM-1、BCL2和Survivin在有髓外浸润组别中的表达均高于无髓外浸润组别，差异具有统计学意义（P=0.000）；ICAM-1、BCL2和Survivin表达与患者年龄、性别、白细胞计数均无关，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.2 白血病患者治疗前后血清ICAM-1、BCL2和Survivin比较ALL血清ICAM-1、BCL2和Survivin表达水平在治疗前和未缓解组中均显著高于完全/部分缓解组和正常对照组，差异均具有统计学意义（P=0.000）；AML血 清ICAM-1、BCL2和Survivin表达水平在治疗前和未缓解组中均显著高于完全/部分缓解组和正常对照组，差异均具有统计学意义（P=0.000）。ALL患者血清中ICAM-1、BCL2和Survivin在完全/部分缓解组高于正常对照组，差异具有统计学意义（P=0.000），治疗前和未缓解组中表达水平基本相同，差异无统计学意义（P＞0.05）。AML患者血清中ICAM-1、BCL2和Survivin在AML完全/部分缓解组高于正常对照组，差异有统计学意义（P=0.000），治疗前和未缓解组中表达水平基本相同，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

2.3 白血病患者血清ICAM-1和BCL2、Survivin表达相关性Spearman相关性分析显示：67例白血病患者血清ICAM-1和BCL2表达呈显著正相关，差异具有统计学意义（Rs=0.924，P=0.000）。ICAM-1和Survivin表达呈显著正相关，差异具有统计学意义（Rs=0.771，P=0.000）。

表1血清ICAM-1、BCL2和Survivin与临床病理特征的关系（±s，μg/L）

表1血清ICAM-1、BCL2和Survivin与临床病理特征的关系（±s，μg/L）

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表2 ALL和AML治疗前后血清ICAM-1、BCL2和Survivin表达比较（±s，μg/L）

表2 ALL和AML治疗前后血清ICAM-1、BCL2和Survivin表达比较（±s，μg/L）

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3 讨论

已有研究表明，急性白血病细胞表面黏附分子表达异常在白血病发生、发展中起重要作用。ICAM-1属细胞黏附分子免疫球蛋白超家族，其在多种恶性肿瘤如乳腺癌［1］、前列腺癌［2］、肺癌［3］中均高表达，提示肿瘤的进展和预后不良。该研究结果显示ALL和AML血清ICAM-1表达水平在治疗前和未缓解组中均显著高于完全/部分缓解组和正常对照组，ICAM-1血清水平在有髓外浸润组别中高于无髓外浸润组别。这一结果与以往文献报道基本相似［4］。此外，该研究结果发现，ICAM-1在白细胞计数>100×109/L组别表达高于计数小于白细胞计数<100×109/L组别，但差异无统计学意义，这一点与以往大多数文献报道不同［5］。可能与以下原因有关：（1）样本量不同；（2）实验方法不同；（3）标本来源不同。

BCL2是从滤泡性B淋巴瘤中发现的一种癌基因，其定位于18q21上，能够与促凋亡蛋白BAX结合形成复合物抑制细胞的凋亡，促进细胞的存活与增殖。研究表明，BCL-2在乳腺癌、食管癌、胃癌等肿瘤中高表达，并与肿瘤的发生发展密切相关［6-8］。国外有文献［9］通过免疫组化方法证实，AML患者中BCL-2显著高于对照组，并与患者预后密切相关。孙巨勇等［10］用RT-PCR和Western blot方法检测发现急性髓性白血病初治组BCL-2蛋白及mRNA表达量显著高于健康对照和缓解组。笔者研究结果与以往文献报道基本一致。该研究还发现，BCL-2的表达在有髓外浸润组别中高于无髓外浸润组别，这说明BCL-2在急性白血病的发生发展过程中起着促进作用。

Survivin属于凋亡抑制蛋白家族的新成员，定位于17q25，是唯一与细胞周期密切相关的凋亡抑制基因，其在胚胎组织及肿瘤组织中有较高的表达，且其高表达提示肿瘤预后差。该课题采用酶联免疫吸附试验结果显示Survivin基因表达水平在治疗前和无缓解组中显著高于对照组，这一结果与任啟霞等［11］报道初治组及复发组中Survivin mRNA及蛋白表达量均高于缓解组较一致，这提示Survivin在白血病发生、发展起着重要作用，可以作为预后不良的因素之一。

该研究相关性分析显示，ICAM-1与BCL2及Survivin表达均呈显著正相关。通过查阅文献笔者发现高表达的ICAM-1在参与肿瘤血管形成中扮演重要角色，该分子异常的高表达可以促进肿瘤与血管黏附性增加，并且刺激肿瘤内部血管新生的能力，为肿瘤的浸润和远处转移奠定坚实的基础［12-14］。已有研究证明在肾母细胞瘤、结直肠癌等中BCL2能够诱导血管内皮生长因子的表达，并且促进血管的形成［15，16］。研究表明Survivin和肿瘤血管内皮生长因子密切相关［17］，并且与肿瘤微血管形成关系密切，其中甲状腺癌中表达越高，肿瘤微血管密度越高［18］。笔者推测ICAM-1、BCL2和Survivin三者可能存在协同作用，共同促进血管的形成，进一步促进白血病的发生发展。该文仅用酶联免疫吸附试验检测方法得出上述结论证据尚不充分，因此，有必要在分子水平进一步探讨。此外，三者相互作用的机制可以作为后续的研究课题进一步探讨。