白癜风患者外周血Th17/Treg细胞与相关细胞因子水平变化及临床意义

王修勇，常 远，高 明，张 帆

白癜风是临床常见的色素脱失性皮肤病之一，主要表现为局限性或广泛性黑素细胞功能障碍。近期有研究指出，白癜风是一种多基因遗传的自身免疫性疾病，它的发生与自身免疫因素密切相关［1］。Th17/Treg细胞是近年来新发现的T细胞亚群，两者通过其相对应的细胞因子在自身免疫性疾病中发挥重要作用［2］。笔者通过对98例白癜风患者外周血Th17/Treg细胞及相关细胞因子含量进行检测，以探讨Th17/Treg细胞及相关细胞因子在白癜风中的作用和意义。

1 资料与方法

1.1 研究对象收集2016年8月—2018年7月在笔者所在医院皮肤科就诊并被确诊为白癜风的患者98例，纳入研究组，其中男65例，女33例；年龄15～65岁，平均（32.6±13.2）岁；稳定期56例，进展期42例。排除标准：伴有甲状腺功能亢进等自身免疫性疾病，近1个月曾接受免疫调节剂治疗者。另外选取相同时期在医院门诊进行健康体检的志愿者40例，其中男26例，女14例；年龄7～65岁，平均（34.6±10.8）岁。两组间性别、年龄、疾病分期对比差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 方 法

1.2.1 主要试剂盒和检测仪器Uranus AE酶免仪（深圳市爱康生物科技有限公司）、CytoNova流式细胞仪（北京博奥晶典生物技术有限公司），试剂：Th17流式检测试剂盒（上海江莱生物科技有限公司）：包括抗人CD3-FITC和抗人CD4-PE，抗人IL-17A-PE及匹配的鼠IgG1同型对照。CD4+CD25+Foxp3+Treg一步法流式检测试剂盒（Biolegend公司）：抗人CD4-FITC、抗人CD25，FOXP3及匹配的鼠IgG1同型对照。IL-17、IL-23、IL-6和TGF-β ELSIA试剂盒均由Biosource公司提供。

1.2.2 检测方法 采集两组每位研究对象的静脉血6 ml分装2个试管，各3 ml，1个试管用于流式细胞术检测Th17/Treg细胞，另1个试管用ELSIA法对IL-17、IL-23、IL-6和TGF-β含量检测。各项检测严格按照说明书进行。

1.3 统计学方法采用SPSS 18.0软件进行统计学分析，计量资料以（x±s）表示，正态性检验和方差齐性检验后，进行两独立样本t检验，相关分析用Pearson相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者Th17/Treg细胞及相关细胞因子表达情况研究组外周血Th17细胞、Th17/Treg、IL-17、IL-23、IL-6水平明显高于对照组（P＜0.05），Treg细胞、TGF-β水平均明显低于对照组（P＜0.05），见表1。

2.2 不同分期患者血Th17/Treg细胞及相关细胞因子表达情况进展期外周血Th17细胞、Th17/Treg、IL-17、IL-23、IL-6水平明显高于稳定期（P＜0.05），Treg细胞、TGF-β水平均明显低于稳定期（P＜0.05），见表2。

2.3 白癜风患者外周血Th17/Treg细胞与相关细胞因子的关系白癜风患者外周血Th17细胞与IL-17、IL-23、IL-6水平呈明显正相关（P＜0.05），与TGF-β无明显相关性（P＞0.05），Treg细胞与IL-17、IL-23水平呈明显负相关（P＞0.05），与TGF-β呈明显正相关（P＜0.05），与IL-6无明显相关性（P＞0.05），见表3。

表1两组患血Th17/Treg细胞及相关细胞因子表达情况（x±s）

表2不同分期患者血Th17/Treg细胞及相关细胞因子表达情况（x±s）

表3白癜风患者外周血Th17/Treg细胞与相关细胞因子的关系

3 讨论

Th17细胞是近年新发现的一种免疫细胞，具有强大的促炎作用［3］。Th17细胞与Treg细胞间存在密切关系，两者功能互相拮抗，但分化时密切相关，正常生理状态下，Th17细胞和Treg细胞处于相对平衡状态，当其中一种细胞或两种细胞的数量及功能发生异常，则可引起疾病的发生发展［4］。

该研究发现，白癜风患者Th17细胞占比较正常明显升高，而Treg细胞占比明显低于正常，而且Th17/Treg比值较正常对照组明显升高，提示白癜风患者机体存在Th17/Treg细胞的免疫失衡，这种免疫失衡可能参与了白癜风的发生和进展过程。

Th17细胞是一种介导炎症反应和自身免疫的细胞，其在自身免疫性疾病病理过程中发挥重要作用，它主要分泌IL-17A、IL-17F、IL-6和TNF-α等炎性因子［5］。Treg是一种有负性调节作用的T细胞，它可特异性表达转录因子Foxp3，可分泌IL-10、TGF-β等抑制性因子，从而起到抗炎和维持自身免疫耐受的作用［6］。Th17细胞与Treg细胞均由CD4+T细胞分化而来，二者相互联系，但又相互制约。该研究发现，白癜风进展期患者的Th17细胞占比较稳定期患者明显升高，Treg细胞占比在明显下降，可能就是Th17/Treg细胞免疫失衡在白癜风发生进展中发挥重要作用。

IL-23由炎症中被抗原激活的巨噬细胞和树突状细胞分泌，是Th17细胞分化的重要因子，尽管不是Th17细胞分化的始动因子，但它在Th17细胞分化过程中发挥重要作用［7］。Th17细胞合成IL-17后可与上皮细胞、内皮细胞等间质细胞表面上的IL-17受体结合，使MAP激酶和NF-KB活化而发挥多种生物学作用，进而刺激此类细胞产生多种细胞因子，使白细胞向病灶迁移并促进其成熟和活化，白细胞活化后可产生溶酶体酶等物质，进而引起组织和细胞损伤，使炎症加剧［8］。IL-17主要源于Th17细胞，可使巨噬细胞向炎症病灶聚集，并被细菌和细菌毒素激活，激活后的巨噬细胞则通过分泌IL-6、IL-23、TNF-α等炎性因子，加重局部炎症反应。而IL-23则会加速T细胞向Th17细胞分化，使Th17细胞占比进一步升高，而Th17细胞占比升高又会分泌更多的IL-17，使IL-17浓度升高，加剧炎症反应［9］。

该研究结果显示，白癜风患者外周血IL-17水平与Th17细胞呈明显正相关，提示IL-17是由Th17细胞合成和释放。IL-17、IL-23与IL-17细胞呈正相关，与Treg细胞呈负相关，提示IL-17、IL-23可能对Treg细胞有抑制作用。Ye Xin等［10］研究指出，IL-17、IL-23对Treg细胞有抑制作用。

IL-6也是Th17细胞分泌的细胞因子之一，在白癜风患者中其水平明显升高［11］。该研究相关性分析显示，白癜风患者IL-6水平与Th17细胞占比有明显的正相关，但与Treg细胞关系不明显。TGF-β是Treg细胞分泌的细胞因子。该研究结果显示，白癜风患者TGF-β与Th17细胞无明显相关性，但与Treg细胞密切相关，且白癜风患者TGF-β水平明显低于正常对照组，提示TGF-β源于Treg细胞。

研究证实，IL-6在Th17细胞和Treg细胞间发挥着纽带作用，在无IL-6存在情况下，TGF-β刺激使活化的T细胞向Treg细胞分化，当IL-6、TGF-β同时存在时，则会刺激活化T细胞向Th17细胞分化［12］。可见，炎症局部因IL-6水平升高与一定含量的TGF-β共存，进而引起Th17细胞数量增多，加剧炎症反应。

总之，Th17和Treg细胞的免疫失衡在白癜风患者的病变中发挥重要作用，炎症局部大量表达IL-17、IL-6、IL-23会使Th17细胞数量进一步增加，而增多的Th17细胞有进一步增加炎性因子的分泌量，加剧局部炎症，可见，Th17/Treg失衡及其相应细胞因子在白癜风的免疫病理损害中发挥重要作用，这可能为白癜风的靶向治疗提供理论依据。