注射制剂辅料甘露醇细菌内毒素检查法研究

邓莎 罗洁 张德波 边原

【摘 要】目的：建立辅料甘露醇的细菌内毒素检验方法。方法：按照中国药典2015年版四部通则1143细菌内毒素检查方法和中国药典2015年版四部通则9301注射剂安全性检查法应用指导原则[2-4]进行试验，内毒素限值设定为L=1.0EU/g。结果：甘露醇稀释浓度为0.03g/ml时，对鲎试剂与内毒素反应不产生干扰。结论：辅料甘露醇可以建立细菌内毒素检查法质量标准。

【关键词】：甘露醇;注射制剂;细菌内毒素;干扰试验

Abstract： OBJECTIVE To establish a bacterial endotoxin test（BET） for mannitol. METHODS According to Ch.P 2015 Vol Ⅳ general principles 1143 and Ch.P 2015 Vol Ⅳ general principles 9301. Set the endotoxin limit： L = 1.0 EU/g. RESULTS There was no interference in the agglutinate reaction between the sample and relative TAL with the ethylenediamine concentration of 0.03g/ml. Need to use the sensitivity of 0.03 EU/ml or higher sensitivity TAL. CONCLUSION Mannitol as the excipient of injection preparation can establish the quality standard of bacterial endotoxin test.

Key words： Mannitol; Injection preparation; Bacterial endotoxin; Interference test

【中图分类号】R927【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2020）07-21--01

甘露醇，白色针状结晶体，易溶于水，有类似蔗糖的甜味。可用于治疗肝病、糖尿病、艾滋病、心脏病等，在临床上被广泛使用[1]。本文研究的甘露醇作为注射制剂生产中添加的辅料，为控制甘露醇细菌内毒素含量，确保相关注射制剂的安全性，研究起草辅料甘露醇细菌内毒素检查标准。

1 实验材料

1.1 鲎试剂

标示灵敏度（λ）0.03EU/ml，规格：0.1ml/支，批号：1804121;标示灵敏度（λ）0.06EU/ml，规格：0.1ml/支，批号：1808220;标示灵敏度（λ）0.125EU/ml，规格：0.1ml/支，批号：1806252，湛江安度斯生物有限公司生产。标示灵敏度（λ）0.03EU/ml，规格：0.1ml/支，批号：17080612;标示灵敏度（λ）0.06EU/ml，规格：0.1ml/支，批号：17061112;标示灵敏度（λ）0.125EU/ml，规格：0.1ml/支，批号：18050212，福州新北生化工业有限公司生产。

1.2 细菌内毒素检查用水

规格：100ml/瓶，批号1710260，含细菌内毒素<0.003EU/ml，湛江安度斯生物有限公司生产。

1.3 细菌内毒素工作标准品（冻干）

效价：80EU/支，批号：150601-201784，中国食品药品检定研究院。

1.4 药品

甘露醇，药用辅料，白色粉末，批号：YPJT1801721-1、YPJT1801721-2、361805024，规格：约5g/支，由企业提供。

1.5 仪器

ZRD-A7140型十段编程鼓风干燥箱，温度范围5-300℃;TAL-40试管恒温仪，控温精度37±0.2℃，孔间温差≤0.1℃。ZH-2型孔式旋涡混合仪。

2 方法与结果

2.1 内毒素限值（L）的确定

本品作为药用辅料，添加于盐酸帕洛诺司琼注射液、唑来膦酸注射液中，根据其添加的剂量及两种注射液临床用法用量，参考《中国药典》2015年二部“甘露醇注射液”标准中细菌内毒素检查项内毒素限值， “取本品，依法检查（附录 ⅪE），每1g甘露醇中含内毒素的量应小于1.25EU ”[2]。本着从严的原则，确定本品的内毒素限值为L=1.0EU /g 。

2.2 鲎试剂灵敏度复核

以细菌内毒素检查用水溶解内毒素工作标准品，并配制成含内毒素2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ系列浓度的溶液，依法进行加样操作。每一浓度平行做4支，同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照，记录结果，并按式λC=antilg（∑X/4）计算λC值，见表1。

表1结果表明：每一批鲎试剂灵敏度测得值均在0.5λ～2.0λ范围内，符合要求。复核的鲎试剂可按标示灵敏度值使用。

2.3 干扰预试验

取本品一批（批号：YPJT1801721-2）用细菌内毒素检查用水溶解并配制含甘露醇0.25g/ml、0.125g/ml、0.06g/ml、0.03g/ml系列濃度。依法操作进行试验。结果见表2。

表2预试结果显示：供试品用细菌内毒素检查用水稀释制成0.125g/ml及其以下浓度的溶液可能对反应无干扰作用。