冠心通络方对糖尿病大鼠心肌缺血的干预研究

蔡智刚 唐新征 姚灿坤

【摘要】 目的 探讨冠心通络方治疗糖尿病大鼠心肌缺血的药物疗效。方法 60只SD大鼠， 随机分为正常组、造模组、冠心通络方组、阿司匹林组， 每组15只。正常组大鼠正常喂养， 不追加任何干预措施;造模组施加干预措施， 制造糖尿病大鼠心肌缺血模型;冠心通络方组在造模大鼠的基础上予以灌服冠心通络方汤剂治疗;阿司匹林组在造模大鼠的基础上予以灌服阿司匹林治疗。1个月后比较四组大鼠的心功能参数， ST段和T波变化值， 血糖、总胆固醇变化情况， 左心室舒张末期容积（LVEDV）、左心室舒张末期内径（LVIDd）、左心室射血分数（LVEF）。结果 模型组大鼠心电图ST段压低值、T波倒置值分别为（0.41±0.25）、（0.56±0.38）mV高于正常组的（0.11±0.23）、（0.13±0.58）mV， 差异具有统计学意义（P<0.05）;追加干预措施以后， 冠心通络方组大鼠心电图ST段压低值（0.23±0.21）mV、T波倒置值（0.24±0.41）mV低于模型组的（0.41±0.25）、（0.56±0.38）mV及阿司匹林组的（0.35±0.24）、（0.42±0.37）mV， 差异具有统计学意义（P<0.05）;阿司匹林组和模型组ST段压低值、T波倒置值比较， 差异无统计学意义 （P>0.05）。模型组总胆固醇（8.41±3.13）mmol/L、血糖（21.3±6.36）mmol/L高于正常组的（4.67±2.45）、（6.46±2.34）mmol/L， 差异具有统计学意义（P<0.05）;追加干预措施以后， 冠心通络方组大鼠总胆固醇（6.34±2.25）mmol/L、血糖（11.35±4.44）mmol/L低于模型组的（8.41±3.13）、（21.3±6.36）mmol/L及阿司匹林组的（7.25±3.42）、（19.9±5.63）mmol/L， 差异具有统计学意义（P<0.05）;阿司匹林组和模型组总胆固醇、血糖水平比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。模型组大鼠LVEDV（0.87±0.33）ml、LVIDd（9.32±0.89）mm高于正常组的（0.51±0.23）ml、（5.82±1.13）mm， LVEF（50.34±5.35）%低于正常组的（75.97±7.56）%， 差异具有统计学意义（P<0.05）;追加干预措施以后， 冠心通络方组LVEDV（0.58±0.39）ml、LVIDd（6.01±1.22）mm低于模型组的（0.87±0.33）ml、（9.32±0.89）mm， LVEF（64.38±6.45）%高于模型組的（50.34±5.35）%， 差异具有统计学意义（P<0.05）;阿司匹林组和模型组LVEDV、LVIDd、LVEF指标水平比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。结论 冠心通络方能有效改善糖尿病大鼠心脏微循环， 缓解心肌缺血症状， 其机制可能与其抑制血糖、血脂有关。

【关键词】 糖尿病;心肌缺血;冠心通络方;微循环

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.25.093

【Abstract】 Objective   To discuss the efficacy of Guanxin Tongluo Recipe on myocardial ischemia in diabetic rats. Methods   A total of 60 SD rats were randomly divided into normal group， model group， Guanxin Tongluo Recipe group and aspirin group， with 15 rats in each group. Normal group were fed normally without any additional interventions， model group received intervention measures to create a model of myocardial ischemia in diabetic rats， Guanxin Tongluo Recipe group received Guanxin Tongluo Recipe on the basis of the modeled group， and aspirin group received aspirin on the basis of modeled rats. 1 month later， cardiac function parameters， ST segment and T wave changes， blood glucose and total cholesterol changes， left ventricular end-diastolic volume （LVEDV）， left ventricular internal diameter at end-diastole （LVIDd） and left ventricular ejection fraction （LVEF） were compared among the four groups. Results   ST-segment depression value and T wave inversion value of the model group were respectively （0.41±0.25） and （0.56±0.38） mV， which was higher than that of the normal group （0.11±0.23） and （0.13±0.58） mV， and the difference was statistically significant Significance （P<0.05）. After additional interventions， ST-segment depression value and T wave inversion value of Guanxin Tongluo Recipe group were respectively （0.23±0.21） mV and （0.24±0.41） mV， which was lower than that of model group [（0.41±0.25） and （0.56±0.38） mV] and aspirin group [（0.35±0.24） and （0.42±0.37） mV]， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant difference in ST-segment depression value and T wave inversion value between aspirin group and model group （P>0.05）. The total cholesterol （8.41±3.13） mmol/L and blood glucose （21.3±6.36） mmol/L of the model group were higher than that of normal group （4.67±2.45） and （6.46±2.34） mmol/L， and the difference was statistically significant （P<0.05）. After additional interventions， total cholesterol （6.34±2.25） mmol/L and blood glucose （11.35±4.44） mmol/L was lower than that of model group [（8.41±3.13） and （21.3±6.36） mmol/L] and aspirin group [（7.25±3.42） and （19.9±5.63） mmol/L]， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant difference in total cholesterol and blood glucose between aspirin group and model group （P>0.05）. LVEDV （0.87±0.33） ml and LVIDd （9.32±0.89） mm of the model group was higher than that of the normal group （0.51±0.23） ml， （5.82±1.13） mm， and LVEF （50.34±5.35）% was lower than that of the normal group （75.97±7.56）%， and the difference was statistically significant （P<0.05）. After additional interventions， LVEDV （0.58±0.39） ml， LVIDd （6.01±1.22） mm of Guanxin Tongluo Recipe group was lower than that of model group （0.87±0.33） ml， （9.32±0.89） mm， and LVEF （64.38±6.45）% was higher than that of model group （50.34±5.35）%， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant difference in LVEDV， LVIDd and LVEF between aspirin group and model group （P>0.05）. Conclusion   Guanxin Tongluo Recipe can effectively improve the cardiac microcirculation of diabetic rats and relieve the symptoms of myocardial ischemia. Its mechanism may be related to its inhibition of blood glucose and blood lipids.

【Key words】 Diabetic; Myocardial ischemia; Guanxin Tongluo Recipe; Microcirculation

随着我国已经进入老年社会， 糖尿病合并冠心病的几率越来越高， 冠心病的主要临床表现是心肌缺血， 而心肌缺血是2型糖尿病常見的慢性并发症之一[1， 2]。正因为糖尿病和冠心病心肌缺血之间存在密切的相关性， 故探讨糖尿病和冠心病的共同发病机制， 如何利用中医药在防治冠心病和糖尿病方面的优势， 采取中西医结合的方法， 降低糖尿病合并心肌缺血的发生率， 减少心肌梗死等严重的心血管事件， 具有显著意义。基于此， 本文通过采用冠心通络方治疗糖尿病大鼠心肌缺血， 研究其药物疗效， 现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料

1. 1. 1 实验动物 采用清洁级SD雄性大鼠120例， 购自广州中医药大学实验动物中心， 饲养于广州中医药大学第一附属医院清洁级动物实验室。基础鼠料购自广州中医药大学实验动物中心， 总热量6.94 J/g， 其中蛋白质23%， 碳水化合物53%， 脂肪5%。肥甘鼠料（高热量饲料）由基础鼠料加蔗糖、炼猪油和鸡蛋充分混匀后， 机器成型。其总热量为21.33 J/g， 其中蛋白质15%， 碳水化合物51%， 脂肪25%。

1. 1. 2 药物 冠心通络方（黄芪30 g， 白参10 g， 麦冬15 g， 葛根30 g， 丹参15 g， 赤芍10 g， 瓜蒌壳30 g， 红花10 g， 地龙10 g， 甘草5 g）， 以4倍量水浸泡2 h， 煮沸1 h后， 滤过， 药渣再用3倍量的水煮沸1 h， 滤过， 合并两次滤液， 浓缩至比重1.2左右;加入0.3%苯甲酸钠防腐剂， 装瓶， 0～4℃冰箱放置， 保存备用。

1. 1. 3 实验试剂及仪器 试剂：链脲佐菌素（STZ）（ALEXIS公司）;阿司匹林肠溶片（德国拜耳公司， 规格：100 mg/片）， 用时用蒸馏水稀释成0.25%浓度;去甲肾上腺素（新谊医药集团， 规格：2 mg/支）。仪器：Vivid 7 DimensionV彩色多普勒超声诊断仪（通用电气有限公司）。

1. 2 方法

1. 2. 1 糖尿病心肌缺血大鼠模型的制备及给药SPF级SD雄性大鼠， 喂养高糖高脂饲料（普通饲料为64%、猪油为15%、蔗糖为20%、盐为1%）1个月。1个月后所有大鼠禁食12 h不禁水， 腹腔注射小剂量链脲佐菌素37 mg/kg。72 h后检测空腹血糖（FBG）， 选择FBG≥16.7 mmol/L为2型糖尿病模型的合格标准。再取糖尿病大鼠后肢大腿内侧皮下注射异丙基肾上腺素水溶液， 1次/d， 每次剂量10 mg/kg， 连续注射5 d。每次注射后1、5、10、30、45 min……均可记录心电图， 观察急性心肌缺血改变。如能连续2 d观察到心肌缺血心电图典型改变， 则表明建模成功。

1. 2. 2 分组 随机把大鼠分为空白对照组、糖尿病心肌缺血模型组、冠心通络方组、和阿司匹林组4个亚组.其中空白对照组为正常大鼠， 糖尿病心肌缺血模型组只注射STZ+去甲肾上腺素， 不采用药物干预;冠心通络方组给予冠心通络方灌胃;阿司匹林组给予阿司匹林20 mg/（kg·d）剂量灌胃;各组间灌胃液体量通过补充生理盐水方法保持一致。以上四组大鼠在药物干预1个月后予以处死， 取左心室心肌组织。

1. 3 观察指标 ①比较心电图ST段压低和T波倒置值。用乙醚轻度麻醉， 仰卧位将头和四肢固定， 用心电图机记录心电图， 观察心电图ST段压低值和T波倒置值。②比较血糖、血脂水平。从下腔静脉取血5 ml， 离心15 min后， 测定血总胆固醇、血糖浓度。③检测LVIDd、LVEF、LVEDV。用Vivid 7 DimensionV彩色多普勒超声诊断仪进行心脏超声检测， 在取得满意的胸骨旁左心室短轴二维图像后， 于乳头肌水平将M型取样线垂直于室间隔和左心室后壁获得M型超声心动图， 测定LVIDd、LVEF、LVEDV， 连续取3个心动周期的平均值。

1. 4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验;计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 四组大鼠心电图ST段压低值和T波倒置值比较模型组大鼠心电图ST段压低值、T波倒置值高于正常组， 差异具有统计学意义（P<0.05）;追加干预措施以后， 冠心通络方组大鼠心电图ST段压低值、T波倒置值低于模型组及阿司匹林组， 差异具有统计学意义（P<0.05）;阿司匹林组和模型组ST段压低、T波倒置值比较， 差异无统计学意义 （P>0.05）。见表1。

2. 2 四组大鼠总胆固醇、血糖水平比较 模型组大鼠总胆固醇、血糖水平高于正常组， 差异具有统计学意义（P<0.05）;追加干预措施以后， 冠心通络方组大鼠总胆固醇、血糖水平低于模型组及阿司匹林组， 差异具有统计学意义（P<0.05）;阿司匹林组和模型组总胆固醇、血糖比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

2. 3 四组大鼠LVEDV、LVIDd、LVEF指标水平比较模型组大鼠LVEDV、LVIDd高于正常组， LVEF低于正常组， 差异具有统计学意义（P<0.05）;追加干预措施以后， 冠心通络方组LVEDV、 LVIDd低于模型组， LVEF高于模型组， 差异具有统计学意义（P<0.05）;阿司匹林组和模型组LVEDV、LVIDd、LVEF指标水平比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。

3 讨论

中国糖尿病人口已过亿， 居世界首位。糖尿病主要损伤血管， 其并发症分为微血管并发症和大血管并发症。防治心脑血管疾病所需的医疗支出， 占糖尿病医疗费用的最主要部分。目前， 中医药在防治糖尿病并发症方面优势明显， 大量循证医学证據已证实其疗效确切， 具有不可替代的作用[3， 4]。本文通过对糖尿病大血管及微血管病变的发病特点和主要证候进行了横断面研究， 发现在不同靶器官大血管及微血管病变的人群中有着相同的证候特点， 其病程发展存在一致性， 而中药的早期干预可延缓其发展。

“久病入络”是糖尿病血管病变的共同病机。糖尿病血管病变属于中医“络病”范畴， 其病位在脉络， 病邪久客不去以致脉络瘀滞为核心病机。脉络为血液运行的通路， 广泛散布于肌肉、皮肤及脏腑之间。“久病入络” 思想在《内经》中就有论述， 《素问·痹论》“病久入深， 营卫之行涩， 经络时疏， 故不通”;至明代叶天士得以完善：“经主气、络主血”， “初为气结在经、久则血伤入络”。清晰的描述了糖尿病微血管病变的发展过程：疾病迁延， 经气之伤， 日渐入血， 脉络不利， 内生血瘀， 气血并阻， 进而发展为出血、生浊， 先有脉络瘀滞不利， 后生脏腑气血不调。虽病变损伤部位不同， 然病理趋同， 可同理而治。临床实践中发现糖尿病血管病变患者常有舌下络脉青紫， 甚则粗张或瘀曲如卧蚕， 为典型的血瘀证特点， 且瘀的证候常先于症状出现， 并随疾病的进展呈现逐渐加重之象。

冠心通络方是防治糖尿病血管病变的有效方剂。中医理论认为， 糖尿病心肌病在临床上多以胸闷、胸痛为主证， 其病机多为本虚标实。本病本虚是以气阴两虚为主， 标实则以心脉瘀阻多见， 临床治疗当以益气养阴扶其本， 活血化瘀治其标。冠心通络方是本院研制已应用于临床多年的中药制剂， 无论是基础研究还是在临床应用方面都具有坚实的基础。方中以黄芪、人参补益心气;麦冬、葛根养阴生津， 共治其本虚;丹参、赤芍、地龙、红花活血化瘀， 瓜萎理气宽胸， 共治其标实;甘草调和诸药。全方有益气养阴， 活血化瘀， 疏通心脉之功效。黄芪可减少心率， 减少心肌能量消耗;人参、生地、麦冬能增强心肌收缩力， 增加心输出量和冠脉血流量;葛根、水蛭解除血管平滑肌痉挛， 减少冠脉阻力， 增加冠脉流量;丹参、红花改善血液流变性和心肌微循环， 改善心肌血流量;丹参、瓜萎可提高心肌对缺氧的耐受力。冠心通络方能扩张冠状血管， 抑制血小板聚集、粘附， 显著抑制血浆内皮素和血清丙二醛水平的升高， 明显提高血浆降钙素基因相关肽和血清超氧化物歧化酶的水平;该方尚有较好抗体外血栓形成和改善血液流变学作用， 改善心脏舒缩功能、调整心脏血管顺应性和降低心肌氧耗作用[5]。该方能明显降低球囊损伤动脉粥样硬化（AS）兔腹主动脉组织单核细胞趋化蛋白（MCP-1）、蛋白激酶Cα受体（PKC-α）表达， 通过抑制炎症增殖而减少血管再生组织， 轻血管内膜增生和血管平滑肌增殖， 从而防止血管再狭窄， 提示该方对缺血性心血管疾病治疗作用的多面性[6]。临床上广泛应用于糖尿病并发冠心病患者， 对缓解患者临床症状、改善预后、改善生存质量具有显著疗效。

综上所述， 冠心通络方能有效改善糖尿病大鼠心脏微循环， 缓解心肌缺血症状， 其机制可能与其抑制血糖、血脂有关。

参考文献

[1] 孟艳霞， 邓立普. 硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及基质金属蛋白酶7和缝隙连接蛋白43表达的影响. 中国现代医学杂志， 2018， 28 （1）：21-24.

[2] 向家培， 王贤恩， 张复贵. 稳心颗粒对于心肌缺血性疾病大鼠模型的影响. 中西医结合心脑血管病杂志， 2015， 13（15）：1728-1729.

[3] 韩安邦， 张健， 路迎冬， 等. 芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠心肌纤维化及TGF-β1 /Smad3信号通路的影响. 北京中医药大学学报， 2017， 40（1）：41-47.

[4] 中国2型糖尿病防治指南（2013年版）. 中国糖尿病杂志， 2014（8）：2-42.

[5] 吴以岭. 脉络论. 北京：中国科学技术出版社， 2010：921-967.

[6] 吴以岭. “脉络-血管系统病”新概念及其治疗探讨. 疑难病杂志， 2005（5）：285-287.

[收稿日期：2020-07-07]