DOK2在早期胃癌中的表达与病理特征相关性分析

李延新，杜 雄

(延安大学附属医院病理科，陕西 延安 716000)

胃癌是指起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，该病属于消化科常见疾病，也是世界范围内最常见的肿瘤之一，排名第五。统计数据显示，全球每年约有100万新发胃癌病例，虽然胃癌发病率有逐年下降趋势，但死亡率并未出现下降，仍然位居所有癌症中的第二位，约占10%。我国是胃癌高发国家之一，发病人数及死亡人数均约占全世界的50%，每年死于胃癌人数高达约22万人[1-3]。胃癌可发生于胃的任何部位，早期临床症状并不明显，多为嗳气、上腹不适等，与胃炎、胃溃疡等胃慢性疾病类似，易被忽略，多数患者被发现时已处于中晚期，且胃癌预后较差，5年生存率不足20%[4-6]。早期的诊断及分析对后续治疗具有重要的意义，也是改善胃癌患者预后的重要手段，因而寻找一种能够对胃癌进行病情监控及预后判断的指标尤为重要[7]。近些年随着分子生物学的发展，越来越多的基因指标被应用于胃癌的诊断与治疗中，DOK2是一种位于人类染色体8P21.3上的抑癌基因，能够编码412个氨基酸，在人体的胸腺、脾、肾脏等组织中均有表达，已被应用于卵巢癌、肺腺癌、大肠癌等疾患的诊断中[8-9]。本研究旨在探究DOK2基因在早期胃癌患者中的表达意义，并对DOK2基因表达同早期胃癌病理特征的相关性进行分析，以期为早期胃癌的诊断和鉴别提供临床依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年1月至12月于延安大学附属医院接受治疗的30例胃癌患者为实验组，采集其胃癌组织、癌旁组织，同时采集30例正常胃黏膜组织作为对照组。实验组男性16例，女性14例，年龄38～67岁，平均年龄(53.01±3.11)岁，胃癌TNM分期：T1+T2期13例，T3+T4期17例，N0+N1期15例，N3+N4期15例，远处转移14例，无远处转移16例，低分化20例，中高分化10例。对照组男性15例，女性15例，年龄30～65岁，平均年龄(53.12±3.02)岁。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

纳入标准：①实验组个体均经临床诊断确诊为早期胃癌；②意识清晰能够配合调研；③入组对象病历资料齐全；④经医院伦理学会批准实施；⑤患者或其家属签署知情同意书。

排除标准：①合并其他恶性肿瘤者；②妊娠或哺乳期女性；③调研前接受放疗者；④并发其他影响调研结果疾患者。

1.2 方法

采集胃癌患者的胃癌组织及癌旁组织，采集对照组个体正常胃黏膜组织，采用RT-PCR法对3种组织DOK2基因mRNA表达水平进行检测，并实施差异性比较；而后采用Western blot实验检测3种组织中DOK2蛋白表达情况；最后对DOK2蛋白表达与早期胃癌患者临床病理特征及预后生存的相关性进行分析。

1.3 观察指标及评估方法

①不同胃黏膜组织中DOK2mRNA表达情况；②不同胃黏膜组织中DOK2蛋白表达情况，蛋白表达情况采用半定量积分法，即随机选择显微镜下10个高倍视野，每个视野中标记100个细胞，合计评估1000个细胞，分别对阳性细胞占比和染色强度进行评分；其中阳性细胞占计数细胞0%计为0分，占比<10%为1分，占比10%～50%为2分，占比>50%为3分；染色强度无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分；总分为阳性细胞占比计分和染色强度计分的乘积，研究中总分4分以下代表低表达，4分以上代表高表达[10]；由2名医务人员在双盲条件下进行阅片计分；③DOK2蛋白表达与早期胃癌患者临床病例特征的相关性；④对早期胃癌患者实施随访，评估DOK2蛋白表达与患者生存时间的关系。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件中进行处理，计量资料采用(均数±标准差)(mean±S.D.)的形式表达，组间差异性比较采用t检验，计数资料采用[n(%)]的形式表达，组间差异性比较采用卡方检验，取P<0.05为差异具有统计学意义，取P<0.01为差异极显著。

2 结果

2.1 不同胃黏膜组织DOK2mRNA表达强度比较

癌组织中DOK2mRNA表达明显低于癌旁组织和正常组织(P<0.05)，癌旁组织与正常组织表达水平差异不明显(P>0.05，见表1)。

表1 不同胃黏膜组织DOK2 mRNA表达强度比较

2.2 不同胃黏膜组织DOK2蛋白表达情况

胃癌组织DOK2蛋白高表达率明显低于癌旁组织和正常组织(P<0.05)，癌旁组织与正常组织DOK2蛋白表达强度无统计学差异(P>0.05，见表2)。

表2 不同胃黏膜组织DOK2蛋白表达情况比较[n(%)]

2.3 早期胃癌患者DOK2蛋白表达与临床病理特征相关性分析

30例胃癌患者中DOK2蛋白低表达率为40.00%(12/30)，DOK2蛋白低表达与早期胃癌患者病灶浸润深度、淋巴结转移和分化程度均存在密切相关性(P<0.05)，与早期胃癌患者年龄、性别、是否存在远处转移无明显相关性(P>0.05，见表3)。

表3 早期胃癌患者DOK2蛋白表达与临床病理特征相关性分析[n(%)]

2.4 早期胃癌患者DOK2蛋白表达与其生存时间相关性分析

经随访记录发现，早期胃癌患者生存时间同其浸润深度、是否淋巴结转移、是否远处转移、分化程度以及DOK2蛋白表达程度均呈现明显的相关性(P<0.05，见表4)。

表4 早期胃癌患者DOK2蛋白表达与其生存时间相关性分析

3 讨论

胃癌是现阶段常见恶性肿瘤之一，我国的流调学显示，胃癌的死亡率已经由20世纪70年代的第4位上升至第1位，这些数据均提示，胃癌已经对我国居民的生命健康造成了严重威胁[11-12]。胃癌可发生于胃的任何部位，其中以胃窦部为主，其次为胃底贲门部，发生与胃体部的相对较少。早期胃癌临床症状不明显，因而多数患者确诊时以处于胃癌中晚期，这给治疗带来了较大的影响。近些年随着分子生物学在癌症治疗中应用的推广，各类基因疗法在早期胃癌的诊断、治疗和预后评估中都发挥了重要作用，成为医务工作者的研究重点方法。

DOK属于酪氨酸残基磷酸化蛋白质的一种，共包括DOK1-DOK77个成员，DOK是多种蛋白酪氨酸激酶的共同底物，广泛参与了多种细胞的增殖、凋亡、生长、迁移等进程。近些年已有较多研究证实DOK2同细胞癌变进程具有密切联系[13]。DOK2属于人类染色体8P21.3上的抑癌基因，在人体的胸腺、脾、肾脏等组织中均有表达。有学者[14]的细胞体外实验发现，DOK2具有抑制肺癌细胞增殖的作用;同时还有研究指出[10]，结直肠癌组织中DOK2表达相对正常组织呈现明显的低表达态，缺失率达36%，这些数据都说明DOK2的表达缺失同细胞癌变存在一定关联性。

本研究通过对比分析的方式，对DOK2在早期胃癌中的表达意义以及DOK2同早期胃癌患者病理相关性分析显示，DOK2在胃癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜中都有表达，但在胃癌组织中存在明显的表达缺失现象。不同组织DOK2蛋白表达强度比较显示，胃癌组织中DOK2蛋白呈现明显的低表达态，高表达态仅为40.00%，而癌旁组织和正常胃黏膜组织DOK2蛋白高表达态分别达到86.67%和90.00%，差异明显，这与翟立广，等[10]的研究结果相一致，该学者的研究显示116例胃癌患者中DOK2蛋白低表达态占62.9%，上述数据提示DOK2蛋白的表达在早期胃癌中呈现异常状态，分析其原因可能与DOK2的表达缺失影响了细胞代谢，或DOK2能够通过影响信号转导调控细胞代谢有关。本研究对DOK2的表达同早期胃癌病例特征的相关性分析显示，DOK2蛋白低表达与早期胃癌患者病灶浸润深度、淋巴结转移和分化程度均存在密切相关性(P<0.05)，与早期胃癌患者年龄、性别、是否存在远处转移无明显相关性，与文献报道一致[15]，DOK2基因属于抑癌基因的一种，DOK2低表达态对应癌细胞的活跃状态，胃癌患者细胞分化程度越低、浸润深度越深或出现淋巴结转移都代表病情较为严重，预后较差，这也对应提示DOK2的表达越低。DOK2高表达态胃癌患者的生存时间要明显优于DOK2低表达态的胃癌患者，提示DOK2可以作为判断早期胃癌患者预后的重要指标之一。

综上所述，DOK2表达减少或缺失与胃癌的发生发展密切相关，有可能成为胃癌预防、诊断和治疗中的一个新靶点。期待未来会有更多关于DOK2在胃癌发生、发展中的作用研究，并明确其分子机制，以利于胃癌的诊断、治疗和预后。