1例罕见的缺失型β珠蛋白生成障碍性贫血及其家系分析

欧阳慧,胡新年,许伟华,蓝仙娥,祝少凤,刘冬霞,黄奕雅,龙 辉

广东省清远市妇幼保健院：1.优生与遗传实验诊断中心；2.临床检验中心,广东清远 511515

珠蛋白生成障碍性贫血(以下简称地贫)是一种遗传性恶性贫血疾病，目前临床实验室主要检测类型包括3种α缺失(--SEA/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα)、3种点突变(αCSα/αα，αQSα/αα，αWSα/αα)和17种常见β地贫[-28、-29、-30、-32、CD14-15、CD17、CD26(βE)、CD27-28、CD31、CD41-42、CD43、CD71-72、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、IVS-Ⅱ-654、CAP+1、initiation condon]，其中β地贫的发生机制主要是β珠蛋白链上的基因发生突变，使得β-珠蛋白合成障碍，进而导致α珠蛋白和β珠蛋白的合成比例不平衡，而多余的α珠蛋白沉积在红细胞细胞膜上会持续发生作用，影响红细胞细胞膜的功能[1]。遗传性持续性胎儿血红蛋白增高症(HPFH)是由β珠蛋白基因簇大片段缺失导致，它属于一种遗传异质性的血红蛋白病，在患儿红细胞中存在大量的胎儿血红蛋白(Hb)F，血液学中临床检测结果是正常的或轻度偏低，携带者常常无临床症状或者只有轻微的临床症状，但在Hb电泳检测时HbF水平增高(一般大于10%)[2]。HPFH包括非缺失型和缺失型两种，β地贫基因携带者和东南亚型遗传性持续性胎儿血红蛋白增高症(SEA-HPFH)基因携带者婚配后就会有1/4的概率生育中间型或重型β地贫患儿，因此，HPFH患儿的产前诊断非常重要[3-4]。

目前国内外关于此类病例家系报道较少。由于在实验室中常规的地贫基因检测试剂盒无法检测出SEA-HPFH，使其容易出现漏检。本实验室发现1例41-42突变复合SEA-HPFH β缺失型的患儿，并对此进行了家系调查及临床表型分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 患儿，男，12 d，由外院送至本院优生与遗传实验诊断中心新生儿筛查室进行地贫筛查，筛查结果为HbA 2.1%、HbF 97.9%，提示为重型β地贫，儿童保健中心召回患儿进一步进行地贫基因检测，其基因型疑为β地贫βCD41-42(-TTCT)纯合子。对其父母进行基因型分析：患儿的父亲，男，26岁，地贫基因检测结果是βCD41-42(-TTCT)杂合突变携带者；患儿的母亲，女，24岁，地贫基因诊断未检出异常，与筛查结果不符(小细胞低色素性，HbF为23.7，明显增高)，对其进一步做罕见地贫基因型的检测，结果为SEA-HPFH(东南亚型)β缺失型地贫。

1.2方法

1.2.1标本采集 分别采集患儿、患儿母亲及患儿父亲的外周静脉血各2 mL，以乙二胺四乙酸抗凝，共3份血液标本，并让患儿父母签署知情同意书。

1.2.2血液学的表型分析 采用XN-1000血细胞自动分析仪(日本希森美康公司)进行红细胞的参数分析。

1.2.3Hb成分分析 采用毛细管电泳仪(法国SEBIA公司)对Hb成分进行定量或者定性分析。

1.2.4常见地贫基因分析 实验室使用深圳亚能生物技术有限公司地贫检测试剂盒，采用跨跃断裂点PCR(Gap-PCR)和DNA RAD-PCR进行常规地贫基因型的检测。实验过程严格按照本实验室地贫检测操作作业指导文件进行操作。

1.2.5罕见β地贫基因检测诊断 标本与深圳亚能生物技术有限公司的实验室进行联合检测，采用DNA测序、多重链接探针扩增技术、缺口PCR及血红蛋白持续增多症缺失型电泳等技术进行检测。

2 结 果

2.1血液学表型分析 患儿几项贫血相关的指标水平均降低，表示为小细胞低色素性贫血，怀疑为重型的β地贫。患儿的父亲几项贫血相关的指标均降低，表示为小细胞低色素性贫血，HbA2水平升高，疑为轻型β地贫。患儿母亲MCV和MCH水平轻度偏低，疑为β地贫或HPFH。见表1。

表1 患儿及其父母的血液学表型和基因型

2.2常见地贫基因检测 患儿母亲的检测结果提示未见异常，患儿父亲检出βCD41-42(-TTCT)杂合突变，患儿检出β珠蛋白基因CD41-42(-TTCT)纯合突变。

2.3缺失型β地贫基因检测 患儿和其母亲均检出SEA-HPFH β缺失型，患儿父亲的检测结果提示未见异常。

3 讨 论

β地贫是由β珠蛋白基因发生点突变、微小的缺失或者插入所引起。迄今为止，我国已发现46种基因突变类型。β珠蛋白基因簇位于α珠蛋白基因簇区域的第11号的染色体短臂的15.5区域，而它的基因簇上含有 1 个胚胎期表达基因(ε)、2个胎儿期表达基因(Gγ和αγ)、2个成人期表达基因(β和δ)、1个假基因(Ψβ)[5-6]。在中国人群中，SEA-HPFH是一种常见的以高HbF为表型的β地贫基因缺失突变，首次发现于柬埔寨和越南，因此被称作东南亚型(或越南型)HPFH。目前的地贫试剂盒普遍只能检测β地贫最常见的17种点突变类型，并未包括SEA-HPFH，因而在常见地贫基因检测中存在此类地贫被漏诊或误诊的可能。同时SEA-HPFH杂合的患者与β地贫携带者结合有可能导致中间型或重型β地贫患儿出生，因此对罕见型地贫基因的检测越来越受到重视[7-8]。

在本研究中，患儿母亲的血常规检测结果显示为轻度的小细胞低色素性贫血，怀疑为地贫基因携带者，而进行的常见地贫基因检测却未发现β地贫点突变 ，但HbF水平明显升高，若排除慢速异常HbQ/G带，则怀疑为HPFH基因携带者。CHANGSRI等[9]报道，非缺失型HPFH的HbF水平多为5.0%～15.0%，而缺失型HPFH的HbF水平多为15.0%～30.0%。因此，初步判断患儿母亲为缺失型HPFH，从而进一步送至深圳亚能生物技术有限公司进行缺失型的地贫基因检测，结果证实为SEA-HPFH基因携带者。患儿父亲的血常规检测结果显示为小细胞低色素性贫血，HbA2和HbF水平明显升高，进一步做常见地贫基因检测，结果为βCD41-42(-TTCT)杂合突变,为轻型的β地贫。患儿血常规检测结果显示为小细胞低色素性贫血，提示为重型β地贫，进一步常见地贫基因检测结果为β珠蛋白基因CD41-42(-TTCT)纯合突变表型，根据家系调查，外送深圳亚能生物技术有限公司做罕见地贫，结果显示为41-42突变合并SEA-HPFH β缺失型，地贫基因型为βCD41-42/β SEA-HPFH，提示为中间型或重型β地贫。由此分析，患儿同时遗传了父亲和母亲的β突变基因。当SEA-HPFH合并β地贫突变时会出现中间型或者重型β地贫，临床可表现为中度或者重度贫血。

对于地贫血液学筛查表型为阳性的患儿，当Hb电泳结果为阳性时，特别是HbF水平异常升高的，在进行常见地贫基因检测完成以后，需要对照其他相关结果看是否需要进行罕见地贫基因检测，必要时需进行基因测序[10]。此外，地贫基因检测结果显示为纯合突变或纯合缺失的患儿，需进行家系调查或进一步检测确定基因型，避免出现地贫基因检测常规试剂盒无法检测出来而误诊、漏诊的情况。因此，为了提高出生人口质量，应重视优生优育，减少中间型、重型地贫患儿的出生，同时需要加强基层产前筛查医师的遗传基础知识。