蜕膜组织自然杀伤细胞亚群比例与早期流产的相关性分析

彭婧，张敏，甘维梅

(南昌市洪都中医院，江西 南昌330000)

孕妇妊娠期间自然流产(SA)的发生率约为15%，其中绝大多数为早期流产，即妊娠时间低于12 周，其常见原因为胚胎染色体异常、免疫功能异常、黄体功能不足、甲状腺功能减退症以及感染等[1]。尽管经过一系列检查，还是有60%～70%的早期流产无法找到明确原因[2]。由于在孕早期蜕膜组织淋巴细胞中杀伤细胞(NK)占主要地位，推测蜕膜组织中NK细胞异常可能是孕早期自然流产的重要病因[3]。本研究通过流式细胞术分析早期自然流产孕妇与早期正常妊娠孕妇蜕膜组织中NK细胞亚群比例的差异，进一步探讨其与早期流产的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年1月—2018年12月收治的早期自然流产孕妇20 例作为观察组，年龄(28.43±2.12) 岁，体质量指数(BMI)(20.43±1.38) kg/m2，孕周(8.75±1.89) 周，流产次数(2.52±0.42) 次；经相关检查排除染色体、自身免疫、感染、遗传等因素引起的流产。选择同期正常妊娠行早期人工流产的孕妇20 例作为对照组，年龄(27.23±2.08) 岁，BMI(20.78±1.48) kg/m2，孕周(8.01±1.22) 周，流产次数(2.01±0.23) 次；既往无不良妊娠史，自愿终止早期妊娠且B超显示胎儿发育正常。两组孕妇的年龄、孕周、BMI、流产次数等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准，且所有孕妇均已签署知情同意书。

1.2 方法

所有孕妇在行无痛清宫术前均接无菌负压吸引瓶，吸取其蜕膜组织置于预冷的磷酸盐缓冲液(PBS)离心管中，迅速送至医院中心实验室进行蜕膜组织单细胞悬液的制备。然后用流式细胞仪(美国BeckmanCoulte公司)以CD45-FITC/CD(56+16)-RD1/CD3-PC5对蜕膜组织单细胞悬液进行染色，并以CD45设门筛选出总淋巴细胞，用CD3和CD(56+16)双抗标记蜕膜NK细胞。同时所有孕妇在行清宫术当天早晨空腹抽取静脉血3 mL，用于检测外周血雌二醇(E2)、孕酮(P)水平，所有操作均严格按试剂盒说明书进行。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 两组孕妇蜕膜组织NK细胞亚群表型特征比较

所有孕妇蜕膜组织淋巴细胞中NK细胞总量(即CD3-CD56+细胞)占70%左右，两组孕妇蜕膜组织内NK细胞总量比较，差异无统计学意义(P>0.05)。观察组孕妇蜕膜组织内CD3-CD56+CD16-NK细胞比例明显低于对照组，CD3-CD56+CD16+NK细胞比例明显高于对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

表1 两组孕妇蜕膜组织NK细胞亚群表型特征比较

2.2 两组孕妇外周血E2和P水平比较

观察组孕妇外周血E2和P水平均明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)(见表2)。

表2 两组孕妇外周血E2和P水平比较

2.3 蜕膜组织NK细胞亚群比例与E2和P的关系

Pearson相关分析结果显示，所有孕妇外周血E2和P水平与蜕膜组织内CD3+CD56+CD16+NK细胞比例均呈负相关(r值分别为-0.463和-0.502)，与CD3-CD56+CD16-NK细胞比例均呈正相关(r值分别为0.455和0.476)。

3 讨 论

早期流产主要是孕妇在妊娠12 周以前发生腹痛、阴道流血的现象。早期流产时，绒毛与子宫底蜕膜的联系尚不牢固，常先有阴道流血，然后伴有阵发性下腹疼痛。NK细胞是不同于T和B淋巴细胞的第三类淋巴细胞，不表达特异性抗原识别受体，妊娠时蜕膜组织内NK细胞含量非常丰富，约占蜕膜组织内淋巴细胞的70%～80%，由于其直接识别胎儿抗原，推测蜕膜组织NK细胞在母胎界面免疫耐受中发挥着重要作用[4-5]。

根据NK细胞表面抗原标志，NK细胞亚群主要可以分为CD3-CD56+CD16+NK细胞和CD3-CD56+CD16-NK细胞，蜕膜组织内NK细胞则以CD3-CD56+CD16-亚群为主(约占90%)，而外周血以CD3-CD56+CD16+亚群为主(约占95%)[6]。与外周血NK细胞相比，蜕膜组织NK细胞有着不同的作用，由于CD16的低水平表达，蜕膜组织NK细胞表现出对表达主要组织相容性复合物Ⅰ类(MHC-Ⅰ)分子的滋养层细胞杀伤能力的下降，说明蜕膜组织中CD16的低表达水平可能有利于维持妊娠过程中滋养细胞功能[7-8]。

本研究结果显示，所有孕妇蜕膜组织淋巴细胞中NK细胞总量(即CD3-CD56+细胞)占70%左右，其中正常早期妊娠孕妇蜕膜组织NK细胞亚群主要为CD3-CD56+CD16-NK细胞，约占(82.13±9.74)%，而早期自然流产孕妇CD3-CD56+CD16-NK细胞比例均值为(73.86±9.95)%，明显低于正常早孕组，而CD3-CD56+CD16+NK细胞比例为(16.32±3.35)%，明显高于正常早孕孕妇。CD16又称为Leu11抗原，是NK细胞表面一种低亲和力IgG Fc受体(FcγRⅢ)，主要介导NK细胞的自然杀伤和抗体依赖的细胞介导的细胞毒效应(ADCC)作用，当蜕膜组织内CD3-CD56+CD16+NK细胞比例升高、而CD3-CD56+CD16-NK细胞比例降低时不利于胚胎发育及妊娠的维持，导致孕妇妊娠早期发生流产[9-10]。E2主要由孕妇的黄体以及胎盘分泌，可以反映孕妇胎盘的生理状态与发育状态。正常早期妊娠孕妇黄体以及胎盘分泌良好，E2水平较高，若黄体和胎盘受到外界影响，E2水平降低可影响胚胎发育，最终导致流产[11]。而P是妊娠早期重要的监测指标，可用于反映早孕期胚胎的发育情况，其血中P水平降低可能导致子宫平滑肌纤维收缩，血供不足，影响胚胎发育而出现流产[12]。本研究结果显示，早期自然流产的孕妇外周血E2和P水平均明显低于正常早期妊娠的孕妇，且与蜕膜组织内CD3-CD56+CD16+NK细胞比例均呈负相关，与CD3-CD56+CD16-NK细胞比例均呈正相关，说明蜕膜组织内NK细胞比例失调可通过损伤胎盘等组织影响孕妇E2和P的表达。

综上所述，早期自然流产孕妇较正常早期妊娠孕妇蜕膜组织中CD3-CD56+CD16-NK细胞比例降低，而CD3-CD56+CD16+NK细胞比例升高，早孕期蜕膜组织NK细胞亚群比例失衡可影响E2和P的分泌，可能是导致早期流产的重要原因。