气相色谱法测定沃柑中毒死蜱丙溴磷和三唑磷残留的前处理方法研究

陆燕 黎施展 石杰东 义国通 农时锋 汤薇

摘要：分别采用《NY/T761-2008蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定法》和QuEChERS方法对沃柑样品进行前处理，采用气相色谱法测定样品中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷残留量。通过分析2种前处理方法的试验效果，建立更适合沃柑的农残检测快速有效的方法。试验结果表明：QuEChERS方法测定毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的检出限为0.002mg·kg-1，回收率在72.9%～91.3%，相对标准偏差（RSD，n=6）为1.4%～11.1%，完全符合检测要求，且QuEChERS前处理方法所用的样品处理时间、试剂用量和废液量均较少，所以该方法可适用于气相色谱法检测沃柑中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷残留。

关键词：QuEChERS;毒死蜱;丙溴磷;三唑磷;气相色谱;农药残留

中图分类号：S-3文献标识码：ADOI：10.19754/j.nyyjs.20200815007

收稿日期：2020-07-08

作者简介：陆燕（1982-），女，本科，农艺师。研究方向：农产品质量安全检测;通讯作者黎施展（1981-），女，本科，高级工程师。研究方向：农产品质量安全检测。

沃柑是以色列研发的柑橘新品种，因具有树势强健、熟期晚、采收期长、果实外观漂亮且低酸高糖、脆嫩多汁等特点，同时能够弥补我国晚熟柑橘类比例少的空间，近年来深受果农的青睐。从2012年开始，广西自治区农业农村厅實施优果工程和特色果业提升工程，将沃柑引入试种，到2019年，广西的沃柑种植面积已达13.33万hm2。随着种植面积的不断扩大，对沃柑病虫害的防治尤为重要。沃柑常见的病虫害有黄龙病、溃疡病、红蜘蛛、蚜虫、介壳虫等，虫害的发生往往成为病害传播的媒介，因此在沃柑种植过程中，会多次喷施杀虫剂预防病虫害的发生。在监测中发现，沃柑检出率最高的是毒死蜱、丙溴磷和三唑磷这3种广谱性杀虫剂。

目前，我国农产品检测机构对毒死蜱、丙溴磷和三唑磷残留的检测多采用《NY/T761-2008蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定法》[1]进行前处理和使用气相色谱仪进行定性和定量地检测，本文简称A法。该方法存在耗时较长，消耗的有机试剂和排放的废液多，对检测人员身体产生的危害较大等缺点[2]。2003年美国农业部针对蔬菜水果的农残检测开发了QuEChERS方法—快速样品前处理技术，本文简称B法。该方法具有操作简单、快速有效、稳定安全的特点，适用于种植业类农药残留的检测[3-9]。QuEChERS方法自问世以来，引起了广泛关注，科研工作者对该方法进行不断改进，使其成为农药残留检测的首选前处理方法[10] 。本文旨在研究QuEChERS前处理方法应用于气相色谱仪来测定沃柑中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷残留的可靠性，以期开发出快速有效的沃柑农残检测方法。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1样品制备

将3kg沃柑按四分法缩分后，全果放入搅拌机捣碎成匀浆状态备用。

1.1.2主要仪器设备

7890B气相色谱仪（美国Agilent公司），L530离心机（湖南湘仪公司），（H1650-W）离心机（湖南湘仪公司），T25高速分散机（德国IKA公司），VORTEX-GENIE2漩涡混匀器（美国SI公司），TE421-L天平（赛多利斯科学仪器公司）、EH20D电热板（北京莱伯泰科公司）、飞利浦搅拌机。

1.1.3试剂

毒死蜱、丙溴磷、三唑磷农药标准溶液（100mg·L-1），购于天津阿尔塔科技有限公司;QuEChERS萃取试剂包和净化管（PSA 50mg、PC 50mg、C18 50mg、MgSO4 150mg）均为美国Agilent公司生产;氯化钠（分析纯）、乙腈、丙酮为美国TEDIA公司色谱纯试剂。

1.2方法

1.2.1标准溶液的配制

100mg·L-1的毒死蜱、丙溴磷、三唑磷标准溶液，用丙酮配制成10mg·L-1混合标准储备液，测定时，再用基质液配制成0.02mg·L-1、0.04mg·L-1、0.08mg·L-1、0.32mg·L-1、0.64mg·L-1的标准工作液。

1.2.2试验设置

分别设置一个空白样和0.04mg·kg-1、0.08mg·kg-1、0.4mg·kg-13个添加浓度水平，每个水平重复6次。

1.2.3样品前处理

A法前处理：准确称取25.00g沃柑匀浆样品于锥形瓶中，加入50.0mL乙腈，匀浆机高速匀浆2min后滤纸过滤，滤液收集到装有6g氯化钠的100mL具塞量筒中，盖上塞子，剧烈震荡1min后，静置30min，吸取上清液10.00mL放入150mL烧杯中，80℃电热板加热，蒸发近干，加入2.0mL丙酮，后转移至15mL刻度离心管丙酮定容5.0mL，在漩涡混合器上混匀，0.22μm滤膜过滤后装瓶待测。

B法前处理：准确称取15.00g沃柑匀浆样品于50mL塑料离心管中，加入15.0mL乙腈、QuEChERS萃取试剂包和均质子，振荡1min后5000r·min-1离心5min。取1.5mL上清液至净化管，振荡混匀后10000r·min-1离心5min，0.22μm滤膜过滤后装瓶待测。

1.2.4仪器条件

色谱柱：DB-17（30m×530μm×1.5μm）;进样口温度：220℃;初始温度150℃，保持2min，以8℃·min-1的速率升至250℃，保持12min;载气：氮气（≥99.999%），流速：10mL·min-1;燃气：氢气（≥99.999%），流速：75mL·min-1;助燃气：空气，流速：100mL·min-1;检测器温度：250℃;尾吹气流量：60 mL·min-1;进样量1.0μL。

1.2.5计算

准确称取样品，分别用A法和B法前处理后上机测定，计算出检出限（LOD）、农药残留回收率和相对标准偏差（RSD）。

根据GB/T 5009.1-2003食品卫生检验方法理化部分总则中对于色谱法检出限的定义，色谱仪最低响应值为S=3N （N为仪器噪音水平），则检出限按公式进行计算：

检出限=S/b

式中，S为仪器噪音的3倍，即仪器能分辨的最小物质信号;b为标准曲线回归方程中的斜率。

农药残留回收率的计算：

式中，P为回收率（%）;C为测定的质量分数（mg·kg-1）;A为样品中所含该农药残留的质量分数（mg·kg-1）;B为添加的标准溶液的质量分数（mg·kg-1）。

精密度（RSD）的计算方法：

式中，SD为n次测量标准偏差（mg·kg-1）;Xi为第i次测量的测量值（mg·kg-1）;x-为n次测量的算术平均值（mg·kg-1）;n为测量次数。

2结果与分析

2.1前处理消耗情况

按照1.2.2试验设置，每个前处理方法共处理19个样品。对2种前处理方法所消耗的时间、试剂和产生的废液量进行比较，见表1。对比发现，B法即QuEChERS前处理方法的样品处理用时较少、试剂用量和废液量均大大少于A法，在消耗优于A法。

2.2线性范围和检出限

将混合标准储备液用基质液稀释，配制成0.02mg·L-1、0.04mg·L-1、0.08mg·L-1、0.32mg·L-1、0.64mg·L-1标准溶液，分别绘制质量浓度（X轴）与峰面积（Y轴）的标准曲线。根据色谱仪最低响应值为S=3N （N为仪器噪音水平）和标准曲线回归方程中斜率的比值，计算检出限（LOD）。结果表明，A、B2种前处理方法在0.04～0.40mg·L-1浓度范围内毒死蜱、丙溴磷和三唑磷线性关系良好，相关系数（r）均大于0.999，检出限均为0.002mg·kg-1，均能够满足测定水果中农药残留限量标准的要求[11]，见表2。

2.3回收率和精密度

称取沃柑匀浆样品，分别添加3个不同浓度水平（0.04mg·kg-1、0.08mg·kg-1、0.4mg·kg-1）的3种农药（毒死蜱、丙溴磷、三唑磷）的混合标准溶液，按A和B方法进行前处理，每个水平做6次重复试验，计算各添加水平的回收率和精密度，结果见表3。由表3可知，在3个添加水平下，A法测定3种农药的平均回收率在100%～127.5%，相对标准偏差（RSD，n=6）为3.0%～11.8%;B法测定3种农药的平均回收率在72.9%～91.3%，相对标准偏差（RSD，n=6）为1.4%～11.1%，2种前处理方法测定的准确度和精密度均能达到多农残检测方法的要求。

3结论

本试验通过对沃柑样品分别进行《NY/T761-2008蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定法》和QuEChERS法前处理，分析样品中毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的残留回收率、方法检出限、精密度，验证QuEChERS前处理方法对气相色谱法测定农药残留的可靠性。试验结果表明，采用QuEChERS方法处理的沃柑样品，经气相色谱仪测定，毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的检出限为0.002mg·kg-1，回收率在72.9%～91.3%，相对标准偏差（RSD，n=6）为1.4%～11.1%，完全符合农残检测的要求。通过本研究，建立了QuEChERS前处理方法结合气相色谱仪测定的方法，可用于沃柑中的毒死蜱、丙溴磷和三唑磷的残留检测。该方法快速有效，大大提高了检测效率，在沃柑大量上市时，能缩短检测时间，及时供应市场。

参考文献

[1] NY/T761-2008，蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法[S].

[2]曾艳，李霞雪，王任佑.有机氯农药残留检测的快速样品前处理效果研究[J].分析测试技术与仪器，2016，22（03）：152-158.

[3]NY/T 1380-2007，蔬菜水果中51种农药多残留的测定气相色谱-质谱法[S].

[4]Diez C，Traag W A，Zommer P，et al. Comparison of an acetonitrile extraction/ partitioning and “dispersive solid-phaseextraction”method with classical multi-residue methods for the extraction of herbicide residues in barley samples[J].Journal of Chromatography A， 2006（1131）： 11-23.

[5]沈菁，程運斌，刘军，等.分散固相萃取-高效液相色谱-质谱联用法测定大米中的呋喃丹残留[J].现代科学仪器，2008（2）：64-66.

[6]Aguilera-Luiz M M，Jose Luis Martinez Vidal，Roberto Romero-Gonzalez，et al. Multi -residue determination of veterinary drugs in milk taiaoby ultra-high-pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2008（1205）：10-16.

[7]Tomas Cajka，Jana Hajslova，Ondrej Lacina，et al.Rapid analysis of multi plepesticide residues in fruit-based baby food using programmed tempera-ture vaporizer injection-Lowpressure gas chromatography-high-resolution time-of-flight mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2008（1186）：281-294.

[8]董静，宫小明，张立，等.QuEChERS 高效液相色谱法同时检测动物组织中的克球酚、地克珠利和磺胺类药物残留量[J].中国卫生检验杂志，2008，18（01） ： 26-29.

[9]郑文慧，叶江雷，王秀彬，等.分散固相萃取法在农药残留检测中应用的进展[J].分析仪器，2011（04） ：23-27.

[10]王婧.QuEChERS前处理方法在农药残留检测中的应用[J].山西农业科学，2017，45（12）：2051-2055.

[11]GB 2763-2016，食品中农药最大残留限量[S]. 北京：中国标准出版社，2016.

（责任编辑周康）