原发性胆汁性胆管炎患者基质细胞衍生因子1的表达及临床意义

朱维健

【摘 要】目的 通过检测血清基质细胞衍生因子1（SDF-1）在原发性胆汁性胆管炎（PBC）患者中的表达，探讨其在PBC诊断中的临床意义。材料与方法 收集2017年1月至2019年6月在上海长征医院就诊的60名PBC患者作为疾病组，慢性乙肝肝硬化患者32例作为疾病对照组以及同期健康查体的30名表观健康者作为对照组。采用电化学发光免疫分析技术测定各组血清中SDF-1浓度，分析其在各组表达差异。结果 PBC患者血清SDF-1含量[1186.96（1002.05—1471.33）pg/mL]明显高于慢性乙肝肝硬化患者[740.69（600.30-1239.27）pg/mL]和正常人群[738.44（687.65—879.33）pg/mL]（P<0.001）。乙肝肝硬化組和对照组间差异无统计学意义（P>0.05）。SDF-1在不同病理分期的PBC患者的表达差异无统计学意义（P>0.05）。ROC曲线显示SDF-1诊断PBC的曲线下面积为0.861（P<0.01）。结论：PBC患者血清SDF-1水平明显增高，可能成为PBC筛查和诊断的潜在生物标志物，但与疾病进展无关。

【关键词】：原发性胆汁性胆管炎;基质细胞衍生因子1;检测;临床意义

Expression and clinical significance of serum stromal cell-derived factor-1 in patients with primary biliary cholangitis

Abstract  Objective  To measure the level of stromal cell-derived factor-1 in the sera of patients with primary biliary cholangitis， and to explore the clinical significance of SDF-1 in PBC.  Method  A total of 60 PBC patients， 32 age- and sex-matched patients with chronic hepatitis B （CHB） and 30 age- and sex-matched healthy controls （HC） were recruited from January 2017 to June 2019. The concentration of SDF-1was measured by electrochemiluminescence assay and analyzed in different groups.  Results  The results showed significantly higher median level of serum SDF-1 [1186.96 （1002.05–1471.33） pg/mL] in PBC patients than those with CHB [740.69（600.30–1239.27 ）pg/mL]and healthy controls [738.44（687.65–879.33） pg/mL） （P < 0.001）. There was no significant difference between CHB patients and controls （P>0.05）. There was no significant difference for serum SDF-1 among different histological stages（P>0.05）. ROC curve showed good diagnostic performance of serum SDF-1 for PBC ，with the AUC of 0.861（P<0.01）.  Conclusion  Serum SDF-1 was increased and may be a potential diagnostic marker for PBC. However， it may not be associated with the progression of PBC.

Key Words primary biliary cholangitis ， stromal cell-derived factor-1， detection， clinical significance.

【中图分类号】R543【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2020）06-18--01

原发性胆汁性胆管炎（Primary biliary cholangitis，PBC）是一种以肝内胆管上皮细胞损伤为主要特征的自身免疫性肝病，病因和发病机制未明，以中老年女性发病为主。抗线粒体抗体（AMA）阳性是该病主要的血清学诊断指标，PBC有一个重要的病理学特征是受损胆管细胞周围有大量的炎性细胞的浸润，而基质细胞衍生因子1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）又称趋化因子CXCL12，对淋巴细胞和单核细胞有较强的趋化作用。因此，本研究旨在通过检测PBC患者血清SDF-1的表达水平，探讨其对PBC的诊断价值及与炎症和纤维化程度的相关性。

1 对象和方法

1.1 研究对象  收集2017年1月至2019年6月在上海长征医院就诊的PBC患者60例，男6例，女54例，年龄58±10岁，临床诊断符合《美国肝病协会PBC诊断标准》[1]，即入组PBC患者应至少存在以下三种表现的两种以上：（1）临床生化指标异常，主要以碱性磷酸酶（ALP）、IgM球蛋白以及γ-谷氨酰转肽酶（GGT）升高为主;（2）免疫学标记物阳性，主要包括抗线粒体抗体（或抗线粒体抗体M2型）、抗gp120和抗sp100等抗体阳性;（3）组织病理学依据：由于抗线粒体抗体对于PBC具有高度特异性，因此肝脏病理对于PBC诊断并非必须。但对于AMA阴性患者或部分重叠综合征患者而言具有重要诊断价值，而且病理结果对于疾病进程判断更为客观。

收集32例性別年龄匹配的慢性乙肝肝硬化患者作为疾病对照组，男3例，女29例，年龄55±12岁，诊断符合《慢性乙肝肝硬化诊断标准》[2];收集同期进行健康体检的30名表观健康者作为对照组，男3例，女27例，年龄56±13岁。疾病组未经免疫抑制剂治疗，且排除原发性硬化性胆管炎，自身免疫性肝炎，其他胆管损伤性疾病;对照组无血液系统疾病、糖尿病、急性感染等其他系统相关性疾病。本研究经长征医院伦理委员会审核批准。

1.2 研究方法  所有患者和健康对照组均在入院或体检当天采集外周静脉血，3500rpm，离心10分钟，收集血清置于无菌EP管，冷冻保存于-80℃冰箱待测。

1.3 SDF-1检测  采用电化学发光免疫分析试剂盒（美国Meso Scale Discovery 公司）进行标本检测，操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.4 病理分期  采用Scheuer标准[3]将PBC按严重程度分为四期。一期是炎性细胞在局部胆管周围浸润。二期是炎症影响肝实质细胞，部分胆管消失。三期是形成纤维隔膜。四期是肝硬化。

1.5 统计学分析  采用SPSS 17.0软件进行数据分析。不符合正态分布的数据采用四分位距（IQR） 和范围表示，多组的比较采用Kruskal-Wallis H检验，两组间的比较采用非参数Mann-Whitney U检验。以1-特异度为横坐标，敏感度为纵坐标绘制ROC曲线，以曲线下面积评估SDF-1对PBC的诊断价值。以尤登指数最高值为诊断临界点确定诊断敏感性和特异性。以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清SDF-1水平  60例PBC患者血清SDF-1浓度[1186.96（1002.05—1471.33）pg/mL]明显高于慢性乙肝肝硬化患者[740.69（600.30-1239.27）pg/mL]和正常人群[738.44（687.65—879.33）pg/mL]（P<0.001）。慢性乙肝肝硬化组与对照组间比较差异无统计学意义（P=0.526），见图1所示。

2.2 不同病理分期的PBC患者血清SDF-1水平  60例PBC患者中，13例I期患者SDF-1含量[1092.92（963.38，1419.38）pg/mL]和11例II期患者SDF-1含量[1096.96（1003.79，1218.36）pg/mL]低于III期患者[1377.56（1174.60，1594.63）pg/mL]，但差异无统计学意义（P>0.05），见表1所示。

2.3 SDF-1对PBC的诊断价值  SDF-1对PBC诊断的ROC曲线下面积为0.861 （95%CI为0.792–0.930，P<0.001）。以尤登指数最高值（930.56 pg/mL）为诊断临界点时，诊断敏感性为86.7%，特异性为82.3%，见图2所示。

3 讨论

原发性胆汁性胆管炎（PBC）是一种以肝内胆管上皮细胞损伤为主要特征的自身免疫性肝病。早期病理学特征是受损胆管周围有大量炎性细胞浸润[4]。已有研究表明趋化因子及其信号通路在PBC发病机制中起着非常重要的作用。

基质细胞衍生因子1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1） 也称趋化因子配体12（Chemokine（C-X-C motif） ligand 12，CXCL-12），是CXC趋化因子家族的成员之一，是介导干细胞归巢最重要的趋化因子之一。SDF-1与受体CXC趋化因子受体4（CXC chemokine receptor 4，CXCR4）结合后形成的SDF-1/CXCR4信号轴在炎症反应、细胞归巢、肿瘤转移、血管生成和组织再生等生理病理过程中发挥重要作用[5]，但在PBC中的作用尚鲜有文献报道。

在肝脏微环境中，肝血窦内皮细胞、肝星形细胞和胆管上皮细胞均能分泌SDF-1，引起急性和慢性肝损伤，组织再生和纤维化进展[6-7]。研究还发现在SDF-1阳性的胆管周围有大量CD4+、CD8+T细胞和B淋巴细胞的浸润。而且90%的淋巴细胞CXCR4阳性，表明SDF-1/CXCR4信号通路在肝脏淋巴细胞浸润和归巢中发挥重要作用。我们的研究发现PBC患者血清SDF-1水平明显升高，且对PBC诊断的ROC曲线下面积为0.861 （P<0.001）。取最佳临界值时，诊断敏感性为86.7%，特异性为82.3%，因此对PBC有较好的诊断价值，但与PBC的病理分期无明显相关性，推测SDF-1可能有助于淋巴细胞在肝内胆管中聚集，诱导PBC发病，但与疾病严重度和纤维化无关。其具体机制有待进一步阐明。由于本研究纳入标本例数偏少，研究结论仅有初步提示作用，尚需进一步扩大样本量确证。

本研究采用MSD技术是利用专利的SULFO-TAG标记，在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，是电化学和化学发光两个过程的完美结合，操作简单，将传统ELISA技术的线性范围提高2-3个数量级，灵敏度提高10-100倍，重复性高，基质效应小，是一种值得推广的免疫分析技术。

综上所述，血清SDF-1在PBC患者表达升高，且对PBC有较好的诊断价值，为PBC发病机制的研究提供新的思路，亦可作为PBC诊断和筛查的潜在标志物。

参考文献

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中华医学会肝病学分会 ，中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南.中华肝脏病杂志，2005，13（12）：881—891.

Scheuer P.Primary biliary cirrhosis， Proc. R. Soc. Med. 1967，60 （12）：1257–1260.

Carey E.J， Ali A.H， Lindor K.D.Primary biliary cirrhosis.Lancet，2015，386：1565–1575.

吴周玲，白什尔，班桂飞等。基质细胞衍生因子 1 与其 G 蛋白偶联受体 （CXCR4） 信号轴相关生物学特性。中国组织工程研究，2019;23（9）：1434-1440.

Marra F，Tacke F.Roles for chemokines in liver disease， Gastroenterology，2014， 147 （3）：577–594.

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