桑芎胶囊定性定量分析研究

梁海月,刘涛

(1.烟台市食品药品检验检测中心，山东 烟台264000；2.滨州医学院烟台附属医院，山东 烟台 264000)

桑芎胶囊由桑白皮、川芎、白芷、黄芩、黄连等12味中药材组成，是依据传统中医理论，有多年临床基础的医院制剂。烟台市某中医医院在多年临床基础上依据传统中医理论研制而成的中药复方制剂，具有疏风活血，清热燥湿，化痰散结之功效，主要用于治疗寻常型痤疮、胃肠湿热症、症见颜面、胸背皮肤油腻、丘疹色红、痒痛，并且伴有口臭、溲黄、大便秘结、舌质红等症。现行质量标准鉴别项下只对黄连、栀子、甘草三味药材进行了鉴别控制，且无含量测定项。本文在查阅了方中桑白皮、黄芩、白芷等药材的化学及物理特性后[1-4]，增加了对桑白皮、黄芩的薄层色谱(TLC)鉴别试验，并且对白芷中欧前胡素的含量进行了测定，以期为桑芎胶囊质量标准的提高和完善提供相关参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津 LC-20A高效液相色谱仪；梅特勒AB265-S电子分析天平；济宁市奥波超声电气有限公司生产的JAC-500型数控超声波清洗机(功率500 W，频率40 Hz)；密理博超纯水仪。

1.2 试药 桑白皮(批号：121124-200805)、黄芩(批号：120955-201307)、黄芩苷(批号：110715-201117)、欧前胡素(批号：110826-200511)等对照品与对照药材均购自中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯(美国Tedia公司)；水为超纯水，其余试剂均为分析纯；桑芎胶囊(烟台天正药业，批号：180001、180002、180003、180004、180005、180006)；阴性样品为实验室自制。

2 薄层鉴别

2.1 桑白皮薄层鉴别 取本品内容物适量，研细，取粉末3 g置具塞锥形瓶，加饱和碳酸氢钠溶液25 mL浸泡24 h，超声10 min，滤过，取滤液加稀盐酸调节pH值至2，静置后滤过，滤液用20 mL乙酸乙酯分两次提取，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[5]。另取桑白皮对照药材1 g及缺桑白皮对照药材的阴性样品3 g，同法制成对照药材溶液及桑白皮阴性对照溶液。取上述制备液于同一色谱板展开，结果见图1。

2.2 黄芩薄层鉴别 取本品适量，研细，取粉末3 g置具塞锥形瓶，加50%乙醇30 mL超声15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取两次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液[6-7]。另取黄芩对照药材1 g及缺黄芩药材的阴性样品3 g，同法制成对照药材溶液及黄芩阴性对照溶液。再取黄芩苷对照品加甲醇制成每1 mL含1 mg溶液，作为对照品溶液。取上述制备液于同一色谱板展开，结果见图2。

3 欧前胡素含量测定

3.1 色谱条件 色谱柱：Agilent XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈(A)-水(B)梯度洗脱；流速为1.0 mL·min-1；柱温为30 ℃；检测波长为250 nm[8]。理论塔板数按照欧前胡素峰计算应不低于3 000。梯度洗脱条件见表1。

表1 梯度洗脱条件

3.2 溶液的制备

3.2.1 对照品溶液的制备 取欧前胡素19.36 mg置100 mL量瓶中，加适量甲醇超声使溶解，放冷后定容，取上述溶液5 mL至50 mL容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1 mL含欧前胡素19.36 μg的对照品混合溶液。

3.2.2 供试品溶液的制备 本品内容物置研钵中研细，取约2.7 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声30 min(功率500 W，频率40 Hz)，放至室温，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得[5]。

3.2.3 阴性供试品溶液的制备 按照处方和工艺要求制备缺白芷的阴性样品，按照“3.2.2”项下方法制备缺少白芷的阴性供试品溶液。

3.3 方法学考察

3.3.1 专属性考察 精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各10 μL，按照“3.1”项下色谱条件进行测定，结果显示，供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上，有相同的吸收峰，而缺白芷供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，则未见明显色谱峰出现，阴性无明显干扰(见图3～5)。

3.3.2 线性范围考察 取对照品溶液(欧前胡素19.36 μg·mL-1)2、5、10、20、40 μL，按照上述试验条件测定，以欧前胡素进样量为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y),进行线性回归。结果表明，在此进样量范围内，欧前胡素呈良好的线性关系，结果见表2。

表2 线性范围考察

3.3.3 精密度考察 吸取“3.2”项下所制备的对照品溶液10 μL，按照“3.1”项下色谱条件连续进样5次，测定，以欧前胡素峰面积进行计算，RSD为0.4%，符合含量测定要求。

3.3.4 稳定性考察 吸取“3.2”项下对照品溶液10 μL，分别于0、1、3、5、8、12 h进行测定，计算欧前胡素峰面积，RSD为0.6%(n=6)，表明在该试验条件下样品的稳定性符合要求。

3.3.5 加样回收试验 取已知欧前胡素含量的桑芎胶囊(批号:180001)9份，分为3组，分别加入对照品溶液(欧前胡素0.512 mg·mL-1)1、2、3 mL，按照“3.2”项下方法制备供试品溶液，按“3.1”项下色谱条件进行测定，回收率符合要求，结果见表3。

表3 加样回收试验结果

3.3.6 样品的测定 取不同批次的白芷及其余十一味药材制备的6批桑芎胶囊，批号分别为180001、180002、180003、180004、180005、180006，按照“3.2”项下方法制备供试品溶液，照上述试验条件进行试验，结果见表4。

表4 样品含量测定结果

根据桑芎胶囊制法可知，每克胶囊内容物实际相当于所含0.35 g白芷药材，上述试验结果表明，在桑芎胶囊的制备过程中，欧前胡素的转移率均超过80%，按照《中国药典》2015年版欧前胡素含量不低于0.080%计算，故将0.46 g/粒的欧前胡素的含量规定为不低于0.10 mg/粒。

4 讨论与结果

4.1 桑白皮及黄芩鉴别条件的选择

4.1.1 桑白皮 桑芎胶囊是由方中十二味药材经水煎煮浓缩后的浸膏制备而成，故桑白皮鉴别供试品的制备参照《中国药典》中桑白皮的提取方法进行，试验过程中分别用聚酰胺薄膜板(药典展开方法)和MERK板(本文展开方法)进行展开。结果发现，聚酰胺薄层板展开后，桑白皮阴性样品及桑芎胶囊样品有拖尾现象，展开效果欠佳，故选择了MERK板进行展开。

4.1.2 黄芩 经查阅文献[6]得知，桑芎胶囊的制备过程中，黄芩的提取方法与小柴胡片中黄芩的提取方法类似，采用小柴胡片中黄芩的鉴别和展开条件进行试验，试验结果符合薄层鉴别的要求，故选用本试验中的鉴别方法。

4.2 含量测定条件的选择

4.2.1 提取溶剂的选择 本文分别用超声30 min考察了甲醇、乙醇、70%乙醇[7]3种提取溶剂，发现甲醇基本能将欧前胡素提取完全，并且液相图谱相对杂质峰较少，故选择甲醇作为提取溶剂。

4.2.2 提取方法及时间的选择 本文用甲醇做提取溶剂，分别超声20、30、45 min以及回流30、60 min，结果发现超声30、60 min与回流45 min提取效果相差不大，考虑到操作简单等因素故将提取方法确定为甲醇为溶剂超声处理30 min。

4.3 本试验研究所采用的方法能够准确地对处方中桑白皮、黄芩进行定性分析，对处方白芷中所含欧前胡素能够准确进行定量，并且本试验所采用的方法稳定性较好，抗干扰性较强，能够为桑芎胶囊标准的提高提供试验依据。