新疆博州部分地方羊泰勒虫病流行病学调查

宁东坡，张杨，肖培培，李敏，樊新丽，巴音查汗*

(1.新疆农业大学动物医学学院，新疆 乌鲁木齐 830052；2.兵团第五师八十一团农业发展服务中心，新疆 博乐市 833400)

羊泰勒虫病(Ovine and caprine theileriosis)是由泰勒科泰勒属(Theileria)的原虫寄居在绵羊及山羊的红细胞及淋巴细胞等细胞内，并引发动物出现高热、出血、淋巴结肿胀及消瘦为主要病症的疾病[1]，该病多呈急性经过。该病在亚洲、非洲和中东地区的传播较为广泛，主要通过中间宿主蜱传播，故其暴发和流行与媒介蜱的活动密切相关。目前，共有6种羊泰勒虫在国内外流行，包括绵羊泰勒虫(T.ovis)、吕氏泰勒虫(T.luwenshuni)、尤氏泰勒虫(T.uilenbergi)、莱氏泰勒虫(Theilerialestoquardi)、隐藏泰勒虫(T.recondita)和分离泰虫(T.separata)[2-4]，而我国报道的多为绵羊、尤氏及吕氏泰勒虫感染[5-7]。自1958年我国首次在四川省发现该病后，随后在青海、甘肃、陕西、内蒙古等地均有发现[8，9]；新疆的喀什、伊犁、阿克苏、阿勒泰、巴州等地也均有发现[10-12]。

作为中国重要的羊产业养殖区，新疆的存栏数在我国居于前列，而新疆的复杂地貌使得媒介蜱种类及分布较为广泛。本研究对新疆博尔塔拉蒙古自治州(简称博州)部分地区血液源性及蜱源性羊泰勒虫的感染情况进行了调查，以期为新疆羊泰勒虫病采取有针对性的防控措施提供部分参数。

1 试验材料

1.1 样本来源

2016—2019年，在博州地区的81团、85团、88团、90团、乌图布拉格镇、精河县及温泉县采集绵羊(N=907)和山羊(N=613)血液及羊体表的蜱虫(N=1 088)，共计采集血液1 520份、蜱虫1 088只。血液样品保存于EDTA抗凝管，-20℃储存；蜱保存于采集管(提前在管盖扎洞，并用纱布包裹管盖，防止成蜱产卵掉落外界)中，标注采集地点与采集时间，记录后保存于实验室，待鉴定。

DNA Marker购自 TaKaRa 公司，2×Eco Taq PCR SuperMix购自北京全式金生物技术有限公司，DNA提取试剂盒及DNA胶回收试剂盒购自天根生化科技有限公司。

1.2 DNA提取

将蜱虫研磨后进行DNA提取，血液样品直接进行DNA提取，-20 ℃保存，备用。

1.3 绵羊泰勒虫的PCR扩增

PCR参照Allsopp等[7,13-15]扩增18S rRNA目的片段；对提取的总DNA先进行泰勒虫18S rRNA扩增(TE18S-F：5′-AGTTTCTGACCTATCAG-3′；TE18S-R：5′-TTGCCTTAAACTTCCTTG-3′；1 033 bp；53.8℃)，对扩增为阳性的样品再次进行吕氏(T1-F：5′-GGTAGGGTATTGGCCTACTGA-3′；T1-R：5′-TCATCCGGATAATACAAGT-3′；380 bp；51℃)、尤氏(T2-F：5′-GGTAGGGTATTGGCCTACCGG-3′；T2-R：5′-ACACTCGGAAAATGCAAGCA-3′；380 bp；55℃)及绵羊泰勒虫(T3-F：5′-TCGAGACCTTCGGGT-3′；T3-R：5′-TCCGGACATTGTAAAACAAA-3′；520 bp；53℃)18S rRNA 扩增鉴定。

PCR扩增体系为(退火温度不同)：95 ℃ 5 min、94 ℃ 30 s、(53.8 ℃、51 ℃、55 ℃、53 ℃)30 s、72 ℃ 1 min，35个循环；72 ℃ 10 min；PCR 产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测。

1.4 羊泰勒虫18S rRNA 基因测序与序列分析

将PCR扩增结果为阳性的产物进行基因目的片段纯化后送往上海生工进行测序，用NCBI提供的 BLAST 软件进行比对分析。

2 试验结果

2.1 羊泰勒虫病原PCR检测结果

共采集到绵羊(N=907)和山羊(N=613)的血液1 520份和1 088只蜱，采用羊泰勒虫通用引物扩增后，共有329份羊血和40只蜱组织DNA中PCR结果为阳性，目的片段大小约1 033 bp，符合预测值(图1)。特异性引物扩增后，只出现约520 bp的目的条带(图2)。测序结果用BLAST比对，发现蜱源性和血源性绵羊泰勒虫之间相似性为100%，与绵羊泰勒虫18S rRNA基因序列(GenBank登录号分别为：KT851435)的核苷酸相似性为98%(图3)，最终确认为绵羊泰勒虫。

M.DNA Marker 2000；1.阳性对照；2.阴性对照；3-4.蜱虫样品；5-7.血液样品。

M.DNA Marker 2000；1.蜱虫样品；2-3.血液样品；4.阴性对照；5.阳性对照。

图3 18S rRNA基因序列核苷酸相似性分析

2.2 不同地区羊泰勒虫病的检测结果

对新疆博州7个地区共1 520份血液检测显示，81团、85团、88团、90团、乌图布拉格镇、精河县及温泉县的绵羊泰勒虫感染率分别为25.82%(63/244)、24.59%(45/183)、24.66%(36/146)、19.85%(54/272)、26.15%(51/195)、20.18%(44/218)、13.74%(36/262)。对蜱虫体内携带绵羊泰勒虫检测结果的阳性率显示：85团、88团、90团、精河县及温泉县分别为4.39%(5/114)、5.71%(10/175)、2.21%(3/136)、7.69%(15/195)、4.22%(7/166)；而81团及乌图布拉格镇的蜱体内均未检测到羊泰勒虫。详情见表1。

表1 新疆部分地区羊泰勒虫病的调查结果

2.3 不同饲养方式羊泰勒虫病的检测结果

新疆博州7个地区共1 520份不同饲养方式的羊群血液样品感染结果表明：共计采集舍饲羊血液651份，阳性数为96份，感染率为14.75%；共计采集放牧羊血液869份，阳性数为233份，感染率为26.81%。放牧羊的感染率高于舍饲羊。

表2 新疆部分地区不同饲养方式羊泰勒虫病的调查结果

3 讨论与小结

博州位于我国新疆自治区准噶尔盆地西缘，属大陆性干旱半荒漠和荒漠气候，日照时间长，昼夜温差大，夏季高温，适宜蜱虫生长和繁殖，蜱虫叮咬羊群后致使动物长期处于带虫免疫状态，且根除困难[1]。

患羊泰勒虫病的动物治愈后出现生长迟缓、产奶量以及产肉量下降，对养殖业的发展产生非常不利的影响。当前，我国报道的羊泰勒虫主要为绵羊泰勒虫、尤氏泰勒虫及吕氏泰勒虫，新疆报道的羊泰勒虫病均为绵羊泰勒虫病[10-12,16]。本研究针对新疆博州地区的羊泰勒虫病感染分布情况进行了调查。据不完全调查显示，该区为羊泰勒虫病的流行地区，血液源性和蜱源性羊泰勒虫的感染率为21.64%(329/1 520)和3.68%(40/1 088)。但感染率低于之前报道的阿克苏(58%)、伊犁(93.2%)及阿勒泰地区(22.41%)[10，11]。本次PCR检测数据显示，该区感染的是绵羊泰勒虫，这和李佳、朱玉涛等[10,12]调查的结果一致。对于不同饲养方式的羊群进行调查发现，放牧羊(26.81%，233/869)的感染率明显高于舍饲羊(14.75%，96/651)。对于该现象的原因可能是放牧地区多为草原，草坪上的蜱虫较多，更易引发感染，而对于舍饲羊来说，环境卫生相对较好，经询问，大部分畜主一般会在春秋季节在舍内喷洒药物，故感染率比放牧羊低。

羊泰勒虫病的传播和流行具有显著的季节性与地区性，并和当地媒介蜱类的分布密切相关[17]。据报道，小亚璃眼蜱和森林革蜱是绵羊和山羊泰勒虫病的主要传播媒介[18]，是否存在其他传播媒介蜱，需要后期继续开展相关实验研究。

该病的防治工作重点是做好预防及早期诊断，在春秋季节，对羊体表及圈舍等可能接触病原的地方进行灭蜱工作，采集血液样品通过早期诊断筛选阳性病例并及时治疗，最大限度地减少牧民的经济损失。