一起猪瘟和沙门氏菌混合感染的诊治与防控

赵成龙，吴岩，冷静，姜春梅，2，崔起超，盖苗苗，梁晚枫*，赵少伟

(1.延边大学农学院动物医学系，吉林 延吉 133000； 2.吉林大学动物医学学院，吉林 长春 130062)

猪瘟(CSF)曾被称为猪霍乱(HC)，俗称“烂肠病”，是由猪瘟病毒(CSFV)所引起的猪急性热性全身败血性疾病，具有高度传染性，流行范围广。患病猪主要特征为食欲减退、呕吐、腹泻、体温升高、行动缓慢。猪为猪瘟病毒最主要的易感动物，各种年龄各种品种均可通过多种途径感染。猪瘟垂直传播会造成仔猪带毒持续传染，而且仔猪发病极为严重，被国家列为一类传染病，给我国养猪业造成严重的经济损失。沙门氏菌病(salmonellosis)又名副伤寒(paratyphoid),是沙门菌属细菌引起各种动物疾病的总称[1]。患病猪主要特征为体温升高、精神不振、寒战、喜钻垫草和腹泻。临床上主要表现为肠炎和败血症。猪、牛、羊、骆驼、禽等沙门氏菌的众多宿主中，猪对其具有较强的易感性。亚急性沙门氏菌病和慢性猪瘟有很多相似处，本病也可继发于猪瘟等疾病，故需注意加以区分。笔者所在团队于2019年6月12日在延边大学农学院动物医院接诊一起病例，经诊断确诊为猪瘟病毒和沙门氏菌混合感染，现将该病例的诊治与防控情况报道如下。

1 流行病学调查

吉林省延边朝鲜族自治州和龙市某养猪场有基础母猪400余头和育肥猪200余头，全进全出的养殖模式。经主人叙述该猪群育肥猪和生产母猪于2019年6月5日开始陆续发病，自行治疗无效后，于6月12日到延边大学农学院动物医院进行求助咨询。就诊前已发病57头，死亡22头。

2 临床症状

发病猪精神不振、行动缓慢、寒战、颤抖、喜钻垫草、厌食、呕吐等症状，同时伴有腹泻，很快消瘦；触诊体表淋巴结肿大；测量体温温度(40～42 ℃)高于正常值。

3 剖检病变

心脏衰竭，左心耳瘀血；肝脏肿大；脾脏边缘梗死、出血；肺脏水肿、间质增宽；肾脏皮质、髓质出血；肠系膜水肿、肠道水肿、小肠充血、出血；胸腔内脏器官与壁粘连呈胶胨状；回盲口溃疡。

4 实验室诊断

4.1 细菌学检测

4.1.1镜检

无菌条件下分别取病死猪的肝脏、脾脏制成涂片，干燥、固定，然后进行革兰氏法染色，呈阴性，短小杆菌，两端钝圆，无芽孢和荚膜，周身有鞭毛可运动。

4.1.2细菌分离纯化

无菌采集病猪心脏血液，划线接种于SS琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，在温箱37 ℃培养24 h。然后挑取可疑单个菌落进行纯培养，37 ℃震荡过夜。在SS琼脂培养基上可见边缘整齐、中间微凸、中心为黑色的圆形小菌落；在麦康凯琼脂培养基上可见灰白色、光滑湿润圆形小菌落。然后接种到沙门氏菌显色培养基上可见到紫色小菌落，故疑似沙门氏菌落。革兰氏染色钝化后的细菌镜检结果显示为革兰氏阴性，两头钝圆、单个或成对存在的短杆菌。

4.1.3细菌生化鉴定

参照孙娜等的方法[2]，挑取单个菌落接种于LB肉汤中，37 ℃培养16～18 h,用生理盐水将培养好的菌稀释到105CFU，取5～10 μL稀释好的菌液接种于葡萄糖、麦芽糖、乳糖、甘露醇、蔗糖、MR试验、靛基质试验、尿素、VP试验、枸橼酸盐、硫化氢试验生化反应管中37 ℃培养24 h后观察。结果为分离菌对葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、MR试验、枸橼酸盐和硫化氢试验表现为阳性；乳糖、蔗糖、尿素、靛基质试验和VP试验为阴性。其生化特性符合沙门氏菌特性。

4.1.4动物试验

将12只体况良好、年龄相近的小白鼠，随机均分为2组，对照组6只，试验组6只。试验组腹腔注射病猪血液、对照组注射等量生理盐水，每8 h观察一次并记录发病情况[3]。对照组小白鼠96 h内无明显发病迹象，试验组小白鼠注射72 h内出现死亡或发病迹象，临床症状表现为精神萎靡、皮毛松乱、腹泻和粪便有黏液。剖检试验组死亡小白鼠，病理变化表现为肺脏水肿、肝脾肿大出血。挑取病变器官直接进行涂片、染色、镜检，镜下菌形态特征符合沙门氏菌特性。

4.2 药敏试验

采用K-B纸片扩散法检测分离株进行药敏试验。无菌采集细菌纯培养产物，配置菌液。用无菌棉棒蘸取菌液均匀涂抹于SS琼脂培养基上，菌液量大约为0.3 mL，待菌液干燥后，用灭菌眼科镊将药敏纸片按顺序贴于培养基上，并轻轻按压药敏纸片使其与培养基表面密切贴合，没有缝隙。要注意药敏纸片与培养基边缘、药敏纸片与药敏纸片之间距离适当，以免抑菌环重叠。贴完后，在室温环境下静置15 min，翻转SS琼脂培养基放置在37 ℃恒温培养箱，培养24 h后，观察并测量结果，结果如表1所示。

表1 分离株的药敏试验结果

4.3 ELISA检测

试验利用ELISA法对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒(PCV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪蓝耳病毒(PRRSV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)分别进行检测。无菌采取3头病猪的血液，无菌分离血清，采用双抗原一步夹心法对目标抗体进行检测，设置阴、阳性对照孔和样本孔。孔中有事先包被好的特异性抗原。步骤如下：①阴性和阳性对照孔中分别加入阴性标准品、阳性标准品各50 μL，样本孔中加入待测血清10 μL,再添加40 μL样本稀释液；②各孔中依次加入检测抗原HRP 100 μL，孔口以封板膜密封，并迅速置于恒温培养箱中，37 ℃反应1 h；③取出检测板，反复洗板5次，并于定性滤纸上拍干孔内液体；④各孔中依次加入底物A、B各50 μL，37 ℃避光孵育15 min，随后迅速加入终止液50 μL,反应5～10 min；⑤将检测板置于酶标仪中，波长设置为450 nm，测定吸光度。所得样本OD值与CUT OFF值相比较。结果显示采集的3份血清样本中PCV、PRV、PEDV、PRRSV的抗体检测均呈阴性；CSFV检测样本的OD值分别为3.94、2.13和1.90，大于临界值0.45，抗体检测均呈阳性。

5 诊断结果

结合临床症状、病理剖检变化、流行病学特点和实验室诊断结果，确诊该猪群为猪瘟和沙门氏菌的混合感染。

6 治疗与防控

考虑到养殖场养殖规模较大，发病猪数目较多，注射用药会造成猪群应激反应，所以主要以口服的方式进行治疗。用药方案如下：全猪群使用“活力金维电解多维”口服(批号201401066，新乡华畜商贸有限公司生产)，用法为一袋2 kg兑水4 t，自由饮用，连用7～10 d；使用七清败毒散拌料口服(主要成分为黄芩、虎杖、白头翁、板蓝根等，批号为2016041215002，新乡华畜商贸有限公司生产)，用法为每10袋(规格为100 g/袋)混合饲料0.75 t,连用10 d；使用四味穿心莲拌料口服(主要成分为穿心莲、辣蓼、大青叶、葫芦茶等，批号为2016120042745，新乡华畜商贸有限公司生产)，用法为每袋(规格为500 g/袋)混合饲料1 t，连用10 d；使用阿莫西林口服(批号为161012859，新乡华畜商贸有限公司生产)，用法为每3袋(100 g/袋)混合饲料1 t，连用10 d；病情严重猪再皮下注射瘟杀注射液每千克体重5 mg(主要成分为头孢噻呋钠和黄芪多糖，批号为180272021，湖南省亚牧动物药业有限公司生产)。治疗期间先将病死猪无害化处理，将病猪与健康猪隔离,统一治疗，全群猪注射猪瘟疫苗，病猪根据体重大小注射4～8倍猪瘟疫苗。防控方面保持饲料与饮水的清洁与卫生；保持饲养环境卫生，粪便及时清理；外来人员全面消毒后进入厂区，做好场内灭鼠工作。治疗期间，新发病23头，死亡15头，其余猪病情得到控制。用药治疗后，猪场内共患病78头，治愈55头(治愈率70.51%)，死亡23头(病死率29.49%)。

7 讨论与体会

猪瘟具有高度接触传染性，流行范围广，在世界各地都有暴发，是猪病中危害最大、最受重视的疫病之一。近年来，随着养殖户对猪瘟防疫意识的增强，疫苗利用率上升，典型猪瘟已非常少见。病症非典型化、多地区散发性流行、病情复杂、混合感染多、妊娠母猪带毒已成为新的猪瘟发病特征。尤其猪瘟经常出现混合感染或者继发感染其他疾病，在临床上应全面考虑，特别是细菌性疾病，常常会增加猪瘟治疗的难度，正如本例中猪瘟与沙门氏菌的混合感染不但造成了治疗困难，而且也使病死率显著上升。在猪瘟的防控上，免疫程序应科学合理，可根据当地的具体情况加大免疫剂量，一旦出现猪瘟疫情即可进行紧急接种，以减少损失，控制疫情的扩散。防疫注射时做到无菌，避免医疗器械交叉使用[4]。沙门氏菌病在世界各地广泛流行，对动物繁殖和幼龄动物健康造成严重威胁，目前国内临床以混合感染病例居多，在治疗过程中，不可滥用抗生素，应根据药敏试验结果选择恰当的用药方案。在本例中，药敏试验结果显示该菌对头孢噻呋、阿米卡星和庆大霉素均有较高的敏感性，但是在治疗的过程中只选择头孢噻呋的原因是阿米卡星和庆大霉素同属氨基糖苷类药物，此类药物具有较强的肾毒性，病猪的剖检结果显示肾脏均具有不同程度的损伤，故选择头孢噻呋钠进行治疗。在今后的兽医临床中，选药用药不应只停留在试验结果表面，要有整体的观念，结合病例实际制定治疗方案。