一起猪伪狂犬病的诊断与分析

熊杰，蒲杨柳，张昕彤，陈富忠，潘媛晴，胡生富，魏春梅

(1.攀枝花市动物疫病预防控制中心，四川 攀枝花 617000；2.武陟县农业农村局，河南 武陟 454950)

猪伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)所引起的猪的急性、烈性和高度接触性传染病。该病能造成发病公猪出现睾丸炎；妊娠母猪流产，产死胎、弱胎和木乃伊胎；育肥猪呼吸困难、生长停滞；新生仔猪腹泻、呕吐和神经症状并大量死亡[1-3]。PRV属于疱疹病毒(Herpesviridae)、甲型疱疹病毒亚科的猪疱疹病毒Ⅰ型(Suid Herpesviridae Ⅰ)，是双链DNA病毒[4，5]。20世纪60—70年代出现强毒株并在全球散播[6]，2011年末，我国北方多个省份出现了伪狂犬病暴发，猪伪狂犬病病毒变异毒株开始在我国流行[7]。本文就2018年6月某养殖场新生仔猪发生伪狂犬病的发病情况、临床症状、病理变化、实验室诊断提出思考和分析。

1 发病情况及临床症状

攀枝花市某养猪场，饲养仔猪140余头，在兽医指导下已注射猪伪狂犬弱毒疫苗。2018年6月初，陆续有新生仔猪出现精神不振，体温升高，皮肤紫斑，部分出现惊叫、转圈等神经症状。发病后，对全场猪群进行抗生素和其他药物治疗，效果不佳，几天内仔猪死亡130余头。

2 剖检变化

对濒临死亡的仔猪进行解剖，发现心脏有少量出血点、瘀血，肾脏瘀血，肝脏瘀血、坏死，胃积奶块，脑、淋巴结、肠、膀胱、脾、肺等器官无实质性病变。

经过对临床症状和剖检变化分析，初步怀疑为PRV感染，现场采集心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、脑和血清，进行实验室荧光定量PCR检测。

3 实验室诊断

将现场采集的心、肝、脾、肺、肾等组织用组织研磨仪(宝予德，Easy Extract S型)进行组织匀浆后，8 000 r/min离心2 min，取上清液，在组织上清液和血清中加入消化液和蛋白酶K，56 ℃水浴消化1 h后采用吸附柱法提取DNA。将提取的DNA按照北京世纪元亨猪伪狂犬病毒(gE基因)实时荧光PCR检测试剂盒(生产批号：PRV(gE)20180208P)说明书进行PRV-gE检测。

结果：阳性对照Ct值≤30并出现特异性扩增曲线，阴性对照无CT值并且无特异性扩增曲线，实验结果成立；所有被检样品CT值≤30并出现特异性扩增曲线，表明所有样品PRV-gE荧光PCR检测结果为PRV-gE阳性(表1、图1)。

表1 阴、阳性对照及样品

图1 实时荧光定量PCR扩增曲线

4 讨论

杨汉春等对2018年全国420个猪场21 727份血清样本进行伪狂犬病病毒野毒感染gE抗体检测，结果显示gE抗体阳性猪场占78.33%，采用PCR方法对495份临床样本检测，结果表明伪狂犬病病毒阳性检出率为8.89%[8]；王赛赛牧通网数据显示，2019年检测了全国94个猪场共3 892份猪血清样品的猪伪狂犬病gE抗体，样品阳性率为26.4%[9]，表明近年我国部分猪场伪狂犬病病毒感染仍然比较严重。为了有效防控猪伪狂犬病，降低养殖场(户)的损失，基层兽医实验室必须快速、准确地进行实验室诊断。目前实验室诊断方法主要包括病毒分离鉴定、ELISA、核酸探针技术、PCR和实时荧光定量PCR等方法。由于实时荧光定量PCR方法用时短、特异性强、灵敏度高，是目前普遍采用的快速诊断方法。现在有多种类型的PRV检测试剂盒上市，其中有可同时完成猪圆环病毒、猪伪狂犬病毒等多种常见猪病病原检测的多重荧光定量RCR检测试剂盒，能极大缩减检测时间和增加检测范围，有效地提高了实验室检测效率。畜牧兽医主管部门应高度重视基层兽医实验室在动物疫病防控工作中的技术支撑作用，应加大兽医实验室的建设力度，提高实验室检测人员专业技术水平，进一步提升兽医实验室在动物疫病防控工作中的预警预报能力。