中药减肥降脂复方中黄酮提取方法的研究及含量测定

王娅玲　陶然　徐凯旋　李佳怿　王悦　宋兴爽　王婕　高世杰

摘      要：按照药典含量检测的相关规定，检测中药减肥降脂方中黄酮的含量并考察比色法的可靠性。采用了超声辅助乙醇回流法测定减肥降脂复方中黄酮的含量，所测曲线相关性良好，符合Lambert-Beer定律。减肥降脂复方中总黄酮质量分数为45.065 3 mg·g^-1，精密度的相对标准偏差为1.80%，重复性的相对标准偏差为1.50%，稳定性的相对标准偏差为0.44%，平均加标回收率的相对标准偏差为102.20%，表明比色法检测减肥降脂复方中的黄酮含量符合相关规定。

关  键  词：中药纤体;总黄酮;减肥降脂;含量测定;方法学研究

中图分类号：TQ464       文献标识码： A       文章编号： 1671-0460（2020）06-1114-04

Study on Determination of Flavonoids in Chinese Medicine Weight Loss and Lipid-lowering Compound

WANG Ya-ling， TAO Ran， XU Kai-xuan， LI Jia-yi， WANG Yue， SONG Xing-shuang， WANG Jie， GAO Shi-jie

（School of Pharmacy， Shandong University of Traditional Chinese Medicine， Jinan Shandong 250014， China）

Abstract： According to the relevant regulations of pharmacopoeia content detection， the content of flavonoids in weight-reducing and lipid-lowering prescriptions of traditional Chinese medicine was detected and the reliability of colorimetry was investigated. Ultrasonic-assisted ethanol reflux method was used to determine the content of flavonoids in weight-reducing and lipid-lowering compound. The measured curves have good correlation and conform to Lambert-Beer law. The content of total flavonoids in weight-reducing and lipid-lowering compound is 45.065 3 mg·g^-1， the relative standard deviation of precision is 1.80%， the relative standard deviation of repeatability is 1.50%， the relative standard deviation of stability is 0.44%， and the relative standard deviation of average standard addition recovery rate is 102.20%， which indicates that the content of flavonoids in weight-reducing and lipid-lowering compound detected by colorimetry conforms to relevant regulations.

Key words： Traditional Chinese medicine slimming; Flavonoids; Weight loss and lipid-lowering; Content determination; Methodological study

近年來肥胖症发病率不断升高^[1]，导致慢性疾病年轻化^[2]，新陈代谢负担增大^[3]，肥胖能增加癌症和慢性疾病的发病率^[4]。近年中医对肥胖病进行深入研究，研究发现中药药效缓和、整体调节，不良反应少，减肥效果较为理想，对开发新品减肥复方制剂具有重要意义。

减肥降脂复方以辩证论治为治疗法则，抑胃扶脾，调和阴阳，利痰化湿。此方为山东中医药大学王集会教授总结出的经验用方，具有调节代谢、减肥消脂的作用，其中黄酮类化合物能够清除人体自由基，其明显的降脂生理活性被普遍用于高血脂药物中^[5]。目前，关于黄酮含量测定、结构分析的研究很多，但对实验方法准确性考察较少，结合黄酮的多种提取方法，黄酮在乙醇中的溶解度最大，提取最为充分，因此本实验采用超声辅助乙醇回流的方法测定黄酮含量，并研究其测定方法的准确性^[6]，以期为提取分离黄酮类有机物和研究新型减肥降脂制剂提供实验依据。

1  实验

1.1  药品

药品由山东中医药大学制备粉碎。

1.2  试剂

芦丁标准品;氢氧化钠（AR）， 六水氯化铝（AR），亚硝酸钠（AR），无水乙醇（AR）[7]。

1.3  实验设备

UV9100B型紫外-可见分光光度计; 高速粉碎机; 恒温水浴锅[8]; 旋转蒸发仪; 远红外辐射干燥箱 [9] ; PH计; FA1004N电子天平。

2  实验测定

2.1  对照品标准曲线

精确称定芦丁标准品20.00 mg，配制60%的乙醇超声稀释，上下振摇至均匀，移入容量瓶，蒸馏水定容，即为0.20 mg·mL^-1的待测品溶液，放于冰箱中以防变质。

精密量取标准品溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，用移液枪加入试管中，先加配制的质量分数为30%乙醇溶液5 mL，再加质量分数为5% 的NaNO₂溶液300 μL，上下摇晃至均匀，放置6 min^[10];然后小心倒入质量分数为10%的六水氯化铝600 μL，上下摇晃至均匀后，静置5 min，最后加1.0 mol·L^-1的NaOH溶液2 mL^[11]，并用质量分数为30%的乙醇稀释至刻度。

2.2  回流制备待测品

准确称量1.000 0 g药品， 加30 mL 80%乙醇溶液调至比例为1∶30， 调为40 ℃水浴超声处理20 min， 通入冷水80 ℃回流2 h，离心，抽滤，向上清液加稀释为30%浓度的乙醇至50 mL， 冷藏以防变质。

2.3  样品测定

用电子天平称取1.0 g减肥降脂药品，向其中加入30 mL乙醇溶液，置于圆底烧瓶80 ℃水浴加热，降温后抽滤，放置冰箱中冷藏以防变质。每次吸取1 mL测定黄酮的质量分数。

2.4  实验准确性研究

2.4.1  精密度

准确称取减肥方待测药品5份1.000 0 g，调节为80 ℃通入蒸馏水回流2 h，根据“2.1”方法提取制备，在相同条件下重复制备待测液检测 ^[12]，根据吸光度，计算精密度。

2.4.2  稳定性

准确称取减肥方待测药品5份1.000 0 g，80 ℃水浴通入冷凝水回流2 h，在相同条件下连续提取测定5次，按照“2.1”方法提取制备，于510 nm波长下测定放置不同时间的吸光度，取平均值，计算相对标准偏差R_SD%。

2.4.3  重复性

准确称取减肥方样品5份1.000 0 g，80 ℃水浴加热乙醇回流2 h，根据“2.1”方法提取制备，重复提取测定5次，排除实验操作误差的影响，检测减肥降脂复方待测溶液的重复性。

2.4.4  加标回收率

准确称定5.000 0 mg的芦丁对照品加入减肥方待测药品中，准备5组相同实验，80 ℃水浴加热乙醇回流2 h，按照“2.1”提取制备，根据吸光度，计算加标回收率R_SD%^[13]。

3  結果与分析

3.1  回归方程

根据图1，减肥降脂复方中黄酮质量分数与其制备溶液的质量浓度具有一定量效关系，线性关系为y=  0.502 9x+0.007 5，R²=0.998 3，说明减肥降脂复方中的黄酮质量分数在0.20～1.20 mg/g内线性良好。

3.2  精密度实验

连续5次检测制备好的溶液的吸光度，减肥降脂复方中黄酮的质量分数分别为43.56、45.71、43.52、44、43.92 mg·g^-1，相对标准偏差为1.80%（n=5），结果表明，该方法测定减肥降脂复方中总黄酮质量分数精密度良好（表1）。

3.3  稳定性实验

连续5次检测待测溶液的吸光度，总黄酮的质量分数依次为44.01、42.27、44.11、43.76、43.51 mg·g^-1，R_SD=1.50%（n=5），说明该方法测定减肥降脂复方溶液黄酮的质量分数放置一段时间后实验数据仍有意义（表2）。

3.4  重复性实验

在相同条件下提取制备减肥降脂复方的待测液，测定5次，吸光度分别为0.460 1、0.461 8、0.465 1、0.459 8、0.464 3，相对标准偏差=0.46%（n=5），黄酮质量分数分别为45.00、45.17、45.50、44.97、45.42 mg·g^-1，结果说明该方法测定样品中总黄酮的质量分数稳定，实验方法较准确，均在误差范围内（表3）。

3.5  加标回收率实验

根据表4，样品的平均回收率为102.20 %，连续5次所测得吸光度分别为0.463 9、0.460 1、0.454 6、0.463 3、0.457 4，加入标准品后，黄酮质量分数分别为45.96、45.51、44.99、45.83、45.24 mg·g^-1，符合回收率的标准要求，相对标准误差为0.77%，符合R_SD≤5%的要求，说明回收率较高^[14]，满足分析要求（表4）。