三种检测方法在阴道分泌物真菌感染中应用分析

刘宗哲 翁茂婷 张善弟

【摘 要】 目的：比较常规镜检法、荧光PCR核酸扩增法（PCR法）和念珠菌显色培养基培养鉴定（真菌显色培养法）三种方法对阴道分泌物真菌检测结果的差异。方法：选取2017年1月至2017年12月就诊于本院的妇科阴道炎患者，收集常規镜检法真菌阳性和阴性标本各50例。用PCR法鉴定阳性标本念珠菌类型，阴性标本用荧光PCR核酸扩增法重新鉴定。同时将35例PCR法检测结果为阳性的标本进行真菌显色培养法培养鉴定，比较三者的结果。结果：50例常规镜检法阳性的标本，采用PCR法鉴定阳性47例，以白色念珠菌为主，占37例，光滑假丝酵母菌次之，占5例，热带假丝酵母菌2例，白色念珠菌合并光滑假丝酵母菌1例，其他真菌2例。50例常规镜检法阴性标本中，采用PCR法鉴定阳性15例，其中白色念珠菌13例，光滑假丝酵母菌1例，热带假丝酵母菌1例。常规镜检法和PCR法阳性率差异有统计学意义（P<0.05）;35例样本中，有1份样本经PCR法鉴定为热带假丝酵母菌，而显色培养基培养未鉴定出，真菌显色培养法与PCR法阳性率比较无统计学差异（P>0.05）。结论：三种检测方法各有利弊，常规镜检法应为门诊常规检验中的首选。对于临床上有典型症状而常规镜检法阴性的患者，建议采用PCR法或真菌显色培养法培养检测，以提高检测准确性和阳性率。

【关键词】 阴道分泌物;念珠菌;常规镜检法;荧光PCR核酸扩增法;念珠菌显色培养法

文章编号：WHR201910165

阴道炎是临床上常见的妇科疾病，可由阴道细菌、念珠菌、阴道毛滴虫等病原体引起。据文献报道[1]，由真菌引起的阴道炎约占20%～45%。随着广谱抗生素的广泛应用、各种妇科有创无创治疗器械的使用，真菌性阴道炎的患病率也呈逐年上升状态。目前临床实验室对阴道念珠菌的检查主要通过取阴道分泌物生理盐水涂片进行湿片镜检革兰染色，得出结果[2]。存在镜检结果与患者临床症状不符，不利于临床医生作出准确诊断。真菌培养鉴定用时较长，需一周才能出结果，限制了其在临床门诊中的应用。本文对100例常规法阴道分泌物进行PCR法和真菌显色培养基培养鉴定，通过比较三者的检测结果，分析三种检测方法的差异性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月至2017年12月就诊于本院的阴道炎患者，阴道分泌物由本院妇科临床医生用无菌棉拭子按常规采集。密封后立即送至本科进行检验。收集常规镜检法真菌阳性和阴性标本各50例。

1.2 方法

1）常规镜检法：严格操作规程，在洁净的载玻片上加一滴无菌生理盐水，将阴道分泌物样本均匀涂抹于载玻片上，再滴加2滴5%的氢氧化钠溶液，高倍镜下观察，找到孢子或发芽体或假菌丝者，判断为阳性结果。

2）荧光PCR核酸扩增法：提取阴道分泌物DNA，分半吸取5μL提取液加入含有白色念珠菌、光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌核酸特异性Taqman的探针PCR反应液管中，进行荧光定量PCR扩增后分析数据。

3）科玛嘉念珠菌显色培养基培养鉴定：将PCR法检测结果为阳性的阴道分泌物标本35例接种于沙保罗培养基，25℃培养24～48h，挑选单个菌落，接种于真菌显色培养基上，25℃培养24～48h，根据菌落颜色鉴定念珠菌类型。其中菌落为绿色至翠绿色为白色念珠菌，紫色为光滑念珠菌，热带假丝酵母菌为蓝灰色，白色至粉红色为其他念珠菌。

1.3 统计学处理

应用SPSS 22.0软件进行统计学分析，计数资料采用配对卡方检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 常规镜检法与PCR法检测结果比较

3例阴道分泌物标本常规镜检法检测结果为阳性，荧光PCR核酸扩增法检测结果却为阴性;15例阴道分泌物标本常规镜检法检测结果为阴性，荧光PCR核酸扩增法检测结果却为阳性;两种方法比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 PCR法真菌鉴定结果

50例常规镜检法阳性的阴道分泌物标本中，采用PCR法鉴定其真菌类型，在47例阳性标本中，白色念珠菌37例（78.7%），光滑假丝酵母菌5例（13.5%），热带假丝酵母菌2例（4.3%），白色念珠菌合并光滑假丝酵母菌1例（2.1%），其他真菌2例（4.3%）。50例常规镜检法真菌阴性的标本，采用PCR法鉴定阳性15例，分型为：白色念珠菌13例（86.7%），光滑假丝酵母菌例1（6.7%），热带假丝酵母菌1例（6.7%）。

2.3 PCR法与真菌显色培养法结果比较

35例样本中，有1份样本经PCR法鉴定为热带假丝酵母菌，而显色培养法未鉴定出结果，两种方法阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

3 讨论

念珠菌是人体正常定居菌之一。目前，真菌感染引起霉菌阴道病呈逐年上升趋势，为阴道病第二大病因[3]。白色黏稠豆渣样阴道分泌物是其典型特征。阴道分泌物涂片镜下可观察到典型的孢子、发芽体和假菌丝，通过临床症状结合常规镜检法不难诊断。本文结果显示，15例阴道分泌物标本常规镜检法检测结果为阴性，荧光PCR核酸扩增法检测结果却为阳性，提示常规镜检法可能导致部分念珠菌性阴道炎患者漏诊。当患者临床症状与镜检不符，而常规镜检法未观察到真菌的患者，有必要采用荧光PCR核酸扩增法或真菌培养进行明确诊断。本文中，3例常规镜检法检测结果为阳性的标本，荧光PCR核酸扩增法检测结果却为阴性，原因可能是这3例常规镜检法阳性标本所感染的真菌非本文监测的3种真菌，从而导致两者检测结果不一致。因此，方法互补极为重要。

尽早为临床提供诊断，解除患者痛苦，快速鉴定方法显得尤为重要。本文结果显示，白色念珠菌在真菌阴道炎中占比较大，其次为光滑假丝酵母菌，这与Martens等[4]和吴允晖[5]研究结果一致。科玛嘉念珠菌显色培养基培养鉴定可通过菌落的不同颜色和不同形态对念珠菌进行分离和快速鉴定，使用方便，但检测过程较为费时，且手工通过沙保罗培养基培养，易遗漏对念珠菌的诊断[6-7]。而采用荧光PCR核酸扩增法真菌鉴定无需进行菌落培养，直接提取阴道分泌物DNA进行荧光PCR扩增，可快速鉴定出常见的致病念珠菌菌种，有利于快速、准确诊断念珠菌性阴道炎[8]。本文结果显示，PCR法真菌鉴定与显色培养法结果差异无统计学意义（P>0.05），提示荧光PCR核酸扩增法真菌鉴定结果准确。

由此可见，常规镜检法、荧光PCR核酸扩增法和真菌显色培养法在阴道分泌物念珠菌感染检测中各有利弊[9-10]。常规镜检法操作简单、快速，有利于早期诊断，但由于陰道分泌物标本成分复杂，易造成假阴性和假阳性。荧光PCR法可快速准确得到结果，并鉴定出念珠菌菌型。念珠菌显色培养基培养鉴定阳性率和准确度与PCR法相似，同时能提供药物敏感试验结果，为临床合理用药提供依据[11]，但检测过程较为繁琐，间时要求较长，不利于早期诊断大规模检查[12]。因此，应根据临床要求，采用不同的检测方法。常规镜检法应为门诊常规检验中的首选。与临床症状不符，而常规镜检法为阴性或阳性的患者，建议采用荧光PCR核酸扩增法或念珠菌显色培养法进行鉴定。

参考文献

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[11]梁欢，李玲，曾凡慧.不同方法治疗妊娠期外阴阴道念珠菌感染患者的临床疗效对比[J].中国性科学，2016，（25）12：101-103.

[12]邢献国，刘辉，孟岩.科玛嘉念珠菌培养基鉴别念珠菌的系统评价[J].国际检验医学杂志，2015，36（18）：2688-2690.