酶联免疫吸附测定与免疫印迹试验检测人类免疫缺陷病毒抗体的差异性分析

杜萍萍, 李 芳

(1. 陕西省铜川市人民医院 检验科, 陕西 铜川, 727000;2. 中国人民警察武装部队陕西省总队医院 检验与病理科, 陕西 西安, 710054)

人类免疫缺陷病毒(HIV)即艾滋病病毒[1], 临床研究[2]已证实，艾滋病因HIV感染引起，可造成患者免疫功能的部分丧失或完全丧失, HIV变异性强且多数患者感染后具有较长潜伏期，传播途径主要为性传播、母婴传播、血液传播等。HIV感染者临床表现多样且尚无治愈方法，因此加强疑似患者筛查并对HIV抗体进行检测极为重要[3]。临床依照检验目的及要求选择方法，常用的HIV检测方法有抗原抗体检测、病毒基因分型、分离培养、核酸定性定量检测等，而临床上抗体检测应用更为成熟且操作更加简便，是当前广泛应用的HIV筛查及确诊方法[4]。本研究探讨酶联免疫吸附测定(ELISA)与免疫印迹试验(WB)检测HIV抗体的差异性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月—2020年1月陕西省铜川地区进行HIV抗体检测的疑似患者105例为研究对象，其中男49例，女56例，年龄29～53岁，平均(34.27±2.62)岁。所有检测对象均对本研究知情同意，共获取检测样本105份。

1.2 方法

105份样本均依照《全国艾滋病检测技术规范2015年修订版》进行样本初筛和复检。初筛试剂盒为HIV1+2型抗体诊断试剂盒，购自珠海丽珠试剂股份有限公司(艾美捷科技有限公司生产)。初筛后的样本均采用ELISA试剂盒(第4代HIV抗原体诊断试剂盒，购自北京万泰生物药业股份有限公司)、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒进行复核检测。之后对结果均为阳性或结果为一阴、一阳的样本行WB检测验证(采用HIV1+2试剂盒检测，新加坡Genelb Diagnostics公司生产)。所有操作均严格依照试剂盒说明书进行，选用的所有试剂盒均于国家食品药品监督管理局注册。ELISA检测选用450 nm波长测定各孔A值，质控物吸光度值与临界值的比值(S/CO)≥1表示阳性, S/CO<1表示阴性。

1.3 统计学分析

2 结 果

2.1 样本ELISA初筛及WB验证结果

105例疑似患者样本经ELISA试剂盒及RT-PCR复检后显示，样本呈双阳性98例, ELISA检测阳性但RT-PCR检测阴性5例, ELISA检测阴性但RT-PCR检测阳性2例。98例初筛结果为双阳性的样本中，经WEB验证后确定为阳性87例，阴性2例，另有9例不确定，符合率88.78%(87/98); 5例ELISA检测阳性但RT-PCR检测呈阴性的样本经WB验证后确定阳性1例，剩余4例不确定，符合率为20.00%(1/5); 2例ELISA检测呈阴性但RT-PCR检测呈阳性的2个样本经WB验证后均确定为阴性。见表1。

表1 105份样本ELISA初筛结果及WB验证结果 例

2.2 ELISA检测得出的S/CO值与WB验证结果

3例S/CO值<1的初筛样本中, WB验证结果显示无阳性病例，其中2例阴性, 1例不确定; 在5例S/CO值1～<6的初筛样本中, WB验证结果显示，阳性2例, 1例阴性, 2例不确定，验证符合率为40.00%(2/5); 12例S/CO值6～<10的初筛样本中, WB验证结果显示，阳性5例, 5例阴性, 2例不确定，验证符合率为41.67%(5/12); 85例S/CO值≥10的初筛样本中, WB验证结果显示，阳性80例, 3例阴性, 2例不确定，验证符合率为94.12%(80/85), 见表2。

表2 ELISA检测的S/CO值与WB验证结果 例

2.3 WB反应带型结果

105例疑似患者血液样本经WB验证后显示阳性87例; 反应带型显示, gp160、gp120出现率均到达100.00%, gp41、p24、p17出现率分别为95.40%(83/87)、64.37%(56/87)、56.32%(49/87), 另有2.30%(2/87)的样本显示无HIV抗体特异带。

3 讨 论

本研究结果显示, 105个样本初筛及复核检测后经WB验证确定的阳性患者87例，符合率为87.78%, 提示ELISA检测HIV抗体结果存在一定假阳性，故建议后续同样需要对初筛阳性样本病例进行WB验证[5]。研究[6]表明，导致ELISA诊断符合率不高的原因可归纳为以下方面: ① 传染病病原体与HIV抗原决定簇的交叉反应; ② 受检样本均为初筛显示HIV抗体阳性标本，故受检人群中存在HIV抗体筛查实验假阳性人群[6]; ③ 部分样本存在溶血、脂血或微生物污染，一定程度影响诊断符合率[7]。

从HIV病原学诊断角度来看，可将WB验证结果作为ELISA、RT-PCR检测方法优劣性的金标准。临床研究[8-9]已证实, WB用于HIV检测具有更高的敏感性和特异性，但也有研究[10-12]表明, WB作为HIV感染的确认实验方法，也存在一定局限性，突出表现为阳性及阴性外的不确定性。本研究结果中, WB验证后显示13例不确定性样本，间接提示了WB检测阴性结果亦可能存在假阴性，导致该种情况的原因主要由以下方面: ① 样本病例为早期感染者[13]; ② 宿主蛋白的非特异性反应; ③ p24抗体伴随艾滋病病程进展而减少，造成试验结果由阳转阴[14]。研究[15-16]表明，血清学转型时期的HIV感染者，特异带显示为不典型条带，并随着时间推移条带数量及表现强度增加，因此并非所有阳性样本均表现为全条带，该种情况下可导致WB验证结果不确定。

本研究结果显示, ELISA检测与WB验证结果显示, S/CO值1～<6阳性符合率仅为40.00%, S/CO值≥10时符合率达94.12%, 提示ELISA检测时S/CO值的大小有助于HIV感染的诊断及感染风险的评估[17]。因此，对复核检测双阳样本特别是S/CO值≥6的样本，不论WB验证结果是否为阴性或不确定性样本，均应进行重点追踪以降低漏诊率。

综上所述, ELISA、WB在HIV抗体检测中具有一定价值，基于对检测成本及流程简化的考虑，单阳性样本可结合流行病学资料判定是否需要进行WB验证，而对于WB验证后的不确定样本需做好追踪随访工作。当前国内多个血液中心在病毒检查中逐步重视核酸检测，对高危疑似样本及不确定样本可增加核酸试验以增强检测准确度，降低艾滋病漏检率[18]。