避免抗-Dia抗体漏检的临床分析与处理*

孔晓君 马玲 张红梅

临床输血工作中，获得相容性血液是保证输血安全的关键。常见的导致交叉配血不合的原因有自身抗体、不规则抗体、血浆蛋白紊乱、药物、冷凝集素等[1-3]，其中不规则抗体是致使交叉配血不合和引发溶血性输血反应的主要原因之一。本文回顾性分析了1例因抗-Dia抗体漏检所致的交叉配血不合，通过合理选择抗体筛选细胞和谱细胞有效地避免了因抗体漏检而导致的溶血性输血反应。

资料与方法

1 临床资料 患者，女，40岁，孕1产1，有输血史。2017年10月因“咳嗽发热伴气喘十余天”收住我院呼吸内科，既往有“支气管哮喘”病史，2015年诊断“肺栓塞”，抗凝治疗半年余后好转，有“宫颈癌”病史。查体：体温38.0℃，脉搏116次/分，血压98/70 mmHg，呼吸24次/分；双肺呼吸音低，双肺未闻及明显干湿性罗音。实验室检查：血常规示红细胞计数2.44×1012/L，血红蛋白78 g/L。根据患者既往病史、临床症状及实验室检查结果诊断“1.社区获得性肺炎；2.支气管哮喘急性发作期；3.Ⅰ型呼吸衰竭；4.宫颈癌化疗后复发。”患者一般情况较差，为改善贫血症状，临床医生申请输注悬浮红细胞1.5 U。

2 主要试剂与仪器 抗-A、抗-B（上海血液生物医药有限公司，批号：20170306）；Ac、Bc、Oc（北京金豪有限公司，批号2017103021）；抗-D(上海润普生物技术有限公司，批号：20170501) ；抗-IgG、C3d（上海血液生物医药有限公司，批号：20175001）；抗-E（上海血液生物医药有限公司，批号：20173201）；抗-e（上海血液生物医药有限公司，批号：20163301）；抗-C（上海血液生物医药有限公司，批号：20163001）；抗-c（上海血液生物医药有限公司，批号：20173102）；筛选谱细胞（长春博迅医药有限公司，批号：20170902）；国产谱细胞（上海血液生物医药有限公司，批号：20170921）； 进口谱细胞（MEDSON，批号731721）；微柱凝胶抗人球蛋白卡（西班牙 Grifols公司，批号：7044.01）；基因组DNA提取试剂盒（原平皓公司，批号：100052）。

PE9600PCR扩增仪（Applied Biosystem Corp. USA）；Alphalmager HP凝胶成象系统（Alphalmager Corp. USA）； ND-100-Spectrophotometer DNA 定量分析仪（NanoDrop Corp. USA）；Labofuge 400R低温高速离心机（Heraeus Corp. Germany）；振荡仪等。

3 方法

3.1 血清学方法：ABO血型鉴定、Rh血型鉴定、直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查、抗体鉴定、抗体效价、交叉配血试验均严格按照《全国临床检验操作规程》（第4版）[4]操作。

3.2 分子生物学方法：用全血基因组DNA提取试剂盒提取血样DNA，分2个体系进行PCR，分别加入β-actin作为内参。PCR体系总体积为20 μL，引物浓度为200 nmol/L。PCR反应条件为：94℃5 min 94℃ 30 s 60℃ 30 s 72℃ 45 s 35个循环后72℃ 7 min，最后4℃保存。PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶中电泳(100 V，30 min)，用凝胶成像系统分析结果。

结 果

1 血型鉴定结果 患者血型为A，RhD（+），CCDee。

2 直接抗人球蛋白试验（DAT）结果 阴性。

3 不规则抗体筛查试验 国产筛选谱细胞检测患者血清中不规则抗体，微柱凝胶法间接抗人球蛋白试验（IAT）结果显示Ⅱ号细胞孔为阳性，从抗筛格局图上看，可能含有抗-E，见表1。

表1 患者血清与国产筛选谱细胞反应格局

4 交叉配血结果 使用E抗原阴性红细胞悬液2袋分别与患者进行交叉配血，结果其中一袋红细胞悬液盐水法和微柱凝胶抗人球法主次侧均无凝集无溶血现象；而另一袋微柱凝胶抗人球蛋白法主侧出现3+凝集，无溶血。提示患者体内除抗-E外还可能存在其他抗体，需进一步鉴定。

5 抗体鉴定试验

5.1 国产谱细胞试验结果：患者血清与O型谱细胞及自身细胞在盐水和抗人球蛋白（IAT）介质中的反应格局见表2。未检出IgM类抗体。从微柱凝胶IAT试验结果看，除了4号谱细胞为阳性外，其余（2号、3号、5号、6号、8号为阳性）均符合抗-E的格局。从谱细胞格局表上看，4号阳性主要有抗-Dia。患者血清中除了有抗-E，可能还有抗-Dia，因此需做下一步试验来进行确认。

5.2 进口谱细胞试验结果：进口谱细胞微柱凝胶IAT试验结果：1号、2 号、4号和9号谱细胞为阳性，其余均为阴性，完全符合抗-E合并抗-Dia的格局，见表3。

表2 患者血清与国产谱细胞反应格局

表3 患者血清与进口谱细胞反应格局

6 Diego血型基因分型结果 Dia、Dib及β-actin基因目的条带大小分别为645 bp、419 bp及320 bp。其中1号为患者，2号为配血不合供者。其中1号只出现Dib基因条带，提示为Di(a-b+)；2号出现Dia及Dib基因条带，提示为Di(a+b+)。见图1。

7 抗体效价测定 选取进口谱细胞中的1号、2号细胞分别用抗人球蛋白试验检测抗-Dia和抗-E效价，测得患者血清中抗-Dia效价为16，抗-E效价为4。

8 结论 患者血型为A，RhD（+），CCDee，Di(a-b+)，血清中含有IgG型抗-E和抗-Dia。与血型为A，RhD（+），CCDee献血者红细胞在盐水和抗人球蛋白介质中进行交叉配血盲配，选择主、次侧无凝集、无溶血者，给予患者输注，未发生不良反应，输血后12 h检测血红蛋白由78 g/L升高到82 g/L。

讨 论

患者血液中不规则抗体是导致迟发型溶血反应的主要原因，迟发型溶血反应轻则造成红细胞输注无效，重则出现严重溶血症状，危及患者生命。如果患者血清中存在有临床意义的不规则抗体，应对不规则抗体特异性进行鉴定，选择红细胞相应抗原阴性血液进行交叉配血以确保患者输血安全。

在临床输血中，因妊娠或输血产生的免疫性抗体中以Rh血型系统抗体最为多见[5]。E抗原在RhD阳性人群中的频率约为48%[6]，E抗原受刺激的概率较大，故抗-E抗体成为Rh血型系统中最常见的抗体[7-9]。Diego系统中的Dia被公认为“人种标记”，它在白种人、黑种人和澳大利亚土著等人群中发生频率极低，但在蒙古人种（黄种人）的一些人群（如东亚人，南美印第安人）中却有较高的发生频率（10%～36%）[10]，故成为蒙古人种群体在世界上分布或者迁移规律时很有用的人类学遗传标记。Diego血型系统最主要的四个抗原分别为Dia、Dib、Wra和Wrb。其中抗-Dia，抗-Dib具有临床意义，它们通过免疫产生，属于IgG（IgG1或IgG3）抗体性质，可通过IAT检出。抗-Dia抗体能够引起新生儿溶血症和溶血性输血反应，抗-Dib也可引起新生儿溶血症和溶血性输血反应[11]，但较抗-Dia抗体少见。

本文案例中由于使用的筛选细胞不含有Dia抗原，导致只检出了抗-E抗体而漏检抗-Dia抗体，由于抗体鉴定谱细胞价格昂贵，效期较短，且未在国内注册，所以目前我国大部分医院普遍采用三系抗筛细胞进行不规则抗体筛查。美国AABB规定用于患者的抗筛细胞上必须具有Rh，Kell，Duffy，Kidd，Lewis，MNS，P等血型系统的共18个抗原，而且还规定具有剂量效应的抗原（C，c，E，e; M，N，S，s；Fya，Fyb；Jka和 Jkb）应为纯合子，以尽可能检出具有临床意义的红细胞抗体，欧洲标准和美国相似[12]。我国目前还未出台针对抗筛细胞的生产标准，基本上国产抗筛细胞都是按照美国或欧洲标准生产。但由于血型抗原的分布频率在不同种族中不同，因而按照美国或欧洲标准生产的抗筛细胞不能完全满足中国人群的要求，易导致一些抗体的漏检，例如本文中的抗-Dia抗体。因而一些在中国人群中分布频率较高的抗原，如Diego血型系统中的Dia抗原和MNS系统中的Mur抗原，应包含在抗体筛查细胞中。目前仅有个别国内厂家抗筛细胞能够满足中国人群要求。这就提醒我们在购买抗筛细胞的时候要尽量选择一些符合中国人群抗原要求的厂家试剂，如果一个厂家的试剂无法满足条件，可以购买多个厂家抗筛细胞同时使用，以减少抗体漏检的概率。多套三系抗筛细胞还有可能拼凑出一套抗体鉴定谱细胞，用于鉴定抗体的特异性。

综上所述，输血前进行不规则抗体筛查与鉴定，检出有临床意义的抗体，选择相应抗原阴性的血液输注，可以有效减少和避免溶血性输血反应的发生。合理选择抗筛细胞是避免不规则抗体的漏检的重要举措，可进一步保障临床用血安全。

（抗体鉴定得到江苏省血液中心输血研究室的各位老师帮助和协作，特此致谢!）

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