太子参参须提取物对免疫抑制小鼠血清免疫指标和抗氧化指标的影响

甘思言，衣伟萌，乔石，闵思明，陈赛红，黄一帆，张炎达， 马玉芳*

(1. 中西兽医结合与动物保健福建省高等学校重点实验室，福建 福州 350002；2. 福建省兽医中药与动物保健重点实验室，福建农林大学，福建 福州 350002；3. 福建贝迪药业有限公司，福建 宁德 355399)

太子参(Radixpseudostellariae)为石竹科植物的一种[1]，又名童参、四叶参等。最早收载于《本草拾遗》，广泛分布于福建、内蒙古、河北等地，福建柘荣县有“中国太子参之乡”的美称，其太子参产量占全国六成以上[2]。太子参可药食两用，归脾、肺经，具有益气、健脾等多种功效，其主要成分为多糖、皂苷、黄酮、氨基酸等[3]。研究表明，太子参具有抗应激、增强免疫力、抗氧化等作用[4-5]，而其中的苷类和多糖是太子参发挥免疫调节作用最有效的成分[6]。

太子参参须是太子参的尾根和侧须，其占太子参质量的10%～15%[7]。太子参参须与太子参的化学成分相同，区别仅在于各成分的含量不同。研究表明，太子参参须多糖的含量达4.68%[8]，总皂苷含量达0.25%[7]。但太子参参须多被丢弃，造成极大浪费。目前关于太子参参须有效成分多糖和皂苷的药理鲜见报道。本研究所用的太子参参须提取物(Radixpseudostellariaefibrous root extraction, RPFRE)主要成分为太子参参须多糖和皂苷，通过给小鼠腹腔注射环磷酰胺(CY)复制免疫抑制模型小鼠，灌喂不同剂量RPFRE，检测试验小鼠血清中相关免疫学指标和抗氧化指标，探讨RPFRE对免疫抑制小鼠抗氧化功能和免疫功能的影响，旨在为太子参参须进一步开发利用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

太子参参须提取物，由福建贝迪药业有限公司惠赠；注射用环磷酰胺购于百特医疗用品贸易(上海)有限公司；总抗氧化能力(T-AOC)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、丙二醛(MDA)测试盒均购自南京建成生物工程研究所；免疫球蛋白IgA、IgM、IgG检测试剂盒，补体C3、C4检测试剂盒均购自浙江伊利康生物技术有限公司。

1.2 实验动物分组及处理

取50只清洁级KM小鼠(购自福建医科大学实验动物中心)，雄性，体重(20±2) g， 适应性饲养1周后，随机分为5组，分别为空白组(CK组)、模型组(CY组)、RPFRE低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg)，每组10只。1～3 d，CK 组小鼠腹腔注射生理盐水，其他组小鼠腹腔注射CY 80 mg/kg；4～17 d，CK、CY 组小鼠每日用双蒸水灌胃，RPFRE组分别用相应剂量的RPFRE灌胃。

1.3 血样采集与指标测定

于试验18 d时，摘除小鼠眼球并采血，分离血清，3 000 r/min离心10 min，收集上清液，-20 ℃保存。

免疫比浊法检测免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)含量、补体(C3、C4)水平，比色法检测T-AOC、羟胺法检测SOD活性、TBA法检测MDA含量，具体操作步骤参照试剂盒说明书。

1.4 数据处理

试验数据使用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析,LSD 法进行多重比较，结果用“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 RPFRE对小鼠IgA、IgM、IgG含量的影响

RPFRE对免疫抑制小鼠IgA、IgM、IgG的影响见表1。与CK组比较，CY组小鼠IgA、IgG含量均极显著降低(P<0.01)，IgM含量显著降低(P<0.05)；与CY组相比，RPFRE低剂量组IgA含量显著上升(P<0.05)， RPFRE中、高剂量组含量极显著上升(P<0.01)，RPFRE高剂量组IgG、IgM含量，中剂量组IgG含量均显著增加(P<0.05)。说明RPFRE能够不同程度地促进免疫抑制小鼠免疫球蛋白分泌。

表1 RPFRE对小鼠IgA、IgM、IgG含量的影响 mg/L

2.2 RPFRE对小鼠补体C3、C4水平的影响

RPFRE对免疫抑制小鼠补体C3、C4的影响见表2。与CK组相比，CY组小鼠C3、C4含量均极显著降低(P<0.01)；与CY组相比，RPFRE中、高剂量组小鼠C3、C4含量升高极显著(P<0.01)。

表2 RPFRE对小鼠补体C3、C4水平的影响 mg/L

2.3 RPFRE对小鼠抗氧化指标的影响

RPFRE对免疫抑制小鼠血清抗氧化指标的影响结果见表3。CY与CK组相比，CY组小鼠的T-AOC和SOD活性均明显降低(P<0.01)，而MDA含量升高(P<0.05)。与CY组相比，RPFRE低剂量组T-AOC活力和SOD活性均明显升高(P<0.01)；RPFRE中剂量组SOD活性升高(P<0.01)，MDA含量降低(P<0.05)；RPFRE高剂量组的T-AOC、SOD活性均升高(P<0.01)，而MDA含量则下降(P<0.05)。

表3 RPFRE对小鼠血清抗氧化指标的影响

3 讨论

免疫球蛋白是机体重要的防御物质，他们广泛存在于血液、组织液和各种体液当中，在一定程度上反映了机体的免疫功能[9]。其中，IgG是抗感染最主要的免疫球蛋白，占血清的75%～80%；IgM是循环系统中最大的抗体，在动物体的体液免疫中首先产生应答[10-11]。补体C3、C4是一组存在于组织液及血清中的具有酶活性的球蛋白，可直接反映机体补体系统功能状态[12]。在药学等研究领域，CY常用于建造免疫功能低下或免疫功能抑制状态的动物模型。连续3 d腹腔注射80 mg/kg CY可以构建良好的免疫抑制小鼠模型[13]。进一步研究表明，上述剂量的CY可抑制DNA的复制、促进细胞凋亡，降低免疫细胞免疫功能，使机体处于免疫抑制状态[14]。研究表明，海胆多糖[15]、银杏外种皮多糖[16]、太子参茎叶多糖[17]、樟芝多糖[18]、荔枝果肉多糖[19]、水溶性紫薯多糖[20]和组培虫草花多糖[21]能提高CY 所致免疫抑制小鼠IgA、IgG、IgM含量，黄芪多糖能够提高CY 小鼠血清IgG、IgM含量[22]，太子参茎叶多糖能提高C3、C4含量[17]，人参皂苷Rg3能提高CY 所致免疫抑制小鼠IgG含量[23]。本研究结果显示，高剂量RPFRE能提高小鼠血清IgM、IgG、IgA含量，RPFRE各剂量组均能提高补体水平。表明RPFRE能提高免疫低下小鼠的体液免疫功能。

正常情况下，生物体内的氧自由基(ROS)处于动态平衡[24]。但在疾病或某些因素的作用下，抗氧化系统发生紊乱，ROS 代谢平衡失调，导致生物膜和大分子物质受到损伤[25]。T-AOC 是机体内各种抗氧化酶的活性的综合体现，是机体总的抗氧化能力；SOD 是生物机体内产生的一种可以保护细胞膜结构完整和功能健全的酶，MDA 是机体的脂质过氧化产物，间接反应氧自由基对细胞损伤的程度[26]；而CY 能通过抑制机体免疫功能，使得机体内氧化与抗氧化状态向氧化方向偏斜，诱导机体发生氧化应激[27]。CY 还会增加小鼠血清中ROS的含量，降低T-AOC 含量，造成氧化还原系统失衡[28-29]。研究表明，抗氧化剂可以保持细胞膜的完整性，有利于免疫细胞发挥正常的免疫功能[30]；而植物多糖和皂苷成分可以通过活化抗氧化转录因子，激活信号通路，上调抗氧化酶表达，中和过量的ROS来达到抗氧化的目的[31-32]。研究表明，赤灵芝多糖能提高免疫抑制小鼠血清和肝脏组织中GSH-Px、SOD、T-AOC水平，降低MDA 的含量[33]；虫草花多糖和黄梨渣多糖能提高CY小鼠的心、肝、肾组织中GSH-Px、SOD、T-AOC水平和降低MDA的含量[22，33]；人参皂苷Rg3能提高CY所致氧化应激小鼠血清CAT、SOD活性，降低MDA含量[34]。本研究结果显示，CY组小鼠的T-AOC、SOD活性降低，MDA含量升高；给予RPFRE后，T-AOC含量和SOD活性升高，MDA含量降低，表明RPFRE能提高免疫低下小鼠抗氧化功能。

综上，RPFRE能提高CY所致免疫低下小鼠的体液免疫功能和抗氧化功能，究其原因，可能与RPFRE所含的多糖和皂苷相关，关于太子参参须多糖、皂苷单独或联合对免疫低下小鼠免疫功能和抗氧化功能影响有待于进一步深入研究。