红花注射液配伍稳定性研究

丁艳谱，李响明*，杨 琴，孙胜斌，2，姜国志，刘 鑫

(1.神威药业集团有限公司，河北 石家庄 051430；2.中药注射剂新药技术开发国家地方联合 工程实验室，河北 石家庄 051430；3.河北省中药注射剂工程技术研究中心，河北 石家庄 051430)

红花注射液由红花水提，再经2次醇沉、水沉、热处理等精制工艺制得的灭菌水溶液。现代药理研究显示红花注射液有抗凝血、抑制血栓形成、抗血小板聚集与黏附、改善血液流变学、改善微循环的作用[1]。临床上用于治疗闭塞性脑血管疾病、冠心病、脉管炎[2-3]。

红花注射液的化学成分包括黄酮类化合物、聚乙炔类化合物、5-羟色胺类化合物、甾体类化合物、木质素类化合物、烷基二醇类化合物、有机酸类化合物和色素成分，其中总黄酮类化合物是该产品中最主要的化学成分，具有较好的临床疗效，应用广泛，而关于红花注射液临床应用的配伍研究报道较少[4-5]。因此，本研究参照红花注射液现行质量标准[6]中【用法与用量】在室温环境中模拟配伍考察其稳定性，以期为指导红花注射液的临床应用提供参考。

1 试药和仪器

1.1 试药

红花注射液(神威药业集团有限公司)；5%、10%葡萄糖注射液(石家庄四药有限公司)；羟基红花黄色素A对照品(111637-201810，93.1%)；山奈酚对照品(1110861-201812，93.8%)，以上对照品均购自中国食品药品检定研究院。乙腈，色谱纯；三乙胺、冰醋酸、甲醇、三氯化铝均为分析纯。

1.2 仪器

U3000高效液相色谱仪(戴安公司)；CPA225D 电子天平(Sartorius)；FE20酸度计(梅特勒-托利多)；不溶性微粒测定仪(天津市天大天发科技有限公司)；紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)；渗透压摩尔浓度测定仪(天津天河医疗器械有限公司)。

2 方法

2.1 配伍方法

红花注射液现行质量标准【用法与用量】中已明确“治疗闭塞性脑血管疾病，静脉滴注，一次15 mL，用10%葡萄糖注射液250～500 mL稀释后使用，每日1次，15～20次为1个疗程。治疗冠心病，静脉滴注，每次5～20 mL，用5%～10%葡萄糖注射液250～500 mL稀释后应用，每日1次，10～14次为1个疗程，疗程间隔为7～10日。治疗脉管炎，肌内注射，每次2.5～5 mL，每日1～2次[6]。”为了提高滴注的顺应性，降低疼痛反应的发生率，我公司在产品说明书中“建议滴速小于40滴/min，一般控制在15～30滴/min”。

因此本研究确定红花注射液的稀释液为5%、10%葡萄糖注射液，分别考察最小浓度、最大浓度时的配伍稳定性。结合滴速，可计算出最长滴注时间为11.2 h。综上，本研究分别取5 mL红花注射液与500 mL的5%、10%葡萄糖注射液在超净台下配伍；取20 mL红花注射液与250 mL的5%、10%葡萄糖注射液在超净台下配伍，配伍后在室温下静置12 h，分别在0 h、1 h、2 h、4 h、6 h、12 h观察配伍液的性状，测定配伍液的pH值、不溶性微粒、摩尔渗透压比、吸光度。有文献[7]指出羟基红花黄色素A、总黄酮是红花注射液的有效成分，在配伍后0、12 h时测定配伍液的有效成分含量，确认临床用药中有效成分的稳定性。

2.2 检测方法

2.2.1 性状 目视，观察配伍液的颜色，是否有气体产生，有无浑浊或沉淀。

2.2.2 pH值 取配伍液，按中国药典2015版四部通则0631测定pH值。

2.2.3 不溶性微粒 取配伍液，按中国药典2015版四部通则0903测定不溶性微粒。

2.2.4 渗透压摩尔浓度 取配伍液，按中国药典2015版四部通则0631测定渗透压摩尔浓度比。

2.2.5 吸光度 精密量取低浓度配伍液5 mL置25 mL量瓶中，加水至刻度摇匀；精密量取高浓度配伍液2.5 mL置100 mL量瓶中，加水至刻度摇匀。照紫外-可见分光光度法(中国药典2015年版四部通则0401)，取相应浓度的葡萄糖注射液稀释相同的倍数后为空白，在250～350 nm波长范围内扫描。

2.2.6 羟基红花黄色素A 参照红花注射液现行质量标准(WS3-B-3825-98-2012)中【含量测定】羟基红花黄色素A的方法测定。

供试品溶液的制备：取红花注射液按“2.1”项下方法配伍后，即得。

测定法：精密吸取低浓度配伍方式的供试品溶液100 μL注入液相色谱仪；精密吸取高浓度配伍方式的供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪。

2.2.7 总黄酮 参照红花注射液现行质量标准(WS3-B-3825-98-2012)中【含量测定】总黄酮的方法测定。

供试品溶液的制备：取红花注射液，按低浓度配伍方式配伍，精密量取10 mL配伍液，水浴蒸至近干，用甲醇转移定容至10 mL量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。取红花注射液，按高浓度配伍方式配伍，精密量取15 mL配伍液置100 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别精密吸取2 mL供试品溶液置10 mL具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“加0.1 mol/L三氯化铝溶液1.0 mL”起，依法测定吸光度。同时精密量取供试品溶液2 mL，置10 mL具塞试管中，加甲醇3.0 mL，置40 ℃水浴中，其余同上操作，作为空白溶液。从标准曲线上读出供试品溶液中相当于山奈酚的量，计算，即得。

3 结果

根据“2.1”项下方法配伍后，分别再放置0 h、1 h、2 h、4 h、6 h、12 h按“2.2”项下方法检测，得出试验结果，见表1-表3。

表1 配伍液的性状及pH值变化

表2 配伍液的不溶性微粒及渗透压摩尔浓度的变化

表3 配伍液的吸光度、羟基红花黄色素A及总黄酮的变化

续表3

从以上3个表中的数据可知，将红花注射液分别与5%、10%葡萄糖注射液配伍成两种浓度后，在超净台下室温连续放置12 h，配伍液未发生变色、产气、浑浊或沉淀的现象，配伍液始终呈黄色的澄明液体；pH值、摩尔渗透压比稳定，几乎无变化。与5%、10%葡萄糖注射液配伍后，配伍液的pH值、摩尔渗透压比有差异，这与所用的葡萄糖注射液浓度有关。不溶性微粒数目主要取决于葡萄糖注射液中不溶性微粒的水平，放置过程中配伍液不溶性微粒数目无显著变化。配伍液在250～350 nm波长范围内扫描，发现在(266±2)nm处有最大吸收，在12 h内吸收度值稳定。本研究还测定了配伍液中有效成分的含量，放置12 h后羟基红花黄色素A、总黄酮含量相对稳定。本次研究表明红花注射液与5%、10%葡萄糖注射液配伍稳定。

4 讨论

随着红花注射液的临床广泛应用，其不良反应也时有报道，目前已知的不良反应涉及中枢及外周神经系统、心血管系统、呼吸系统、胃肠系统、泌尿系统、皮肤及附件、全身性损害等，临床表现主要有瘙痒、皮疹、恶心、呕吐、头晕头痛、气短气促、呼吸困难、心悸、心律失常、血尿、排尿困难、发热、寒战等，严重者出现过敏性休克[8-10]。

红花注射液不良反应的发生主要与两方面有关，其一是患者自身的年龄[11]、基础疾病、联合用药[12]，其二是中药制剂药效成分复杂，在工业生产中大分子蛋白类成分[13]、脂溶性成分[14-15]的残留可能增加患者使用后不良反应的发生率。上述这些物质在使用后进入人体，均有可能参与人体的免疫反应，直接或间接吸附于血管壁上，降低小动脉、毛细血管的通透性，增强血管脆性，最终诱发各种疾病[16]。

中药制剂引起不良反应的原因很多，可以从以下几点努力，降低不良反应的发生率：①加强基础研究，明确与之配伍有禁忌的、不适宜配伍的制剂，从理论指导临床联合用药；②提高临床医患、医护的防范意识，根据患者的自身疾病、生理、心理的差异制定科学、合理、有效的治疗方案，使用前仔细询问患者的用药史、过敏史，必要时做皮肤过敏试验等降低风险，使用后密切观察用药反应[17]；③制剂生产企业在说明书中增加警示语、用药注意事项等安全性信息，持续优化生产工艺，降低致敏风险，提高产品质量。