丹参益肝自乳化微乳抗大鼠门静脉高压的作用

房辰晨 孙敬蒙 卢美彤 张炜煜 金清龙

(1长春中医药大学药学院，吉林 长春 130117；2吉林大学白求恩第一医院)

丹参为唇型科植物丹参的干燥根及根茎〔1〕，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功效〔2,3〕。中药丹参活血化瘀作用显著，多用于心脑血管疾病的治疗，可降低心肌兴奋性和传导性，保护心肌缺血性损伤、脑组织缺血、再灌注损伤等〔4〕。近年研究报道，丹参对肝病的治疗作用明显，具有改善肝脏微循环、抗血小板聚集和血栓形成、降低血液黏度、抗菌、消炎、抗氧化作用等〔5〕。丹参有活血化瘀功效，研究报道丹参能激活纤溶系统，促进纤维蛋白的溶解，降低纤维蛋白原，抑制纤维细胞增殖和分泌，减少胶原纤维形成和纤维组织增生，将其用于临床抗肝纤维化，疗效十分理想〔6〕。刘星等〔7〕研究了丹参降低肝硬化门静脉高压作用，结果显示丹参具有一定的作用，但其治疗机制等还有待研究。

肝硬化门静脉高压是门静脉压力升高导致的一系列症状，压力升高的主要原因是肝硬化引起的毛细血管床破坏，联合其他原因导致门静脉血流受阻，血流速度降低，从而表现出门静脉高压。在机体内的一系列代谢和血流动力学紊乱往往互为因果，在肝脏疾病的发生及发展过程中形成恶性循环。各种慢性肝病，如肝硬化、肝纤维化等可引起门静脉高压，而门静脉高压一旦形成，又可引起肝脏疾病的进一步恶化。在我国肝病发病率较高，肝炎病毒携带人口约占10%，其中，肝炎肝硬化在我国十分常见。肝纤维化潜伏期长，为可逆过程，患者一般不易发现，进一步发展则形成肝硬化、门静脉高压，危及患者生命〔8〕。因此，门静脉高压的治疗对各种慢性肝病的预防和治疗有积极意义。

目前，临床上用于降低门静脉高压的药物为盐酸普萘洛尔(心得安)。心得安可降低门静脉高压，但副作用较大，导致肝功能恶化、心脏抑制、心搏过缓、低血糖等。而手术治疗方法胃镜下食管胃底静脉曲张套扎术价格比较昂贵，且为有创的治疗方法，部分患者不能承受。因此，将丹参提取制备成丹参自乳化微乳滴丸，改善肝脏微循环，并进行体内药效学评价其降低门静脉高压的效果，有其独特的意义。

1 材料与方法

1.1仪器 AR2140型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；JA5103N型电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司)；Leitz 512切片机(西德)由吉林大学基础医学院病理实验室提供；低速自动平衡离心机(德国Hettich公司)；生物电放大器、压力换能器、十六导数据分析记录仪(澳大利亚埃德公司)；酶标仪(TECAN公司)。

1.2材料 丹参酮提取物、丹参总酚酸提取物、丹参自乳化微乳为实验室自制；水合氯醛购自河北高碑店市春光试剂厂，肝素钠注射液购自徐州万邦生化制药有限公司，橄榄油和乙醇为市售某品牌，生理盐水注射液从四平巨能药业有限公司购买。

1.3动物及造模、分组 健康Wistar大鼠120只，雌雄各半，体重220～250 g，购于吉林大学白求恩医学部基础动物实验室。正常喂养的10只作为空白组，灌胃1 ml/100 g空白自乳化微乳，每天1次。适应环境1 w后，皮下注射40%橄榄油稀释(CC14)0.5 ml/100 g，首次给予1 ml/100 g，以后改为0.5 ml/100 g，2次/w，5%～30%乙醇喂饮，56 d后，造模完成。

造模成功的大鼠随机分为4组，分别为模型组、心得安组、丹参高剂量组、丹参低剂量组，各8只。模型组灌胃1 ml/100 g空白自乳化微乳，每天1次。心得安组灌胃心得安2.7 mg/kg，每天1次。丹参高剂量组灌胃丹参酮ⅡA 6 mg/kg、丹酚酸B 18 mg/kg，每天1次。丹参低剂量组灌胃丹参酮ⅡA 3 mg/kg、丹酚酸B 9 mg/kg，每天1次。给药15 d后，分别对大鼠体重变化、脏器指数、门静脉压力、肝功能、肝硬化、抗氧化、羟脯氨酸(HyP)、一氧化氮(NO)、NO合酶(NOS)等指标进行测定。

1.4门静脉压力测定 大鼠禁食24 h，自由饮水。开始试验时，先采用10%水合三氯乙醛(0.3 ml/kg)，腹腔注射，麻醉大鼠。大鼠取仰卧位，大鼠腹壁正中线剪开长约2 cm“一”字形小口，打开腹腔，暴露门静脉，主干，分离出肠系膜上静脉，结扎远离门静脉一端，血管夹夹住近端，同样用膜状内翳剪于肠系膜上静脉上剪开一“V”形小缺口，暴露血管。接压力换能器，应用十六导生理记录仪，测定门静脉压力。

1.5肝功能检测 采用腹主动脉取血，血液放置30 min，以4 000 r/min离心，取血清100 μl置于EP管中，对肝功能指标测定。

1.6肝硬化指标测定 采用ELISA法测定肝硬化指标，操作方法按试剂盒说明进行操作，采用酶标仪进行测定。

1.7抗氧化指标及HyP、NO、NOS测定 采用ELAIA法，操作方法按试剂盒说明进行，采用酶标仪测定。

1.8统计学处理 采用SPSS13.0进行方差分析、t检验。

2 结 果

2.1体重变化 治疗期间，空白组和模型组体重变化较小。心得安组、丹参高剂量组和丹参低剂量组体重呈逐渐增长趋势。见表1。

表1 各组治疗后不同时间大鼠体重变化

2.2脏器指数测定结果 造模后，模型组肝脏指数和脾指数极显著升高(P<0.001)，胃指数显著升高(P<0.01)。与模型组比较，心得安、丹参高剂量、丹参低剂量组肝脏指数、脾指数显著降低，丹参高剂量组胃指数显著降低(P<0.01)。见表2。

表2 各组脏器指数

2.3门静脉压力测定结果 与空白组〔(2.12±0.38)mmHg〕比较，模型组门静脉压力〔(4.33±0.87)mmHg〕极显著升高(P<0.001)。与模型组比较，丹参高剂量和丹参低剂量组门静脉压力〔(2.89±0.83)、(3.14±0.67)mmHg〕显著降低(P<0.01)，心得安组门静脉压力〔(3.48±1.10)mmHg〕降低较小，无显著性。

2.4肝功能检测结果 与空白组比较，模型组胆碱酯酶、丙氨酸氨基转移酶和总胆红素显著增高(P<0.05,P<0.01)；碱性磷酸酶、天冬氨酸氨基转移酶、间接胆红素、总蛋白、白蛋白显著降低(P<0.01)。与模型组比较，心得安组碱性磷酸酶、天冬氨酸氨基转移酶、总蛋白显著增高(P<0.05)，直接胆红素显著降低(P<0.05)。丹参高剂量组胆碱酯酶、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素直接胆红素显著降低(P<0.05，P<0.01,P<0.001)，碱性磷酸酶、天冬氨酸氨基转移酶、间接胆红素、总蛋白、白蛋白显著升高(P<0.05,P<0.01)。丹参低剂量组丙氨酸氨基转移酶、直接胆红素显著降低(P<0.05),白球比、间接胆红素、总蛋白、白蛋白显著升高(P<0.05,P<0.01)。丹参高剂量药效优于心得安和丹参低剂量。见表3。

表3 各组肝功能检测结果

2.5肝硬化指标测定 模型组与空白组比较，肝硬化指标含量显著升高(P<0.01)。心得安、丹参高剂量、丹参低剂量组肝硬化指标明显改善，以丹参高剂量较好。见表4。

表4 各组肝硬化指标测定结果

2.6抗氧化指标测定结果 模型组与空白组比较，体内MDA含量显著升高(P<0.05)，SOD含量极显著降低(P<0.01)。心得安、丹参高剂量和丹参低剂量组较模型组MDA含量降低(P<0.05，P<0.01)，心得安、丹参高剂量组SOD显著升高(P<0.01,P<0.001)。见表5。

表5 各组抗氧化指标测定结果

2.7HyP测定结果 模型组HyP含量〔(371.0±107.1)ng/ml〕较空白组〔(253.91±19.22)ng/ml〕显著升高(P<0.01)。心得安、丹参高剂量和丹参低剂量组HyP水平〔(253.08±49.87)、(262.92±69.90)、(237.45±61.57)ng/ml〕较模型组显著降低(P<0.05)。

2.8NO、NOS测定结果 模型组与空白组比较，血清NO、NOS含量显著降低(P<0.001)。与模型组比较，心得安组和丹参低剂量组NO、NOS含量显著升高(P<0.05)，丹参高剂量组NO、NOS含量显著升高(P<0.01)。见表6。

表6 各组NO、NOS结果

3 讨 论

目前，国内外对门静脉高压的研究主要以手术治疗，对动物门静脉高压模型的研究较少，采用40%CC14皮下注射，可成功造成大鼠门静脉高压模型，方法较简单、经费少，且大鼠模型较好。本实验结果表明丹参自乳化微乳可显著降低门静脉高压。

丹参自乳化微乳可明显改善肝硬化指标，说明对肝硬化具有一定治疗作用，可改善肝功能。NO在体内可同时体现促氧化和抗氧化作用，而NOS主要参与调节血管张力和血流分布，同时可促进产生NO，本试验结果显示，大鼠造模后，血清中NO、NOS均极显著下降，给药后，二者含量有所提高，但未完全达到正常水平，丹参效果较心得安效果好。提示丹参降低门静脉高压作用可能与NOS水平升高有关。