Matriptase及HAI-1在子宫内膜癌中的表达及临床意义

熊丽丽 薛秀珍 段丽艳 蔡晓磊

河南科技大学第一附属医院(洛阳，471000)

子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，近年发病率呈年轻化趋势，严重威胁女性身心健康。深度探究子宫内膜癌分子水平的发生发展机制，是改善患者术后生活质量和进行靶向治疗的关键。近年来，研究发现新型Ⅱ型丝氨酸蛋白酶Matriptase及其同源性抑制物肝细胞生长因子活化因子抑制剂1(HAI-1)在多种上皮源性恶性肿瘤发生、发展及侵袭过程中相互作用[1]。鉴于此，结合子宫内膜癌同为上皮源性肿瘤的理论基础，推测Matriptase及HAI-1在子宫内膜癌中也可能表达异常，但相关的研究较少，尚无明确定论。本研究采用免疫组织化学方法检测子宫内膜癌组织中Matriptase及HAI-1的表达情况，结合子宫内膜癌的临床病理特征进行分析，以期为子宫内膜癌患者的预后及治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 标本来源及临床资料

选取 2016年1月—2018 年6月在本院病理科存档的内膜组织石蜡标本160例，术前未接受放、化疗及激素类药物治疗，无其他器官的原发恶性肿瘤。其中正常子宫内膜组，因子宫肌瘤行全子宫切除术，术后经病理确诊的正常子宫内膜组织40例，年龄(51.1±5.2)岁；不典型增生组，全子宫切除或子宫内膜电切术，术后经病理确诊为子宫内膜不典型增生50例，年龄(51.9±6.1)岁；子宫内膜癌组，术后病理确诊为子宫内膜癌组织70例，年龄(51.2±6.0)岁。按FIGO(2000)临床病理分期划分：Ⅰ期10例，Ⅱ期22例，Ⅲ期27例，Ⅳ期11例；组织学类型：腺癌65例，其他病理类型5例；组织学分级：高分化和中分化21例，低分化49例；有区域淋巴结转移33例，无淋巴结转移37例。

1.2 检测方法

采用免疫组织化学方法检测组织Matriptase及HAI-1的表达。制备石蜡切片，逐级脱蜡至蒸馏水，3% H2O2室温下浸泡8min，蒸馏水冲洗，抗原修复，抗体稀释液浓度均为1：100，DAB显色，苏木素复染，脱水透明，封片，光镜观察。所有操作均严格按照试剂盒说明书进行，免疫组织化学试剂盒(PV-9000)，DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，兔抗Matriptase及兔抗HAI-1单克隆抗体购于北京博奥森生物有限公司。

1.3 结果判定

Matriptase及HAI-1定位于细胞浆，呈浅黄色至棕黄色染色，采用IP评分方法，综合考虑染色强度和阳性细胞数：①染色强度计分，细胞浆无染色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分；②阳性细胞数计分，细胞浆无染色细胞计0分，细胞数<1%计1分，细胞数1%～10%计2分，细胞数11%～33% 计3分，细胞数34%～66%计4分，细胞数>66%计5分。染色强度计分及阳性细胞数计分之和即为总分，总分<2分为阴性，2～4分为低表达(+)，5～6分为中等表达(++)，7～8分为高表达(+ + +)。判定结果由两位病理学专家独立阅片确定。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0统计软件分析数据，样本率的比较用χ2检验及Fisher确切概率检验，等级资料采用非参数秩和检验，相关分析采用Spearman秩相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Matriptase及HAI-1在不同性质子宫内膜组织中的表达

Matriptase表达阳性率子宫内膜癌>不典型增生>正常子宫内膜，HAI-1表达阳性率子宫内膜癌<不典型增生<正常子宫内膜(P均<0.05)；3组间Matriptase及HAI-1的阳性表达情况构成比也不完全相同，子宫内膜癌组Matriptase表达(+++)所占比例(70%)高于正常子宫内膜组(40%)和不典型增生组(0)(P<0.001)，而正常子宫内膜组和不典型增生组无差异(P>0.05)；子宫内膜癌组HAI-1表达(+++)所占比例(2.9%)低于正常子宫内膜组(46.0%)和不典型增生组(92.5%)(P<0.001)，不典型增生组低于正常子宫内膜组(P<0.05)。见表1、图1、图2。

表1 Matriptase及HAI-1在不同性质子宫内膜组织中的表达(例)

图1 Matriptase在不同性质子宫内膜组织中的表达(×400)

图2 HAI-1在不同性质子宫内膜组织中的表达(×400)

2.2 Matriptase及HAI-1与子宫内膜癌临床病理特征关系

子宫内膜癌组织中，与组织高分化、无淋巴结转移及临床分期I-II期组织比较，组织低分化、有淋巴结转移及临床分期Ⅲ-Ⅳ期的组织中Matriptase阳性率明显较高，HAI-1阳性率明显较低(P<0.05)，其中临床分期I期与II期之间、Ⅲ期与Ⅳ期之间Matriptase及HAI-1阳性率无差异(P>0.05)；Matriptase及HAI-1的阳性率在患者年龄<50岁与≥50岁之间，以及腺癌与其他病理类型之间无差异(P>0.05)，见表2。

表2 Matriptase及HAI-1与子宫内膜癌临床及病理特征关系

2.3 子宫内膜癌组织中Matriptase与HAI-1表达相关性

所有病例中，子宫内膜癌组织中Matriptase及HAI-1表达均阳性者占所有病例的47.1%(33/70)，Matriptase阳性但HAI-1表达阴性占41.4%(29/70)；Spearman等级相关分析显示在子宫内膜癌组织中Matriptase与HAI-1的表达呈负相关(r=-0.485，P=0.008)。见表3。

表3 子宫内膜癌组织中Matriptase与HAI-1表达相关性(例)

3 讨论

子宫内膜癌的发生、发展及侵袭是一个复杂的病理过程，涉及多种蛋白酶，包括基质金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶等，新发现的Ⅱ型丝氨酸蛋白酶Matriptase具有很强的癌基因潜能，可以降解细胞外基质，参与细胞内外的信号传导，促进细胞生长分化，与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关[2]。HAI-1是丝氨酸蛋白抑制剂，与Matriptase共表达和定位在细胞膜上，通过阻碍Matriptase信号传递相关因子的激活而起到抑制Matriptase活性的作用，进而阻断肿瘤细胞生长、分化、浸润、血管形成和组织再生[3]。

有研究[4-5]表明与正常子宫内膜组织比较，子宫内膜癌组织中Matriptase显著高表达，而HAI-1显著低表达。这一结论也在细胞学研究中得到证实，有学者[6]应用PCR技术检测人子宫内膜癌细胞株中Matriptase及HAI-1的表达情况，发现Matriptase的高表达以及HAI-1的低表达或无表达，而经过转染HAI-1后发现HAI-1明显抑制matriptase。由于蛋白质表达的多态性以及实验方法差异，部分结论存在争议，主要表现在Matriptase及HAI-1在子宫内膜癌中异常表达是否与临床病理学特点存在相关性，有学者[7-8]认为子宫内膜癌临床分期与Matriptase表达呈正相关，与HAI-1的表达呈负相关，有淋巴结转移、组织低分化的子宫内膜癌中Matriptase阳性率明显升高，HAI-1的阳性率明显降低，故推测Matriptase高表达及HAI-1的低表达参与了子宫内膜癌的侵袭和转移。但也有研究[9-10]表明Matriptase及HAI-1表达异常程度与子宫内膜癌是否存在淋巴结转移无关，而与病理学类型相关。故关于Matriptase及HAI-1在子宫内膜癌组织的表达情况尚需进一步研究。

本研究采用免疫组织化学方法检测了Matriptase及HAI-1在不同组织中的表达情况，结果显示：Matriptase表达阳性率在子宫内膜癌中最高，HAI-1表达阳性率子宫内膜癌中表达最低，子宫内膜癌组Matriptase高表达所占比最高，HAI-1高表达所占比最低。值得一提的是，不典型增生组HAI-1高表达比例低于正常子宫内膜组，推测Matriptase高表达及HAI-1低表达在子宫内膜正常到癌变过程中发挥了重要作用。由于本研究中子宫内膜正常组Matriptase阳性仅有1例，故正常子宫内膜组和不典型增生组Matriptase阳性表达构成比无差异。Matriptase及HAI-1在子宫内膜癌组织中的表达异常与组织学分化、淋巴结转移以及临床分期有关，但与患者年龄以及病理类型无关，说明Matriptase的活性增强且HAI-1的抑制作用减弱还可能促进了子宫内膜癌的侵袭和转移。此外，本文还分析了子宫内膜癌组织中Matriptase与HAI-1表达的相关性，发现两者存在负相关，进一步证明了HAI-1是通过抑制Matriptase来发挥生物学作用的。

总之，子宫内膜癌组织中存在Matriptase的高表达及HAI-1的低表达，这种异常表达可能参与了子宫内膜癌的发生，有望作为判断子宫内膜癌患者预后标志物及治疗靶点。但本研究病例数较少，且未对患者随访，这将是下一步研究方向。