晚期非小细胞肺癌患者恶性肿瘤组织中定植菌群研究

宋国锋

[摘要] 目的 探討晚期非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）患者恶性肿瘤组织中定植菌群情况，分析气道定植菌群与NSCLC发生发展的关系。 方法 回顾性研究2017年1月～2018年10月我院行肺叶切除手术的NSCLC患者212例，肺癌标本采集于癌性病变部位及毗邻癌性病变的正常组织，分析细菌定植情况。根据是否存在定植菌群分为定植组32例和非定植组180例。对两组患者细菌取样培养和SP-D水平检测。 结果 NSCLC患者中有15.09%（32/212）患者存在定植菌群，而正常组织有3.77%（8/212）存在定植菌群，肺癌组织中定植菌发生率明显高于正常组织（P<0.05）。两组菌群分布以肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌多见。定植组SP-D水平明显高于非定植组（P<0.05）。相关性分析显示，血清SP-D水平与致病性定植菌发生呈正相关，相关系数为0.215（P=0.023）。术后定植组并发症发生率明显高于非定植组（P<0.05），而定植组以肺部感染为主要并发症，肺部感染发生率明显高于非定植组（P<0.05）。 结论 细菌定植与肺癌的发生具有一定的相关性，肺癌患者合并致病性定植菌与术后并发症发生密切相关，血清SP-D水平与患者术前致病菌定植状态相关。

[关键词] 非小细胞肺癌;肺组织;定植菌;血清SP-D

[中图分类号] R734.2;R563.1          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2020）16-0128-04

Study on colonizing flora in malignant tumor tissue of patients with advanced non-small cell lung cancer

SONG Guofeng

Department of Laboratory Medicine， Jiamusi Cancer Hospital in Heilongjiang Province， Jiamusi   154007， China

[Abstract] Objective To explore the colonizing flora of malignant tumor tissues in patients with advanced non-small cell lung cancer（NSCLC）， and to analyze the relationship between colonizing flora of airways and the occurrence and development of NSCLC. Methods A retrospective study  of 212 patients with NSCLC who underwent lobectomy in our hospital from January 2017 to October 2018 were collected. Lung cancer specimens were collected at the cancerous lesion and normal tissue adjacent to the cancerous lesion. The bacterial colonization was analyzed. According to the presence of colonizing bacteria， the patients were divided into  colonizing bacteria group（n=32） and non-colonizing bacteria group（n=180）. The bacteria sampling was cultured and SP-D level was detected in two groups. Results 15.09%（32/212） of NSCLC patients had colonizing flora， while 3.77%（8/212） of normal tissue had colonizing flora. The incidence of colonizing bacteria in lung cancer tissue was significantly higher than that of normal tissue（P<0.05）. The distribution of bacteria in the two groups was more common with Streptococcus pneumoniae and Klebsiella pneumoniae. The SP-D level in the colonizing-bacteria group was significantly higher than that in the non-colonizing bacteria group（P<0.05）. Correlation analysis showed that the serum SP-D level was positively correlated with the occurrence of pathogenic colonizing bacteria， with a correlation coefficient of 0.215（P=0.023）. The postoperative complications rate of colonizing-bacteria group were significantly higher than the non-colonizing bacteria group（P<0.05）. While the colonizing-bacteria group had lung infection as the main complication， and the incidence of lung infection in the colonizing-bacteria group was significantly higher than that of the non-colonizing bacteria group（P<0.05）. Conclusion Bacterial colonization has a certain correlation with the occurrence of lung cancer. Lung cancer combined with pathogenic colonization bacteria is closely related to postoperative complications. Serum SP-D level is related to the preoperative colonization status of pathogenic bacteria.

[Key words] Non-small cell lung cancer; Lung tissue; Colonizing bacteria; Serum SP-D

肺癌是我国高死亡率的恶性肿瘤之一[1]，近年来发病率持续攀升，发病年龄缩小，其中80%～85%为非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）[2]。NSCLC的发生是机体易感性与环境因素共同作用的结果[3]。近年来，随着分子生物学的发展，气道定植菌群作为重要环境因素在NSCLC发生、进展过程中的作用越来越受到重视[4]。目前，已有研究证实术前致病性气道细菌定植是导致术后肺部并发症的独立危险因素。但对于气道细菌定植与肺癌发生之间的关系探讨较少。为此，本研究探讨了晚期非小细胞肺癌患者恶性肿瘤组织中定植菌群情况，分析气道定植菌群与NSCLC发生发展的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

采用回顾性分析法，选取我院2017年1月～2018年10月诊治的212例NSCLC患者作为调查对象。其中男120例，女92例，平均年龄（52.94±8.47）岁，癌症类型：鳞癌118例，腺癌94例。临床分期：Ⅰ期80例，Ⅱ期132例。根据留取肺癌组织（肿瘤边缘1×1×1 cm3）是否存在定植菌群分为定植组32例和非定植组180例。纳入标准：（1）经影像学及病理学检查确诊为NSCLC者;（2）国际抗癌联盟2016年第8版肺癌TNM分期属于Ⅲ～Ⅳ期[5]，有手术指征者;（3）全胸腔镜/开胸肺叶切除术+系统淋巴结清扫者;（4）入院前4周未应用过抗生素药物者;（5）患者知情同意。排除标准：（1）已发生转移或伴有血液系统病、免疫系统疾病者;（2）全肺切除者;（3）合并有肺部感染者;（4）术中出血量≥1000 mL者;（5）有精神病或痴呆史者。

1.2 方法

患者均进行全胸腔镜/开胸肺叶切除手术。全胸腔镜肺叶切除患者手术方法为单向式胸腔镜肺叶切除法+系统淋巴结清扫。开胸患者应用常规后外侧切口，肺叶切除术+系统淋巴结清扫。系统淋巴结清扫左侧必须清扫第5、6、7、8、9、10组淋巴结，右侧包括第2、3、4、7、8、9、10组淋巴结。术后均应用镇痛泵进行止痛治疗，均早期促使患者下床活动，必要时应用非甾体类止痛药。镇痛泵于胸腔引流管拔除的同时也一起停止。两组患者均根据胸腔引流气体和液体量确定行胸部X线片检查。

1.3 观察指标

（1）定植菌鉴定：手术中分别留取肺癌组织（肿瘤边缘1×1×1 cm3）、正常组织（肉眼观远离癌组织的正常肺组织）。取细菌学标本，培养的合格样本按照标准流程预处理后，依次接种于血平板、中国蓝和巧克力平板中，在5%CO2、37℃箱内卵化18 h，卵化完成后记录菌落数量，并进行分离鉴定。采用P2000全自动细菌分析仪进行致病菌鉴定，质控菌株均来自中国微生物菌种保藏中心。质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 25923、粪肠球菌ATCC29212、大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603、铜绿假单胞菌ATCC27853。（2）SP-D水平变化：于清晨采集患者的静脉血液5 mL，3000 r/min离心分离，收集上清液，于-20℃保存备用，采用酶联免疫吸附法测定肺表面活性蛋白D含量（Surfactant protein，SP-D）水平，试剂盒购于上海通蔚试剂有限公司。比较两组研究对象SP-D水平变化。（3）术后并发症：记录定植组与非定植组患者术后并发症，包括乳糜胸、皮下气肿、胸腔积液/气胸、肺不张、声音嘶哑、肺部感染。

1.4 统计学方法

使用SPSS16.0统计学软件进行分析，计量资料用（x±s）表示，采用独立样本t检验或方差分析，计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验，样本在作t检验和方差分析前，均先作正态分析或方差齐性检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 正常组织与肺癌组织定植菌群特征比较

肺癌组织中定植菌发生率明显高于正常组织（P<0.05）。见表1。

2.2 正常組织与肺癌组织定植菌群分布比较

两组对象菌群分布以肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌多见。见表2。

2.3 两组血清SP-D水平比较

定植组SP-D水平明显高于非定植组（P<0.05）。相关性分析显示，血清SP-D水平与致病性定植菌发生呈正相关，相关系数为0.215（P=0.023）。见表3。

2.4 两组术后并发症发生率比较

术后定植组并发症发生率明显高于非定植组（P<0.05），而定植组以肺部感染为主要并发症，肺部感染发生率明显高于非定植组（P<0.05）。见表4。

3 讨论

国家癌症中心数据显示，2006～2011年我国肺癌患病率为130.2（1/10万），其中男性84.6（1/10万），女性45.6（1/10万），男性患病率居恶性肿瘤第2位，女性居第4位[7-9]。报道显示，在已明确诊断的肺癌患者中，约80%为NSCLC[10，11]。癌症的发生机制复杂，是多步骤、多途径的过程，也是机体内因与外界环境长期交互作用的结果[12，13]。近年来，随着分子生物学研究的进展，癌症患者相关组织内致病性细菌定植在其发生发展，尤其是并发症发生中的作用受到广泛关注[14，15]。国内外专家广泛探讨了肠道菌群与结直肠癌发生及进展的关系，结果发现，包括牛链球菌、梭状芽胞杆菌、幽门螺旋杆菌等与结直肠癌的发生及进展相关[16-18]。高珂等[19]研究显示，肺癌患者合并致病性气道定植菌与术后肺炎发生具有显著关系。彭武君等[20]报道显示，气道定植菌会增加肺癌患者术后肺部感染的几率，而这一现象在老年群体表现更加明显。

本研究探讨了晚期NSCLC患者恶性肿瘤组织中定植菌群的情况，结果显示NSCLC患者中有15.09%（32/212）患者存在定植菌群，肺癌组织中定植菌发生率明显高于正常组织（P<0.05），提示定植菌群的存在可能与肺癌的发生有一定相关性。定植菌群分布结果显示，肺癌组织与正常组织菌群分布以肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌多见。

肺表面活性蛋白（Surfactant protein，SP）是肺組织局部分泌的重要活性物质，其能够调节肺表面张力、促进蛋白酶与抑制剂之间的平衡，同时还可以抵抗病原体侵袭、炎性因子释放及氧化应激[21，22]。本研究结果显示，定植组SP-D水平明显高于非定植组（P<0.05）。而相关性分析显示，血清SP-D水平与致病性气道定植菌发生呈正相关，相关系数为0.215（P=0.023）。上述结果表明肺癌组织局部免疫功能的变化可能是导致细菌定植的原因之一。

NSCLC患者术后并发症的发生是影响患者预后及生活质量的重要因素，本研究结果显示，术后定植组并发症发生明显高于非定植组（P<0.05），而定植组以肺部感染为主要并发症，肺部感染发生率明显高于非定植组（P<0.05），这可能是由于定植菌是肺部感染发生的重要因素，同时可诱发多种并发症，不仅影响手术效果，还对患者的预后产生不利影响。这与高珂等[19]研究结果一致。

综上所述，细菌定植与肺癌的发生具有一定的相关性，肺癌患者合并致病性定植菌与术后并发症发生密切相关，血清SP-D水平与患者术前致病菌定植状态相关。但本研究尚存在一定的不足，如未对影响定植菌群的因素进行单因素及多因素分析，需在今后的研究中不断完善，以更好地为临床提供参考。

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（收稿日期：2020-03-17）