血浆miR-1290表达水平对口腔鳞状细胞癌患者预后预测的价值

陈秀敏 刘族志 林建能

儋州市人民医院口腔科，儋州 571799

口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是一种常见的口腔恶性肿瘤，近年来OSCC的治疗取得了很大的进展，但其致死率仍然居高不下[1]。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）作为一种内源性、非编码小分子RNA，参与肿瘤细胞增殖、分化、凋亡、浸润及转移等过程，在OSCC的发生发展中起到重要的作用[2]。近年来研究[3]发现，miR-1290在OSCC患者中异常表达，能通过调控多种信号通路参与OSCC的发生发展，并可能成为治疗OSCC的一个新靶点。本研究通过检测OSCC患者血浆miR-1290表达水平，分析其表达与OSCC患者预后的关系，旨在为OSCC患者的预后预测及靶向治疗提供参考依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2014年1月1日—2018年12月31日儋州市人民医院收治的OSCC患者70例，其中男性46例，女性24例，年龄38～73岁，平均年龄（57.40±8.26）岁。纳入标准：1）手术切除并经病理检查证实为原发性OSCC患者；2）初次确诊，且临床资料完整者。排除标准：1）病例资料不完整者；2）术前已行放疗、化疗或生物免疫治疗者；3）术前有感染性疾病、自身免疫性疾病及合并其他恶性肿瘤者。另选取同期来儋州市人民医院健康体检的正常者40例作为对照组，其中男性26例，女性14例，年龄40～72岁，平均年龄（56.80±8.15）岁。2组性别、年龄及体质指数等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），组间具有可比性。

1.2 方法

采用前瞻性研究方法，通过电话或门诊等方式对70例OSCC患者进行随访，随访起始于术后第1天，截止时间为2019年10月31日。随诊间隔时间为3个月。总生存时间定义为术后第1天至患者死亡的时间。无进展生存时间定义为术后第1天起，未发生复发、原发器官肿瘤转移及其他原因引起死亡的时间。纳入本研究的变量包括患者年龄、性别、吸烟情况、临床分期、分化程度、肿瘤直径、肿瘤位置及淋巴转移等情况。

1.3 血浆miR-1290检测

所有的患者均于术前抽取空腹静脉血3 mL置于乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝管中，离心分离血浆，-80 ℃低温冰箱保存待测。以U6为实验内参在ABI 7500型荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）仪（ABI公司，美国）上进行实时荧光定量PCR。反应体系为20 μL：1 μL引物及探针Mix（20×），10 μL TaqMan通用混合物溶液（2×），1.33 μL反转录产物cDNA，7.67 μL无核酸酶的水。扩增条件为：95 ℃10 min 1个循环，95 ℃ 15 s、60 ℃ 60 s进行45个循环，实验重复3次。每个反应体系中荧光信号达到所设定阈值所经历的循环数即为Ct值，采用2-ΔΔCt法计算miR-1290的表达水平，其中ΔCt=Ct目的基因-CtU6。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析，所有连续变量均通过正态性检验和方差齐性检验，符合正态分布的计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用独立样本t检验。计数资料组间比较采用χ2检验。单因素生存分析应用Kaplan-Meier法，组间比较行Log-rank检验，多因素生存分析应用COX回归分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 OSCC组和对照组血浆miR-1290表达水平比较

OSCC组血浆miR-1290表达水平（0.65±0.14）明显低于对照组（2.06±0.90），二者间差异有统计学意义（t=13.912，P＜0.001）。

2.2 血浆miR-1290用于诊断OSCC的最佳界值

血浆miR-1290用于诊断OSCC的最佳界值为1.14，曲线下面积（area under curve，AUC）为0.895（95%CI：0.837～0.958），其敏感度和特异度为89.2%和85.0%。

2.3 血浆miR-1290表达水平与OSCC患者的临床病理特征比较

以miR-1290=1.14为界值，将70例OSCC患者分为高miR-1290组（miR-1290≥1.14，n=31）和低miR-1290组（miR-1290＜1.14，n=39）。高miR-1290组与低miR-1290组临床分期、分化程度、肿瘤直径及淋巴结转移相比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。2组的性别、年龄、吸烟、饮酒情况及肿瘤位置相比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表1）。

2.4 血浆miR-1290表达水平与OSCC患者预后不良的关系

70例OSCC患者中有2例失访，随访率为97.1%（68/70），随访时间9～65个月，中位随访时间29.50个月。生存分析显示，低miR-1290组患者（42.8%）的总生存率明显低于高miR-1290组（63.5%），差异有统计学意义（Log-rank χ2=9.715，P＜0.01）（图1）。低miR-1290组患者（24.6%）无进展生存率明显低于高miR-1290组（53.7%），差异有统计学意义（Log-rankχ2=12.805，P＜0.01）（图2）。将单因素分析中有统计学意义的因素调入COX回归分析模型，结果显示临床分期、淋巴结转移及血浆miR-1290＜1.14是影响OSCC患者预后不良的独立危险因素[危险度（hazard，HR）（95%CI）=2.402（1.806～4.520）、2.627（1.984～5.940）、2.738（2.152～6.117）]（表2）。

表1 血浆miR-1290表达水平与OSCC患者的临床病理特征比较Tab 1 Comparison of the expression level of plasma miR-1290 with the clinicopathological characteristics of OSCC patients

图1 高miR-1290组与低miR-1290组OSCC患者总生存率比较Fig 1 Comparison of overall survival rate of OSCC patients in high and low miR-1290 groups

3 讨论

miRNA是一种内源性非编码蛋白质的小分子RNA，与靶mRNA分子结合后可以使mRNA降解并抑制蛋白质翻译，进而调控靶基因的表达，在细胞增殖、凋亡、侵袭和转移等生物学行为中起重要作用[4]。有研究[5-6]表明，miRNA在OSCC组织和血液中存在异常表达，不同种类的miRNA通过不同调控机制来发挥功能，在口腔癌的进展过程中miRNA的表达水平随之变化，有望作为OSCC诊断和预后的重要生物学评价指标。

图2 高miR-1290组与低miR-1290组OSCC患者无进展生存率比较Fig 2 Comparison of progression-free survival rate of OSCC patients in high and low miR-1290 groups

Schneider等[7]研究认为，多种miRNA在OSCC中异常表达，其通过抑制凋亡，促进细胞增殖、肿瘤的非依赖性生长、迁移及侵袭等，对OSCC的恶性生物学行为发挥重要的调控作用。miR-1290调控癌基因作用包括两方面：当激活癌基因时，可引起癌基因蛋白质产物的过量表达，促进癌变过程；当抑制癌基因时，可促进肿瘤细胞的凋亡，从而达到抑制肿瘤的目的，其异常表达参与了信号激活、细胞增殖和分化、血管形成和侵袭转移等生物学过程，可以作为肝癌和食管鳞癌诊断及预后预测的生物标志物[8-9]。因此，研究miR-1290在OSCC患者中的表达情况，对OSCC预后判断及靶向治疗具有重要的意义。

表2 影响OSCC患者预后不良的单因素及多因素COX回归分析Tab 2 Univariate and multivariate COX regression analysis of poor prognosis in OSCC patients

本研究显示，OSCC组血浆miR-1290表达明显低于对照组，提示miR-1290可能具有抑癌基因的作用，其表达下调可能参与OSCC的发生发展。本研究随着临床分期增加、分化程度越来越差及有淋巴结转移的OSCC患者，血浆miR-1290表达水平均明显降低，说明miR-1290低表达与OSCC患者较差的临床病理特征有关，miR-1290在OSCC中发挥抑癌基因功能，其低表达可导致一系列靶向的癌基因过度激活，从而参与OSCC的发生发展。Chen等[10]研究显示，与正常对照组相比，OSCC患者血清miR-99a表达明显降低，低miR-99a表达的OSCC患者更常出现分化不良和临床晚期，其总体生存期较短，可能是预测OSCC患者预后的一个有价值的标志物。Sun等[11]研究发现，OSCC患者血清miR-9表达水平明显下降，且与多种临床病理参数如临床分期及淋巴结转移显著相关，可作为预测OSCC患者病情进展和预后的独立因素。本研究进一步探讨miR-1290对OSCC患者预后的临床价值，并分析OSCC患者miR-1290表达水平与生存时间之间的关系，结果显示低miR-1290组患者总生存率和无进展生存率明显低于高miR-1290组，说明miR-1290低表达与OSCC患者生存期短有关。本研究多因素COX回归模型分析显示，临床分期、淋巴结转移及血浆miR-1290＜1.14是影响OSCC患者预后不良的独立危险因素，其中miR-1290＜1.14的HR（2.738，95%CI：2.152～6.117）最大，提示miR-1290＜1.14预测OSCC患者预后不良具有较高的价值。Shi等[12]通过多变量分析发现，miRNA是预测OSCC患者生存的独立因素，与传统的临床病理因素如病理分级及淋巴结转移（TNM）分期相比，具有更高的预测价值，并可能作为一个有前途的预后预测因子。另有研究[13]表明，血浆miRNA表达下调与OSCC患者的临床特征及与术后复发显著相关，有望作为预测OSCC患者预后不良的生物标志物。

综上所述，OSCC患者血浆miR-1290表达水平明显降低，临床分期、淋巴结转移及血浆miR-1290＜1.14是影响OSCC患者预后不良的独立危险因素，miR-1290可能是预测OSCC预后不良的潜在标志物。但这些研究仍处于初步探索阶段，未来仍需更多的多中心、大样本的临床研究来进一步探讨。

利益冲突声明：作者声明本文无利益冲突。