CD56、CK19、Galectin-3和TPO的联合检测在甲状腺乳头状癌中的应用

郑诣 唐玉娴

甲状腺癌是内分泌系统和头颈部肿瘤中常见的恶性肿瘤，近年来其发病率呈逐年升高的趋势[1]。甲状腺癌的主要病理分型为乳头状癌和滤泡状癌，其中约85%为甲状腺乳头状癌，可在任何年龄段发病，常见于儿童和年轻女性[2]。其病理诊断主要依赖于组织形态学及细胞核特点的特征，如乳头状结构、核沟、核内假包涵体、毛玻璃样核等，但是一些无典型特征的早期甲状腺乳头状癌或类似甲状腺乳头状癌样的真乳头状结构的良性甲状腺病变的出现可能出现漏诊或误诊的情况，因此临床上需要寻求一些特异性的标记物来辅助甲状腺乳头状癌的诊断。本研究采用免疫组化方法检测CD56、CK19、Galectin-3和TPO的表达情况，探究和分析其在甲状腺乳头状癌中的诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年10月—2019年9月期间我院收治497例甲状腺切除术患者的病理标本作为研究对象，其中男性93例，女性404例，年龄20～72岁，平均（43.6±10.1）岁。根据WHO内分泌腺肿瘤分类标准诊断为甲状腺乳头状癌的有103例，良性甲状腺肿瘤的有394例。甲状腺乳头状癌组中男性18例，女性85例，年龄20～72岁，平均（44.1±10.3）岁，良性甲状腺肿瘤组中男性75例，女性319例，年龄20～72岁，平均（43.1±9.9）岁。两组患者的性别和年龄比较其差异无统计学意义（P＞0.05），具有临床可比性。

1.2 方法

采用免疫组化SP（streptavidin-perosidase）法检测CD56、CK19、Galectin-3和TPO的表达情况，将患者手术切除的甲状腺标本用10%中性缓冲福尔马林固定，进行常规组织处理，石蜡包埋后以4 μm连续切片。采用CD56、CK19、Galectin-3和TPO抗体进行染色，根据试剂的说明书进行操作，阴性对照为磷酸缓冲盐溶液，已知阳性切片作为阳性对照。CD56、CK19、Galectin-3和TPO抗体均为鼠抗人抗体，购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 判定标准

采用双盲法，有两位病理诊断医生独立阅片，观察10个高倍视野计数1 000个细胞，进行免疫组化结果评估，两者均值为样本的最终结果。CD56阳性定位于细胞膜和（或）细胞质，CK19阳性定位于细胞质，Galectin-3定位与细胞浆，部分细胞核亦着色，TPO阳性定位于细胞质和细胞膜，阳性物质均为棕黄色。染色结果按阳性细胞占肿瘤细胞的百分比判定：阴性（-）为阳性细胞≤10%；弱阳（+）为阳性细胞11%～25%；中阳性（++）为阳性细胞26%～50%；强阳性（+++）为阳性细胞＞50%。串联联合检测标准：所有的诊断方法均诊断为甲状腺乳头状癌即为阳性，如有一项或一项以上不能诊断即为阴性；并联联合检测标准：只要有一项或一项以上能诊断为甲状腺乳头状癌即为阳性，如均不能诊断才为阴性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0统计软件进行统计学分析。计量资料用（±s）表示，组间比较用t检验；计数资料用（%）表示，组间比较用χ2检验。灵敏度＝真阳性/（真阳性+假阴性），特异性＝真阴性/（真阴性+假阳性），准确度＝（真阳性+真阴性）/（所有阳性+所有阴性），P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 患者CD56免疫组化的表达情况

CD56在甲状腺乳头状癌中的阳性率为7.69%，在良性甲状腺肿瘤中的阳性率为93.06%。CD56在两组患者之间的表达差异存在统计学意义，甲状腺乳头状癌中的CD56表达明显低于良性甲状腺肿瘤（P＜0.05）。见表1。

2.2 患者CK19免疫组化的表达情况

CD19在甲状腺乳头状癌中的阳性率为92.23%，在良性甲状腺肿瘤中的阳性率为57.36%。CD19在两组患者之间的表达存在显著统计学差异，甲状腺乳头状癌中的CD19表达显著高于良性甲状腺肿瘤（P＜0.05）。见表2。

2.3 患者Galectin-3免疫组化的表达情况

Galectin-3在甲状腺乳头状癌中的阳性率为96.12%，在良性甲状腺肿瘤中的阳性率为16.75%。Galectin-3在两组患者之间的表达差异存在统计学意义，甲状腺乳头状癌中的Galectin-3表达显著高于良性甲状腺肿瘤（P＜0.05）。见表3。

2.4 患者TPO免疫组化的表达情况

TPO在甲状腺乳头状癌中的阳性率为11.65%，在良性甲状腺肿瘤中的阳性率为82.74%。TPO在两组患者之间的表达差异存在统计学意义，甲状腺乳头状癌中的TPO表达显著低于良性甲状腺肿瘤（P＜0.05）。见表4。

2.5 单项检测与联合检测的诊断价值比较

根据上述结果显示，甲状腺乳头状癌多数呈CK19和CD56阳性和（或）CD56和TPO阴性，以此作为甲状腺乳头状癌诊断标准进行分子标志物诊断价值比较。单项检测结果显示，CD56的灵敏度最高，TPO的特异度最好。串联联合检测时CK19表达阳性、Galectin-3表达阳性、CD56表达阴性、TPO表达阴性这四项同时达标才可诊断为甲状腺乳头状癌；并联联合检测时CK19表达阳性、Galectin-3表达阳性、CD56表达阴性、TPO表达阴性中有一项达标即诊断为甲状腺乳头状癌。联合检测结果显示，串联检测诊断的灵敏度、特异度和准确度均高于各项检测；并联检测时，灵敏度虽高于各单项检测，特异度和准确度却低于各单项检测。见表5。

表1 两组患者CD56免疫组化表达情况比较

表2 两组患者CD19免疫组化表达情况比较

3 讨论

甲状腺乳头状癌起病隐匿，最初仅表现为可触及的无痛性甲状腺结节，目前临床主要采用触诊、组织病理学检查、超声检查、细针穿刺细胞学活检、反射性核素扫描等[3]。但上述方法均存在一定程度的缺陷，如触诊和超声检查漏诊和误诊率较高，且无法分辨肿瘤的病理类型；细针穿刺细胞学检查虽灵敏度和准确度较高，但仍会有一部分患者无法确定良恶性；放射性核素扫描具有一定的辐射影响，部分患者难以接受；在甲状腺病变的临床病理诊断中，常规手段难以鉴别一些非典型的病变，如在甲状腺肿瘤的病理诊断中HE染色法并不绝对可靠，存在灵敏度和特异度较低的缺陷，尤其是在甲状腺乳头状癌与腺瘤和乳头增生的鉴别诊断上存在较大的困难[4]。目前病理检验关注的焦点在于甲状腺癌上具有较高的特异性的分子标志物，并通过检测其表达情况来辅助诊断甲状腺乳头状癌。

表3 两组患者Galectin-3免疫组化表达情况比较

表4 两组患者Galectin-3免疫组化表达情况比较

表5 单项检测与联合检测的诊断价值比较（%）

CD56属于免疫球蛋白家族，是一种细胞表面唾液酸糖蛋白，又称为神经细胞黏附分子（N-CAM）。CD56在自然杀伤细胞、肌细胞以及浆液黏液腺有正常表达，也在自然杀伤细胞淋巴瘤、神经内分泌瘤以及皮肤T细胞淋巴瘤有表达，其表达在一定程度上会影响肿瘤细胞的繁殖和肿瘤相关淋巴管生成。有研究表明，CD56在正常甲状腺组织、结节性甲状腺肿、滤泡性腺瘤和乳头状增生中高表达，而在甲状腺乳头状癌中失表达或呈灶性弱表达[5]。CK19常见于正常上皮细胞及各种上皮尤其是单层上皮和间皮来源的肿瘤，是一种低分子量的细胞角蛋白，现已广泛应用于甲状腺良恶性疾病的鉴别诊断中[6]。有关研究表明[7]，CK19在甲状腺乳头状癌中主要呈弥漫性强阳性表达，而在其他甲状腺乳头状增生中多呈阴性表达，即使表达也多为弱阳性表达，可见CK19在甲状腺乳头状癌与乳头状增生鉴别诊断中的重要价值。Galectin-3是（半乳糖结合蛋白，属于植物凝集素蛋白家族的成员之一，通过与特异性配体结合来调控甲状腺细胞的黏附、浸润、转移、增殖、凋亡等生物学行为，具有重要的生理作用，广泛表达于正常组织以及肿瘤组织中[8]。目前国内外多项研究[9-13]显示Galectin-3在甲状腺癌中的阳性表达率显著高于良性甲状腺病变。TPO其化学本质是一种糖基化血红蛋白，合成于甲状腺滤泡细胞，位于甲状腺细胞的内质网、核周膜及顶膜，是合成甲状腺激素的关键酶。在正常、炎性病变和良性肿瘤中的滤泡上皮均可见TPO的弥漫性表达，多项研究表明甲状腺恶性肿瘤中TPO呈低表达或失表达[14]。在本研究中CD56、CK19、Galectin-3和TPO在甲状腺乳头状癌和良性甲状腺肿瘤中的表达差异均存在统计学意义（P＜0.05），CD56和TPO在甲状腺乳头状癌中失表达或低表达，而在良性甲状腺肿瘤中高表达；CK19 和Galectin-3在甲状腺乳头状癌中多数呈强阳性的高表达，而在良性甲状腺肿瘤中失表达或低表达。各项分子的标志在甲状腺疾病中的表达情况与目前已发表的研究结果一致。在单项检测中CD56诊断的灵敏度最高，CD56诊断的特异度最高，四项联合检测时串联检测诊断的灵敏度、特异度和准确度均高于各项检测；并联检测时，灵敏度虽高于各单项检测，特异度和准确度却低于各单项检测。因此在临床工作中，可采用四项分析标记物串联联合检测提高甲状腺乳头状癌的诊断效率。

综上所述，CD56、CK19、Galectin-3和TPO可作为甲状腺乳头状癌的有效指标，并采用串联联合检测诊断提高其诊断价值。因此在临床病例形态不典型时，可通过检测CD56、CK19、Galectin-3和TPO等分子标志物或采用合适的联合诊断方案辅助甲状腺乳头状癌的诊断，提高其诊断灵敏度、特异度和准确度。