木脂素类中药镇静催眠作用筛选比较※

宋美卿，贾力莉，牛艳艳，杨 钤，赖永健，冯玛莉

(山西省中医药研究院，山西 太原030012)

失眠症通常指睡眠时间和/或质量不能满足患者身体需求而使其日间生活和工作受到影响的一种病证，以经常出现睡眠障碍为主要特征。西医治疗失眠主要以西药为主，存在远期疗效不佳、不良反应大、易反复发作等缺点。中医治疗失眠具有独特优势，通过内服中药或复方有效改善失眠症状，不良反应少，远期疗效好。中药药理学研究表明，五味子木脂素类化合物具有明显的镇静催眠作用[1]。本研究探究连翘、牛蒡子、五味子、细辛、厚朴、栀子、党参、杜仲8种木脂素类中药的镇静催眠作用，以期为中药治疗失眠的新药研发提供基础理论参考。

1 实验材料

1.1 药物与试剂 连翘、牛蒡子、五味子、细辛、厚朴、栀子、党参片、杜仲均取自山西省中医药研究院草药房，且经山西省药品检验所标本室鉴定。地西泮片(上海上药信谊药厂有限公司，批号14161201T)；戊巴比妥钠(国药集团化学试剂有限公司，批号 WS20050411)；吐温-80(上海国药试剂集团，批号20160623)；95%乙醇分析纯AR(国家集团化学试剂有限公司，批号20170323)。

1.2 仪器 ZZ-6小鼠自主活动仪(成都泰盟科技有限公司)；BP-310S电子天平(德国赛多利斯)；HX-200型高速中药粉碎机(浙江省永康市溪岸五金药具厂)；HH数显三用恒温水箱(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂)。

1.3 动物 SPF级KM种小鼠140只，雌雄各半，体质量18～22 g，由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，许可证号为SCXK(京)2004-0001，编号0089322。

2 方法

2.1 中药提取物制备 上述8种中药饮片各30 g，分别用粉碎机粉碎成粗粉，每组中药粗粉加95%乙醇溶液120 mL，加热、回流、过滤2次，每次1.5 h，合并滤液，蒸发浓缩至稠膏且无醇味，称膏重，计算出膏率。各中药出膏率：连翘34.9%，牛蒡子17.4%，五味子32.5%，细辛8.3%，厚朴16.2%，栀子24.1%，党参片38.4%，杜仲11.6%。

2.2 动物分组及给药 将140只小鼠随机分为10组(空白对照组、地西泮片组、连翘组、牛蒡子组、五味子组、细辛组、厚朴组、栀子组、党参片组、杜仲组)，每组14只，空白对照组给予2%吐温-80。各组给药量按照《中华人民共和国药典》2015版生药人均最大用量的20倍取膏，用2%吐温-80充分溶解后备用。各组小鼠给药剂量：空白对照组0.003 g/kg，地西泮片组0.003 g/kg，连翘组1.746 g/kg，牛蒡子组0.696 g/kg，五味子组0.650 g/kg，细辛组0.088 g/kg，厚朴组0.538 g/kg，栀子组0.802 g/kg，党参片组3.838 g/kg，杜仲组0.386 g/kg。每日1次，连续3 d，灌胃容积20 mL/kg。

3 疗效观察

3.1 检测指标 ①小鼠自主活动。第2次给药1 h后，采用小鼠自主活动仪记录小鼠放入仪器暗箱后5 min内的站立次数和活动次数[2-3]。②戊巴比妥钠催眠后的入睡潜伏期和持续睡眠时间。第3次给药1 h后，每组小鼠给予戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射，以小鼠背向下姿势保持30 s以上，判断为翻正反射消失，记录入睡潜伏期(从注射戊巴比妥钠后至小鼠翻正反射消失时间)，并记录持续睡眠时间(翻正反射消失至觉醒的时间)[2-3]。

3.2 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件处理数据。计量资料以均数±标准差(±s)表示，多组间数据采用单因素方差分析，组间比较采用LSD-t检验；方差不齐采用数据转换形式，转换后的数据采用t′检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

3 结果

(1)小鼠站立、活动次数比较 第2次给药1 h后小鼠站立次数比较，地西泮片组、细辛组明显低于空白对照组(P＜0.05)，牛蒡子组、厚朴组、党参片组、杜仲组明显高于地西泮片组(P＜0.05)；第2次给药1 h后小鼠活动次数比较，党参片组、杜仲组明显多于空白对照组(P＜0.05)；连翘、栀子组活动次数明显低于地西泮片组(P＜0.05)，差异均有统计学意义。见表1。

表1 10组KM小鼠第2次给药1 h后站立、活动次数比较(次，±s)

表1 10组KM小鼠第2次给药1 h后站立、活动次数比较(次，±s)

注：与空白对照组比较，▲P＜0.05；与地西泮片组比较，△P＜0.05。

组别 只数 站立次数(次) 活动次数(次)连翘组 14 31.70±16.90 5.50±3.85△牛蒡子组 14 44.20±19.60△ 9.00±6.90细辛组 14 25.70±21.90▲ 10.30±5.71厚朴组 14 44.00±19.10△ 10.20±4.57党参片组 14 53.20±14.00△ 13.00±4.75▲杜仲组 14 45.50±20.60△ 12.50±4.54▲栀子组 14 37.30±23.80 5.00±3.85△五味子组 14 32.20±28.40 7.00±3.94地西泮片组 14 26.00±14.70▲ 11.30±4.03空白对照组 14 44.20±18.30 7.50±4.62

(2)小鼠入睡潜伏期、持续睡眠时间比较 第3次给药1 h后小鼠入睡潜伏期比较，地西泮片组短于空白对照组(P＜0.05)，连翘组、细辛组、党参片组、杜仲组、栀子组、五味子组均长于地西泮片组(P＜0.05)；第3次给药1 h后小鼠持续睡眠时间比较，地西泮片组、五味子组、栀子组、厚朴组、细辛组均长于空白对照组(P＜0.05)，连翘组短于空白对照组(P＜0.05)，连翘组、牛蒡子组、细辛组、厚朴组、党参片组、杜仲组、栀子组均短于地西泮片组(P＜0.05)，差异均有统计学意义。见表2。

表2 10组KM小鼠第3次给药1 h后小鼠入睡潜伏期、持续睡眠时间比较(min，±s)

表2 10组KM小鼠第3次给药1 h后小鼠入睡潜伏期、持续睡眠时间比较(min，±s)

注：与空白对照组比较，▲P＜0.05；与地西泮片组比较，△P＜0.05。

组别 只数 入睡潜伏期(min) 持续睡眠时间(min)连翘组 14 4.89±0.63△ 14±10△▲牛蒡子组 14 3.72±1.17 89±56△细辛组 14 6.67±8.81△ 193±135△▲厚朴组 14 3.79±1.35 179±129△▲党参片组 14 6.19±3.06△ 76±90△杜仲组 14 4.09±0.71△ 148±105△栀子组 14 5.33±1.78△ 169±103△▲五味子组 14 4.93±3.77△ 286±129▲地西泮片组 14 2.88±1.38▲ 382±84▲空白对照组 14 4.91±1.21 78±49

4 讨论

失眠是一种常见病，长期失眠不仅损害人的思维活动，甚至会影响人的免疫系统。西医常用镇静催眠药物治疗失眠。研究表明，约44%的失眠患者有长期服用苯二氮类和巴比妥类药物史，此类药物具有不良反应大、成瘾性等问题[4]。五味子具有镇静催眠和抗惊厥作用，其作用除与木脂素有关，还与五仁醇、五味子醇甲、醇乙等成分有关[5]。木脂素为脂溶性，可用亲脂性有机溶剂提取。因亲脂性、极性小的药物易由血液进入血脑屏障发挥药理作用[6]，本研究根据药物“相似相溶”原理选用极性小的95%乙醇溶液对含木脂素类中药进行回流提取，对提取物进行镇静催眠实验研究。

本研究结果表明，8种含木脂素类中药镇静催眠作用不同，五味子镇静催眠作用最强，其次为细辛、厚朴、栀子，但细辛、厚朴、栀子等中药具有催眠作用的活性成分尚待进一步研究。相关研究表明，细辛主要成分为细辛挥发油，具有镇静催眠、抗惊厥作用，而木脂素类化合物含量较少[7]；栀子中含有大量环烯醚萜类化合物和少量香豆素、木脂素、挥发油等，超临界CO2萃取的栀子油具有镇静、催眠、抗惊厥及促学习记忆的作用[8]。厚朴主要成分为新木脂素，包括厚朴酚与和厚朴酚，具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗凝血、抗溃疡、对心脑系统有保护等作用[9]，其催眠作用多是与其他药物配合产生的，单味药的催眠作用还有待进一步研究。