骨髓细胞形态学联合细胞化学染色检测在神经母细胞瘤诊断中的应用①

周明晓

(河南省郑州市第二人民医院检验科，河南 郑州 450006)

神经母细胞瘤是一种常见的儿童恶性实体肿瘤，在新生儿时期就可发病，在发病早期就可能会出现转移，对于患病儿童的生命安全具有严重威胁，近年来，临床上其发病率表现为逐年增加的趋势，分析其临床特点，其转移部位与原发灶大小没有直接关系，常会出现皮肤、眼眶、骨髓、淋巴结、骨等部位的转移，由于其发病早期存在一定的隐匿性特点，导致其早期诊断工作面临着较大难度[1]。其中神经母细胞瘤的骨髓转移非常常见，这会对其预后产生严重影响，随着临床上强化其治疗方法，最终取得的临床疗效也进一步提升，很多病例在接受标准化治疗之后，骨髓辨病逐渐消失，取得明显疗效，但是还有一些患者虽然在经过治疗之后骨髓神经母细胞瘤已经消失，但是最终还是导致骨髓复发，这可能是因为诊断及治疗过程中的检测方法灵敏度不能满足实际需求，这也提示，保证神经母细胞瘤诊断方法的准确性、灵敏度非常必要[2]。骨髓细胞形态学检查是神经母细胞瘤最为直观、基础的检查方法，是血液病临床诊断时不可或缺的诊断方法，但是对于很小的病灶还是会存在误诊现象。鉴于此，本文就主要对骨髓细胞形态学联合细胞化学染色检测在神经母细胞瘤诊断中的应用价值予以探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取我院2018-02～2018-07收治的神经母细胞瘤患者40例为观察组，并选择同期在我院开展治疗的非神经母细胞瘤患者40例为对照组。其中对照组中包含男女患儿各为14例、26例，年龄0.5～12岁，平均(3.2±0.8)岁，所有患儿均为F3抗体阴性；观察组所选40例患儿均为F3抗体阳性，男女患儿各为16例、24例，年龄0.6～11岁，平均(3.6±0.7)岁。两组患儿一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

两组患儿均开展骨髓细胞形态学联合细胞化学染色检测。骨髓细胞是通过骨髓穿刺的方法获得，采用淋巴分层液分离细胞制作血细胞涂片，并借助于甩片机甩片。应用常规的瑞氏染色法进行检测，具体方法为：(1)严格参照骨髓细胞形态学检查质量控制要求，选用经验丰富的检验人员开展显微镜检，开展染色过程中由阳性、阴性质控涂片作为对照，原始细胞在油镜下进行观察，所得结果要结合胞质中的颜色与颗粒来进行划分；(2)糖原(PAS)染色，应用乙醇将新鲜干燥的涂片进行10min固定之后水洗处理，待干之后应用过碘酸液水洗20min，待干之后应用雪夫液染色30min，之后采用亚硫酸液进行冲洗，再应用水冲洗待干，复染水洗待干之后实施镜检[3]；(3)碱性磷酸酶(NAP)染色，采用浓度为10%的甲醛甲醇固定液处理30秒之后进行水洗，待干之后将涂片浸入到基质孵育液当中，水洗待干之后实施镜检；(4)过氧化物酶(POX)染色，采用戊二醛-丙酮进行固定，水冲之后加入反应液，室温下放置10min，水洗之后再实施染色，并在水洗干燥之后实施镜检；(5)单克隆抗体与神经母细胞瘤细胞反应法，借助于单克隆F3荧光标记对羊抗属免疫球蛋白实施免疫荧光染色处理[4]。

1.3 观察指标

细胞化学染色的阳性判定标准为：(1)PAS染色，主要判定标准为油镜下观察200个原始细胞胞质中的颜色与颗粒数，若颗粒表现为紫红色块状或者是红色粗大颗粒则为强阳性；若颗粒染色较深表现为紫红色则为阳性；若颗粒表现为弥散性浅粉色则为弱阳性；若是没有颗粒则为阴性[5]；(2)NAS染色，若是没有颗粒则为阴性，若是稍有颗粒则为弱阳性，若是存在略粗密集的颗粒则为阳性，若是存在粗大颗粒且布满整个胞质当中则为强阳性；(3)POX染色，若是没有颗粒则为阴性，若是存在比较小、分布稀疏的颗粒则为弱阳性；若是存在蓝黑色或者是蓝色颗粒则为阳性[6]。

骨髓细胞形态学检测时，将200个细胞形态计数换算成为百分率，计算瘤细胞阳性所占比例，其中细胞表现为菊花团样、典型成团细胞、砌墙样排列、条索状纤维丝样物质都是按阳性计数。

1.4 统计学方法

采用SPSS21.0处理相关数据，计数资料实施χ2检验，计量资料实施t检验，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

比较两组骨髓细胞形态学及细胞化学染色检测阳性率：观察组骨髓细胞形态学及细胞化学染色检测阳性率明显高于对照组(P<0.05)，差异有统计学意义；能够在显微镜下看到紫红色条索状纤维样物质及瘤细胞为呈菊花团排列。见表1。

表1 两组骨髓细胞形态学、细胞化学染色检验阳性率比较[n(%)]

3 讨论

在神经母细胞瘤的筛查当中，最为准确有效的检验方法就是单克隆F3抗体，其不光检测结果准确，还具有很高的特异度与灵敏度，除了单克隆F3抗体检测之外，骨髓细胞形态学联合细胞化学染色检测也是神经母细胞瘤检测中常用的检测方法。其中骨髓细胞形态学检测是一种非常重要检查方法，神经母细胞瘤细胞形态学有别于其他瘤细胞的一个典型特点就是其瘤细胞表现为菊花式、成团聚集排列，在为其开展细胞形态学检查过程中，能够看到瘤细胞间存在嗜酸性粉红色纤维丝状物，其原粒细胞及淋巴细胞都没有这一特征，并且神经母细胞瘤还存在伴随有粒系、红、巨三系不受抑制的特点，在神经母细胞团周围以及散在神经母细胞间能够看到紫红色粗细不等的条索样纤维物质，该形态特征是区分神经母细胞瘤与急性粒细胞白血症、急性淋巴细胞白血病的重要依据，临床上一旦发现患者存在疑似神经母细胞瘤症状，应将骨髓涂片细胞学检查作为常规检查项目[7]。在细胞化学染色检查中，NAP染色能够对粒细胞当中的NPA活性予以反应，一些肿瘤患者的NAP增高可能与机体的炎症反应有关，该种染色方法在神经母细胞瘤的筛查当中并不具备特异性；POX染色主要是对细胞当中的过氧化物酶活性予以反应，这主要是血细胞当中所包含的过氧化物酶，作为粒细胞当中含量最多的一种蛋白质本文中两组检测结果均为阴性，这也可以看出所有瘤细胞当中都没有包含此酶，那么在实际应用中，就需要保证检验人员具备丰富的经验，对检测结果予以准确计数；PAS主要是对细胞当中的黏蛋白、黏多糖、糖原含量予以准确反映，结合胞质当中糖原含量及种类的不同，表现为粗细不等的块状物质、红色颗粒或者是表现为均匀红色，本文中观察组中出现1例弱阳性，可能是因为药物、发热或者是机体感染的影响。总的来说，本文中所提及几种化学染色方法，其灵敏度及特异性最高的为POX，最低的为NAP，临床上可以将化学染色作为骨髓细胞形态学检测的辅助诊断方法，以便于进一步提升诊断准确率[8]。

综上所述，本文研究结果显示观察组骨髓细胞形态学及细胞化学染色检测阳性率明显高于对照组(P<0.05)差异有统计学意义；能够在显微镜下看到紫红色条索状纤维样物质及瘤细胞为呈菊花团排列。由此可见，骨髓细胞形态学联合细胞化学染色检测应用于神经母细胞瘤的诊断当中，具有较高的诊断准确率，其中一个非常重要的鉴别方法就是在形态学中看到紫红色条索状纤维样物质及瘤细胞为呈菊花团排列。