血浆miR-92a和miR-93在急性ST段抬高型心肌梗死诊断及近期预后评估中的临床价值分析

修明文, 边毓尧

(河北中石油中心医院急诊科, 河北 廊坊 065000)

急性心肌梗死是威胁生命的冠状动脉疾病发作，是尚未解决的具有高发病率和死亡率的临床问题。血液供应不足和氧化应激导致心脏组织坏死，病理重塑和左心功能不全[1,2]。急性心肌梗死可分为两类：ST段抬高型心肌梗死(STEMI)和非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)。在STEMI中，梗死相关的动脉通常被富含纤维蛋白的血块完全阻塞，而立即再灌注治疗是最初的方法。早期准确诊断STEMI对于获得最佳治疗效果至关重要[3,4]。因此，迫切需要能够补充和改善当前STEMI诊断策略的新方法。近期研究发现，在STEMI期间血液和血浆中的几种miRNA，例如miR-1、miR-133a、miR-208b、miR-499和miR-328的水平发生了变化，这表明循环miRNA的诊断在早期的STEMI中具有诊断价值[5]。本研究拟探讨血浆miR-92a和miR-93在急性ST段抬高型心肌梗死诊断及近期预后评估中的临床价值分析，为急性ST段抬高型心肌梗死的诊断及治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1一般资料:收集2016年8月至2018年9月在我院急诊科确诊的急性ST段抬高型心肌梗死患者160例为病例组。所有病例符合中华医学会心血管病学分会2007年制定的不稳定型心绞痛和非ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南诊断标准，其中男80例，女80例，年龄为42～74岁，平均年龄(59.1±13.6)岁。另外招募了152名健康的成年人志愿者(心电图正常，无心血管疾病史)作为对照组，对照组年龄和性别情况。性别、年龄、BMI、吸烟、饮酒、高血压、高脂血症等一般资料无统计学差异(P<0.05)，见表1。该研究得到本院研究伦理委员会的批准，并在每个患者的知情同意下收集样品。纳入标准：急性缺血性胸痛；心电图异常(病理性Q波，ST段抬高或压抑)；心肌坏死标志物(肌钙蛋白(cTns)和肌酸激酶(CK))的水平超过正常范围上限的两倍。这些患者出现症状后不超过24h入院。排除标准：先前有MI或经皮冠状动脉介入治疗(PCI)，任何血液系统疾病，急性或慢性感染，严重肝功能不全，肾衰竭(肾小球滤过率(GFR)<15mL/min/1.73m2或经透析)的患者，或已知或排除治疗的恶性肿瘤。终止、退出标准：患者依从性差；出现严重不良事件及其他原因致使继续试验困难。

1.2方 法

1.2.1各指标的测定:病例组及对照组患者清晨空腹及肱静脉抽血；取静脉血10mL置于EDTA抗凝管中，3000rpm离心，l0min，分离血浆(分别于入院后发病4h、发病8h、发病12h、发病24h、发病48h、发病72h、发病1周)；同时取静脉血10mL置于无菌管中，室温静置30min，3000rpm离心，l0min，分离血清。贝克曼AU-480全自动生化分析仪(美国库尔特公司)分析仪测定TG、HDL-C、LDL-C(TG、HDL-C、LDL-C试剂盒为贝克曼原厂自带试剂)，德铁HBS-1096B酶标仪(南京德铁实验设备有限公司)测定hs-CRP、NT-pro BNP(hs-CRP、NT-pro BNP ELISA试剂盒购于上海恒远生物科技有限公司)。使用TRIzol试剂(卡尔斯巴德生命技术公司，美国，56488)从血浆分离总RNA。PrimeScriptTM RT预混液(中国大连宝生物，48789)用于合成第一链cDNA。然后使用Power SYBR Green PCR Master Mix(Carlsbad，CA，65486)和GAPDH作为内部对照，通过使用7900HT快速实时PCR系统(美国Applied Biosystems)进行定量聚合酶链反应(qPCR)。miR-92a、miR-93、GAPDH引物序列由上海生工科技合成。miR-92a正向：5'-GTCTGTAGCGTCAGTAAATGCCTGGATAGCCCTGTGATGCA-3'和miR-92a反向：5'-CTGTCTGTAGCTAGCGTAGAATGACGGTGAGCCTTGGAGTG-3'。miR-93正向：3'-CGTGCGTGCGATGCCAACAGTTGGTCGAGTTTTG-3'，miR-93反向：3'-CGGTGACCCCATGTGACAGTAAGCTGCGTCCT-3'GAPDH正向：5，-CTGTGCAGTCAGTCAGTCCTGTGACGTGA-3，和GAPDH反向：5，-CTGTCGGTGCCCATGCAGTCAGTTGCTGTGAGTGC-3，(反向)。RT反应在以下条件下进行：42℃15min; 85℃，5s;然后保持在4℃。PCR反应在95℃下进行30s，然后在7900HT实时PCR系统中进行40个循环(95℃5s和60℃34s)。分析RT-PCR结果并表示为CT的相对miRNA表达(阈值循环)值，然后将其转换为倍数变化。

1.2.2随访:对急性STEMI患者出院后进行为期3个月的随访，随访主要不良心血管事件(MACE)发生情况，主要包括：心绞痛发作、再次血运重建、新发心力衰竭、中心原性死亡等。

2 结 果

2.1两组一般情况比较:病例组性别、年龄、BMI、吸烟、饮酒、高血压、高脂血症等一般资料与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组一般情况比较

2.2两组miR-92a、miR-93指标比较：与对照组比较，病例组发病4h、发病8h、发病12h、发病24h、发病48h血浆miR-92a水平降低，miR-93水平升高(P<0.05)；病例组发病72h、发病1周血浆miR-92a、miR-93水平无明显变化(P>0.05)。时间分布显示，miR-92a于急性ST段抬高型心肌梗死发病4h开始降低，12h达到最低值，72h后趋于正常；miR-93于发病急性ST段抬高型心肌梗死发病4h开始升高，8h达到最高值，72h后亦趋于正常。见表2。

表2 两组miR-92a miR-93指标比较

2.3两组血脂指标比较：病例组HDL-C水平低于对照组，TG、LDL-C水平高于对照组(P<0.05)，见表3。

表3 两组血脂指标比较

2.4两组hs-CRP、NT-proBNP指标比较：病例组hs-CRP、NT-proBNP水平高于对照组(P<0.05)，见表4。

表4 两组hs-CRP NT-proBNP指标比较

2.5miR-92a、miR-93与各指标相关性分析：miR-92a与HDL-C，miR-93与TG、LDL-C、hs-CRP、NT-proBNP正相关，miR-92a与TG、LDL-C、hs-CRP、NT-proBNP，miR-93与HDL-C负相关(P<0.05)，见表5。

表5 miR-92a miR-93与各指标相关性分析

2.6各指标诊断急性ST段抬高型心肌梗死的价值分析：诊断急性ST段抬高型心肌梗死时，miR-93的AUC、敏感性、特异性、准确性、cutoff分别为0.851、76.3%、79.6%、82.6%、2.35；miR-92a的AUC、敏感性、特异性、准确性、cutoff分别为0.846、75.9%、72.6%、81.1%、3.59。，见表6、图1。

表6 各指标诊断急性ST段抬高型心肌梗死的价值分析

图1 miR-93、miR-92a诊断急性ST段抬高型心肌梗死的ROC曲线

2.7miR-92a、miR-93表达水平与患者预后分析：160例急性STEMI患者确诊3个月内共发生20例(12.5%)MACE，其中心绞痛发作7例、中心原性死亡5例、心力衰竭8例，无靶血管再次血运重建。以中位数为界限分组，miR-92a高表达组MACE发生率明显高于miR-92a低表达组(P<0.05)，miR-93高表达组MACE发生率明显低于miR-93低表达组(P<0.05)，见表7。

表7 不同miR-92a miR-93表达水平患者预后比较n(%)

2.8急性ST段抬高型心肌梗死患者MACE发生情况的多元Logistic回归分析：以急性ST段抬高型心肌梗死患者是否发生MACE为应变量(是=1，否=0)，患者基本特征、血清学指标及miR-93、miR-92a等作为自变量进行多因素logistic逐步回归分析，结果发现高水平miR-93及低水平miR-92a为急性ST段抬高型心肌梗死患者发生MACE的危险因素(OR=4.62、5.02，P<0.05)，见表8。

表8 急性ST段抬高型心肌梗死患者MACE发生情况的多元Logistic回归分析

3 讨 论

MicroRNA(miRNA)是长度为17-27个核苷酸的小型非编码细胞RNA。通过与靶标mRNA的3'UTR配对，它们通过翻译抑制和转录物切割充当基因表达的序列特异性调节子。最近的研究表明，miRNA是许多疾病发病机理中的重要调节剂。AMI中涉及许多循环miRNA。这些包括心脏特异性miRNA(miR-208a)和非心脏特异性miRNA(miR-126，miR-328，miR-134)[6]。

miR-92a可通过阻断蛋白激酶B信号通路抑制心血管内皮细胞增殖和集落形成，在急性心肌炎、类风湿关节炎、骨关节炎中，miR-92a表达降低，提示miR-92a在此类疾病中发挥重要调控作用[7]。miR-92a在几种肌肉疾病中均被下调，例如杜兴氏肌营养不良症和失神经引起的肌肉萎缩症。miR-92a的过度表达可能导致肌肉肥大。据报道，与炎症相关的miRNA miR-93与多种心血管疾病的发病机制有关。血浆样品的微阵列筛选显示与健康对照组相比，肺动脉高压患者的miR-93水平降低。此外，这些患者的血浆miR-93水平是存活率的重要预测指标[8]。不稳定型心绞痛患者的血清中miR-93也失调。通过应用包括miR-132，miR-93和miR-186的miRNA面板，明显提高了不稳定型心绞痛的诊断准确性[9]。此外，转录因子cMyb，NOTCH3受体和非转移性黑色素瘤蛋白B是miR-93的潜在靶标。这两个miRNA的调节异常可能与心脏损害以外的病理状况有关[10]。

本研究显示，病例组发病4h、发病8h、发病12h、发病24h、发病48h血浆miR-92a水平降低，miR-93水平升高；同时，时间分布显示，miR-92a于STEMI发病4h开始降低；miR-93于STEMI发病4h开始升高；且miR-92a与HDL-C，miR-93与TG、LDL-C、hs-CRP、NT-proBNP正相关关系明显；miR-92a与TG、LDL-C、hs-CRP、NT-proBNP，miR-93与HDL-C负相关关系明显；这提示，miR-92a、miR-93在STEMI早期即可发生变化，具有较高的敏感性；此外，ROC分析表明，这两种miR-92a、miR-93可能是STEMI的诊断标志物。预后比较显示，miR-92a高表达组MACE发生率高于miR-92a低表达组，miR-93高表达组MACE发生率低于miR-93低表达组；高水平miR-93及低水平miR-92a均为急性ST段抬高型心肌梗死患者发生MACE的危险因素；这说明，高水平的miR-93以及低水平的miR-92a均为急性ST段抬高型心肌梗死患者不良预后危险因素。

综上所述，急性ST段抬高型心肌梗死患者血浆miR-92a降低，miR-93升高；miR-92a、miR-93可作为诊断急性ST段抬高型心肌梗死的早期敏感生物标志物；高水平的miR-93以及低水平的miR-92a均为急性ST段抬高型心肌梗死患者不良预后危险因素。