前列腺小体外泌蛋白检测在慢性前列腺炎诊断中的应用

赵寅生，易小敏，屠昌明，黄其峰，吴黎黎，贾健安

(中国人民解放军联勤保障部队第901医院a.检验科，b.泌尿外科，合肥 230031)

前列腺炎是成年男性中的一种常见病，相关研究表明成年男性中前列腺炎发病率约为8.2%[1]，慢性前列腺炎对患者生活质量具有严重的生理及心理上的影响[2]。根据1997年美国国立卫生研究院（National Institutes of Health，NIH）对前列腺炎的分类，即 NIH分类法[3]，前列腺炎可分为3型：NIH-Ⅱ型：慢性细菌性前列腺炎；NIH-Ⅲ型：慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征；NIH-Ⅳ型：无症状前列腺炎。由于缺乏特异性的诊断指标，前列腺炎的诊断及病情评估需要较多的临床评估方法及鉴别诊断，传统的检查方法包括尿液分析、前列腺按摩液检查和直肠指检[4]，后两种方法对患者具有一定侵入性，患者就诊体验较差，且不同操作者之间存在较大的操作差异，因此寻找一种无侵入性同时又准确的诊断指标具有重要的临床意义。

前列腺小体是由前列腺上皮细胞分泌的一种纳米级囊泡，在精液及前列腺液中含量较多。通常情况下，少量前列腺小体分泌至尿道中，随尿液排出[5]，当前列腺发生炎症时，尿液中前列腺小体中部分蛋白成分可显著升高，其中前列腺小体外泌蛋白（prostatic exosomal protein，PSEP）升高明显，是慢性前列腺炎的潜在指标，因此本研究评价了该指标在慢性前列腺炎诊断中的价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象 依据《前列腺炎诊断治疗指南(2014版)》[6]中慢性前列腺炎临床诊断标准，纳入自 2018年7～10月于我院就诊的慢性前列腺炎患者 102例，选择同期于我院体检健康的70例健康男性作为对照组。慢性前列腺炎患者及健康对照组均常规行尿常规分析、PSEP测定。在经过医院伦理委员会讨论通过后进行该研究。同时排除急性前列腺炎患者、48h内有性生活者、前列腺癌患者、有严重的脏器功能疾病、由于行为障碍不能配合者、二周以内插入导尿管者、有严重的肛周部位疾病及不适合做前列腺按摩检测者、病情危重，难以对安全性和有效性做出确切评价者。

1.2 试剂和仪器 酶标仪购自于美国伯乐公司，PSEP试剂盒购自江苏太仓昂科生物技术有限公司。

1.3 方法 采集慢性前列腺炎患者前列腺按摩前中段尿，收集健康体检者随机尿，均置入－80℃冰箱保存备用。根据PSEP试剂盒操作说明对收集的尿液样本采用间接 ELISA方法进行检测，根据试剂盒内的不同浓度标准品A值建立实验标准曲线，将患者标本的检测数值同标准孔数值进行比较，计算测试样本的PSEP浓度值。比较前列腺炎组与对照组尿液PSEP浓度的差异，同时建立ROC曲线来初步确定一个最佳诊断界值(Cutoff值),据此值来计算灵敏度和特异度。

1.4 统计学分析 运用SPSS 16.0统计软件进行统计学分析。慢性前列腺炎患者和健康对照组的PSEP差异比较采用秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 前列腺炎组与对照组PSEP比较 前列腺炎组与对照组中位年龄分别为36（25～56）岁及38（27～59）岁，年龄分布差异无统计学意义（P＞0.05）。两组尿液PSEP结果均呈非正态分布。前列腺炎组PSEP显著高于对照组[3.002（1.728～3.966）ng/ml vs 0.869（0.565～1.094）ng/ml]，差异有统计学意义（P＜0.001）。

2.2 ROC结果 见图1。对前列腺小体外泄蛋白检测结果进行ROC曲线拟合，ROC曲线下面积为0.922，选择Youden指数最大的点对应的值作为慢性前列腺炎的诊断标准，得出Cutoff值为1.238 ng/ml,相对应的敏感度为86.27%，特异度为90%。

图1 ROC曲线

3 讨论

慢性前列腺炎的症状包括骨盆区域疼痛、尿道刺激症、神经症状及性功能障碍，其临床表现缺少特异性，诊断主要依靠前列腺按摩液常规检查[6]（前列腺炎诊断治疗指南），患者对前列腺按摩液常规检查接收度较差，从而间接影响了疾病的诊治，因此寻找一种方便快捷的无侵入性指标具有重要的意义。

前列腺小体结构为亚细胞的囊泡状，生理功能多样广泛，直径为40～500nm，通过前列腺上皮细胞胞吐作用后再分泌进入前列腺液和尿液[5，7]。前列腺小体的脂质成分大部分为鞘磷脂，也含有少量的核酸成分，如DNA，mRNA，miRNA等小片段。同时前列腺小体还包含百余种蛋白质成分：其中包括酶类，运输和结构类蛋白，信号转导蛋白，GTP结合蛋白，注释蛋白，分子伴侣等等[7]。

由于解剖结构的关系，前列腺小体容易进入前列腺液和尿液中。随着研究深入，PSEP与前列腺疾病的关系引起研究者的广泛关注，因组织受到炎细胞浸润，慢性前列腺炎患者体内会释放出各种活性物质和趋化因子，在精液中前列腺小体的抗菌功能比中性粒细胞发挥更强。前列腺小体的抗氧化性可起到中和白细胞的ROS作用。前列腺小体具有抗氧化抗菌功能的关键是其特殊的脂质结构和成分，因此在前列腺炎疾病中可以检测到前列腺小体蛋白[8].

本研究中采用了ELISA方法，检测了102例慢性前列腺炎患者及70例健康体检者尿液中PSEP含量。与健康人群相比，慢性前列腺炎患者PSEP浓度平均高达3.002（1.728～3.966）ng/ml，显著高于健康人群[0.869（0.565～1.094）ng/ml]（P＜0.001）。其鉴别慢性前列腺炎患者与健康人群的ROC曲线下面积高达0.922，高于相关研究结果[9]，本研究中根据Youden指数选择的最佳实验室临界值设为1.238 ng/ml，与相关研究结果接近[10]，稍高于试剂盒推荐的慢性前列腺炎诊断临界值（1.2ng/ml），提示各实验室在实际应用时应建立本实验室的参考区间。

由于PSEP检测使用尿液标本，具有极好的患者依从性，同时其诊断敏感度与特异度均较高，因此具备成为慢性前列腺炎诊断指标的潜力，具有较好的临床应用价值。