羊肚菌多糖对小鼠抗运动疲劳及耐缺氧的影响*

曹 亮

（燕山大学体育学院，河北 秦皇岛 066004）

近年来，随着食用菌相关研究不断深入，人们利用的食用菌已存有350多种[1]。食用菌主要是指可食用的子实体较大的真菌，主要包括木耳（Auricularia auricula）、松茸 （Tricholoma matsutake）、松露（Tuber spp.）等，羊肚菌（Morchella esculenta）作为食用菌当中较为珍贵的菌类，其外形与羊肚形状较为接近，因此而得名羊肚菌[2]。羊肚菌生长环境较为特殊，大多生长在火山附近，产量较为稀少且珍贵[3]。现阶段，针对羊肚菌的研究不断深入，作为公认的珍稀食用菌种类，一方面需要通过深层发酵技术来获取羊肚菌的菌丝体[4]。根据相关调查研究显示，羊肚菌具有一定的药用功效，对于人体喘咳、食积气滞等具有良好的治疗效果[5]。食用羊肚菌不仅能够有效增强人体免疫力，同时还具备抗疲劳、抗衰老的作用，在保健方面发挥着良好功效。现代社会随着人们生活压力的不断增加，日常工作的压力和疲劳度大大提高，长期处于亚健康状态下，导致健康状况受到影响，而对抗疲劳的相关药物的需求不断提高。通过抗疲劳试验，实现对羊肚菌多糖成分的有效提取，并测定小鼠服用多糖后对运动功能所起到的有效促进作用，进而分析多糖在对抗疲劳和增强机体运动能力方面的效果。

1 材料

1.1 试验动物

ICR小鼠共选取60只雄性，将重量控制在28 g左右，所购入小鼠均由中国农业大学动物中心所提供，并具有相应的合格证号SCXK2016-0013[6]。

1.2 主要材料与试剂

羊肚菌菌株由雪开野生灵芝销售有限公司所提供，所购入羊肚菌均符合研究标准；试验中所用的血乳酸试剂盒以及检测试剂盒，均由上海依科赛生物制品有效公司提供，符合试验所需要使用的材料与试剂标准。

1.3 主要仪器

便携式血乳酸测定仪，德国EKF lactate scout公司；超微粉碎机，康和机械制造有效公司。试验主要仪器有可见光光度计、旋转蒸发仪、电热恒温水浴锅以及离心机等。

2 方法

2.1 羊肚菌多糖的制备

胞外多糖的提取：提取羊肚菌培养液300 mL，过滤，并在50℃恒温水中进行搅拌从而使体积浓缩；为去除蛋白，采用Sevage方法，将去蛋白后的培养液加入其3倍体积的95%乙醇在-20℃沉降24 h，析出絮状白色物质，以4 000 r·min-1离心20 min得到白色沉淀，加入50 mL蒸馏水溶解后，50℃水浴除去样品中残留的乙醇，得到胞外多糖，备用经过相关操作后，最终得出胞外多糖留着后续试验操作备用[7]。

胞内多糖的提取：为获取菌丝沉淀物，采用蒸馏水离心洗涤的方式进行，通过将水浴温度控制在85℃恒温条件下，按照50∶1的比例增加去离子水，整个浸提时间控制在120 min，在经过离心去除菌丝、离心去沉淀等操作后，最终得到胞内多糖[8]。

采用乙醇对羊肚菌内的多糖进行相应的提取，得知羊肚菌多糖主要是由摩尔比1∶1.059的甘露糖与半乳糖组成。将提取得到的羊肚菌多糖调制成一定的浓度，作为试验的主要材料。

2.2 试验动物分组与给药

试验中，将每组小鼠15只，分4个组进行试验，各小组需要保持在正常饲养的情况下，对照组小鼠给予去离子水（10 mg·kg-1）灌胃，低剂量、中剂量、高剂量组分别灌胃羊肚菌多糖10 mg·kg-1、20 mg·kg-1、30 mg·kg-1，灌胃持续时间为 30 d[10]，所有试验均在小鼠灌胃羊肚菌多糖30 min后进行相关操作。

2.3 负重游泳时间测定试验

小鼠负重游泳测试放置在水温28℃的水中，并让各个小组分别进行负重游泳试验，游泳箱内的水深控制在35 cm左右。在试验过程当中，对小鼠进行铅丝捆绑负重，详细记录小鼠负重游泳的时间。

2.4 爬杆时间测定试验

将小鼠放置在长30 cm的玻璃棒上，玻璃棒的直径控制在10 mm左右，从而使小鼠身体各部位肌肉保持紧张感觉。在整个试验过程当中，注意记录小鼠攀爬玻璃棒的疲劳时间，详细记录爬杆时间。

2.5 常压耐缺氧时间测定试验

将小鼠放置在放有15 g石灰的大瓶中，在小鼠进入大瓶后及时进行瓶口的密封，根据实际情况详细记录小鼠耐缺氧时间。

2.6 生化指标的测定方法

2.6.1 血清尿素氮含量

对小鼠进行末次灌胃羊肚菌多糖30 min后，将小鼠放于试验用游泳池中进行游泳，泳池温度约为35℃，游泳90 min后，对小鼠进行采血，同时分离血清，测其中尿素氮含量.

2.6.2 肝糖原含量

对小鼠进行末次灌胃羊肚菌多糖30 min后，将小鼠放于试验用游泳池中进行游泳，泳池温度约为35℃，游泳90 min后，处死后进行取小鼠肝组织200 mg，将其匀浆，检测肝糖原含量[11]。

2.6.3 血乳酸含量

对小鼠进行末次灌胃30 min后，将小鼠尾部系上铅丝，重量为其身体重量的5%，进行负重游泳，泳池水温约为35℃，游泳90 min后，休息20 min，从小鼠眼球位置取血，测血乳酸含量。

2.6.4 TNF-α和IL-6含量检测

根据ELISA试剂盒的相关说明书进行血清含量的检测。

3 结果与分析

3.1 羊肚菌多糖对小鼠负重游泳、爬杆及常压耐缺氧时间的影响

羊肚菌多糖对小鼠负重游泳、爬杆、耐缺氧时间的影响情况见表1。

表1 羊肚菌多糖对小鼠负重游泳、爬杆、耐缺氧时间的影响Tab.1 Effects of Morchella esculenta polysaccharides on weightbearing swimming,climbing pole and hypoxia tolerance time in mice

根据表1相关数据可知，在经过灌胃羊肚菌多糖后的小鼠，其各项运动指标都发生了显著变化，游泳时间得到了明显增加，由对照组的（13.25±3.05） min，提高到高剂量组的（53.52±3.02） min，同时小鼠负重游泳的时间也将随着剂量的提升而得到延长，充分说明羊肚菌多糖剂量的用量越大，小鼠耐缺氧时间则延长越久[12]。充分证明羊肚菌多糖增强小鼠运动能力的积极作用，在抗疲劳和耐缺氧方面具有良好效果。

3.2 羊肚菌多糖对小鼠生化指标的影响

羊肚菌多糖对小鼠各项生化指标的影响情况见表2。

表2 羊肚菌多糖对小鼠各项生化指标的影响Tab.2 Effect of Morchella esculenta polysaccharides on biochemical indexes in mice

根据表2结果显示，经过灌胃羊肚菌多糖后的小鼠，其生化指标得到了明显提高，随着灌胃剂量的不断增加，其体内生化指标的数据也有相应变化。其中，最明显的变化特征为小鼠体内血清尿素氮的含量，随着羊肚菌剂量的增加而出现了显著降低，对照组尿素氮含量为 (8.76±0.21)mmol·L-1；低剂量、中剂量、高剂量组尿素氮含量分别为（7.24±0.44） mmol·L-1、 （5.93 ± 0.15） mmol·L-1、 （4.49 ±0.36） mmol·L-1，尤其是在羊肚菌多糖剂量达到20 mg·kg-1时，其体内血清尿素氮含量显著下降[13]。小鼠的运动能力，将随着羊肚菌多糖剂量的增加得到明显增强，不仅有效提高小鼠运动后疲劳的有效恢复，同时也使得恢复速度得到提高。因此，试验结果表明，灌胃羊肚菌多糖的小鼠抗疲劳能力得到了有效增强。

4 结论

试验中，经过灌胃羊肚菌多糖的小鼠其运动能力以及抗疲劳能力得到有效增强，根据研究结果显示小鼠的各项生理生化指标都得到了提高。随着灌胃剂量的增加，小鼠在参与负重游泳时的游泳时间得到了显著延长，小鼠的耐缺氧时间也得到了显著的提高。除此之外，经过灌胃羊肚菌多糖后的小鼠，其体内血乳酸以及血清尿素含量都出现了显著下降的特征，小鼠体内的肝糖原含量则得到了显著增加。因此，试验结果表明，羊肚菌多糖能够有效增强小鼠运动能力，提高运动后疲劳恢复效果，并有效增强小鼠的抗疲劳性。