血清THBS2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

范冲冲,叶圣昌,陈贤真,李雪影,乔建瓯

(上海交通大学医学院附属第九人民医院呼吸内科,上海200011)

据《2018年全球癌症统计数据》获知，在185个国家36种癌症中肺癌作为临床最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率均居于首位,占癌症死亡总人数的18.4%[1]。作为占据肺癌病理类型80%的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)[2]，其起病隐匿，无特异性临床表现,且容易发生远处转移及区域淋巴结转移，故多数患者被确诊时已处于临床晚期，治疗效果及生存率均不乐观。因此，探索非小细胞肺癌的发病机制，寻找可以作为早期诊断的标志物，对于提高临床诊断率和患者的生存率至关重要。血小板反应蛋白-2(THBS2)是由基质成纤维细胞和内皮细胞等细胞释放的一种150 kDa钙结合蛋白，参与细胞骨架组织的组成，细胞运动，血管生成和细胞凋亡等多种细胞活动[3-5]。目前研究发现，THBS2在多种肿瘤组织和血清中高表达，并且与肿瘤进展和总体存活率密切相关。由此，本研究通过检测血清THBS2水平，来探讨其与非小细胞肺癌患者临床病理特征之间的关系，为临床诊断、治疗非小细胞肺癌及判断预后提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 资料

选取我院 2019年3月-2019年9月收治的69例非小细胞肺癌患者及50例健康体检者为研究对象，所有研究对象排除有肺部感染、慢性阻塞性肺疾病、哮喘等肺部良性疾病，排除合并其它脏器疾病，合并自身免疫性疾病，有其它恶性肿瘤病史，手术前均未进行放、化疗及免疫治疗。临床分期按照国际抗癌联盟新推出的第八版肺癌 TNM 分期标准，分为Ⅰ期19例，Ⅱ期20例，Ⅲ期9例，Ⅳ期21例。本研究获得医院伦理委员会的批准，所用的标本均得到患者的知情同意。

1.2 标本采集与检测方法

非小细胞肺癌患者于入院第二天清晨空腹采集肘正中静脉血3-5 ml于肝素抗凝试管内，健康对照组于体检当日采集，采集的血浆标本进行离心处理，3 000 r/min 离心10 min，取上层血清放于-80℃下储存备用。THBS2的检测严格按照THBS2酶联免疫吸附试验(ELISA) 检测试剂盒(生产厂家:美国 R&D System) 说明书进行操作，然后检测 OD 值，带入标准曲线方程中计算出样品中THBS2浓度。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 两组研究对象血清THBS2水平的比较

ELISA 检测结果显示，非小细胞肺癌患者血清THBS2水平显著高于健康对照组[(28.37±8.24) ng/mL vs (18.99±5.30) ng/mL]，且两组比较差异有统计学意义(t=7.543，P=0.000) ，见图1。

2.2 非小细胞肺癌患者血清THBS2水平与临床病理特征的关系

血清 THBS2水平与非小细胞肺癌患者的年龄、性别、吸烟、病理类型及分化程度无关(P>0.05)；而与非小细胞肺癌肿瘤直径、临床分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),见表1。

图1 两组研对象血清THBS2的水平比较

表1 非小细胞肺癌患者血清THBS2水平与临床病理特征的关系

2.3 血清THBS2的临床诊断价值

通过绘制所得的ROC曲线分析，可知在THBS2 的血清水平为(25 ng/mL) 时，为最佳截点，曲线下面积(AUC)为0.813(P<0.001，95% CI:0.738-0.888)，敏感度为66.7%和特异度为90.0%，见图 2。

图2 血清THBS2在非小细胞肺癌中的诊断价值

3 讨论

血小板反应蛋白2(THBS2)属于由基质成纤维细胞，内皮细胞和免疫细胞分泌的基质细胞钙结合糖蛋白家族的一员。其与各种细胞表面受体、生长因子、细胞因子和蛋白酶相互作用，以参与细胞基质粘附、运动、趋化性、伤口愈合、血管抑制等[6]。目前，有关THBS2在多种肿瘤中的表达及作用的研究结果尚存在争议。一方面，THBS2在胃癌中具有抗血管生成，抗肿瘤转移的作用[7]，另一方面，THBS2在胰腺癌[8]、结直肠癌[9]、膀胱癌[10]、乳腺癌[11]等肿瘤中有促进肿瘤细胞生长作用，与肿瘤进展和总体存活率密切相关。研究发现，THBS2可通过增强AXL依赖的生态位成纤维细胞活化来增强成纤维细胞的作用，进而参与乳腺癌的上皮-间质转化[11]。在肺癌方面，Weng TY等[12]发现，肺腺癌和鳞癌组织中THBS2 mRNA的表达量显著增加，且与临床结局显著相关，免疫组织化学显示THBS2的表达水平与肿瘤大小和分期具有显著相关性，进一步研究提示，与THBS2共表达的COL5A2，MXRA5和VCAN基因可能在肺癌的发生发展中具有重要意义。Liu等[13]发现THBS2能够通过诱导肺癌细胞中基质金属蛋白酶-13的产生来促进肿瘤转移。

本研究结果显示，THBS2在非小细胞肺癌患者血清中较健康对照组高表达，且有统计学意义。预示着血清THBS2的水平可能成为非小细胞肺癌潜在的诊断指标。通过分析THBS2与非小细胞肺癌患者临床病理特征的关系发现，肿瘤组织直径越大、临床分期越高、淋巴结发生转移，对应受检患者血清中THBS2水平越高，说明THBS2的高表达与非小细胞肺癌的发生发展密切相关。这与Weng TY等[12]在微阵列基因表达和深入的蛋白质组学分析方面的研究的结果具有相同的趋势和意义。近年来，THBS2作为新的肿瘤标志物在肿瘤的辅助诊断中发挥重要作用。Wang X等[14]发现，胰腺癌患者血浆中THBS2水平显著升高，且与临床病理特征具有显著相关性，可作为预测结直肠癌患者临床结果的潜在生物标志物。Zhang J等人[15]研究表明，肝细胞癌患者血清中THBS2的水平显著升高，且高水平的血清THBS2与肝细胞癌患者的微血管侵犯和TNM分期显着相关,THBS2水平高的肝细胞癌患者的DFS和总生存期明显短于THBS2水平低的患者,认为THBS2可用作肝细胞癌患者预后的候选血清生物标志物。THBS2在多种肿瘤中的表达水平与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移及不良预后密切相关，这与我们目前的研究结果相一致。通过分析ROC曲线可知，血清THBS2诊断非小细胞肺癌的敏感性为66.7%，特异性为90.00%，ROC曲线下面积为0.81。这意味着血清THBS2诊断非小细胞肺癌的特异性较高，有望成为非小细胞肺癌筛查和诊断的潜在肿瘤标志物，具有较高的临床应用价值。

综上所述，THBS2与非小细胞肺癌的发生与发展密切相关，在非小细胞肺癌患者血清中高表达，且与临床病理特征显著相关，可作为非小细胞肺癌潜在的生物标志物，有较高的诊断和临床评估价值。但本研究样本量较小，尚需扩大临床病例数来进一步评价THBS2对非小细胞肺癌的诊断价值。还可进一步设计前瞻性研究，探讨血清THBS2的表达水平与非小细胞肺癌患者生存期及预后的关系。